Dosagem de Bilirrubina

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CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL 
 
IDENTIFICAÇÃO 
1. Acadêmico: 
2. Matrícula: 
3. Curso: 4. Turma: 
5. Disciplina: 
6. Tutor(a) Externo(a): 
 
DADOS DA PRÁTICA 
1. Título: Dosagem de Bilirrubina 
2. Semestre: 
3. Data: 
 
INTRODUÇÃO 
O método de determinação de bilirrubina mais amplamente usado é a reação diazo, que 
distingue duas frações: direta e indireta. Aspectos sobre essas determinações serão 
abordados no próximo tópico. 
Na literatura científica, a reação orgânica para a determinação de bilirrubina é conhecida 
como Sims-Horn, e consiste na diazotização e formação de azobilirrubina vermelha, que tem 
absorção em comprimento de onda na faixa de 500 a 540nm. 
As doenças hepatocelulares e a obstrução das vias biliares são as causas mais frequentes de 
alterações séricas da bilirrubina. 
A maioria dos testes comerciais disponíveis permite a análise em soro ou plasma 
(com uso de EDTA ou heparina), livres de hemólise, uma vez que a hemoglobina 
pode causar resultados falsamente aumentados. 
Como as bilirrubinas são oxidadas pela ação da luz, as amostras de sangue devem 
ser protegidas da exposição direta a luz artificial ou solar. O analito é estável por três 
dias, quando a amostra é armazenada entre 2 e 8°C, protegida da luz. 
 
 
OBJETIVOS 
• identificar as características da bilirrubina tanto no organismo como na análise 
clínica; 
• reconhecer o funcionamento do espectrofotômetro; 
• determinar procedimentos para coleta, a fim de favorecer maior estabilização 
da amostra; 
• relacionar os resultados de análise com possíveis interferentes. 
 
 
MATERIAIS 
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Béquer de 50 mL; 
· Caneta marcadora; 
· Cubetas; 
 
· Espectrofotômetro; 
· Jaleco; 
· Kit para determinação de bilirrubina; 
 
· Luvas descartáveis; 
· Micropipeta de 1000 µL; 
· Óculos de proteção; 
 
· Pera; 
· Pipeta graduada de 5 mL; 
· Ponteira para micropipeta; 
 
· Recipiente de descarte; 
· Suporte para micropipeta; 
· Suporte para pipeta graduada; 
 
· Suporte para tubo de coleta; 
· Suporte para tubo de ensaio; 
· Tubo de coleta com amostra de soro; 
· Tubos de ensaio. 
 
METODOLOGIA 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Higienize as mãos na pia. Coloque os equipamentos de proteção individual 
localizados no “Armário de EPIs. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco 
branco, luvas de procedimento e óculos de proteção. 
 
2. IDENTIFICANDO OS TUBOS 
 
Identifique o primeiro tubo de ensaio com a sigla “BrD”, segundo tubo de ensaio 
com a letra “B” e o terceiro tubo de ensaio com a sigla “BrT”. Identifique a primeira 
cubeta com a sigla “BrD”, a segunda cubeta com a letra “B” e a terceira cubeta com 
a sigla “BrT”. 
 
3. PREPARANDO A AMOSTRA 
 
Ajuste o volume da micropipeta de 1000 µL para 200 µL e pipete 200 µL da amostra 
de soro e transfira para o tubo de ensaio B. Repita o processo anterior, pipete 200 
µL da amostra e transfira para os tubos de ensaio BrD e BrT. Descarte a ponteira. 
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Pipete 200 µL do reativo sulfanílico e transfira para o tubo de ensaio B. Descarte a 
ponteira. Pipete 200 µL do diazorreativo e transfira para o tubo de ensaio BrD. 
Descarte a ponteira. Repita o processo anterior, pipete 200 µL do diazorreativo e 
transfira para o tubo de ensaio BrT. Descarte a ponteira. Utilizando a pipeta 
graduada, transfira 2,4 mL de água destilada para o tubo BrD. Limpe a pipeta 
graduada. Utilizando a pipeta graduada, transfira 2,4 mL de água destilada para o 
tubo B. Limpe a pipeta graduada. Utilizando a pipeta graduada, transfira 2,4 mL de 
acelerador para o tubo BrT. Limpe a pipeta graduada. Homogeneíze os tubos por 
inversão por 20 segundos. 
 
4. REALIZANDO A LEITURA 
 
Ligue o espectrofotômetro e configure para o comprimento de onda de 530 nm. 
Ajuste o volume da micropipeta para 1000 µL. Pipete 1000 µL do tubo de ensaio B e 
transfira para a cubeta B. Descarte a ponteira. Abra o espectrofotômetro, mova a 
cubeta para o equipamento e feche o equipamento. Zere o equipamento. Abra e 
retire a cubeta B do espectrofotômetro. Aguarde 5 minutos. Pipete 1000 µL do tubo 
de ensaio BrD e transfira para a cubeta BrD. Descarte a ponteira. Mova a cubeta 
para o equipamento e feche. Realize a leitura. Abra e retire a cubeta BrD do 
espectrofotômetro. Realize o cálculo, utilizando a fórmula bilirrubina direta (mg/dL) 
= ABD (Absorbância da bilirrubina direta) x 25,31. Aguarde 15 minutos. Pipete 1000 
µL do tubo de ensaio BrT e transfira para a cubeta BrT. Descarte a ponteira. Mova a 
cubeta para o equipamento e feche. Realize a leitura. Abra e retire a cubeta BrT do 
espectrofotômetro. Realize o cálculo, utilizando a fórmula bilirrubina total (mg/dL) = 
ABT (Absorbância da bilirrubina total) x 25,31. Realize o cálculo da bilirrubina 
indireta subtraindo o valor da bilirrubina total pelo valor da bilirrubina direta (BrI = 
BrT - BrD). Preencha o laudo com o resultado encontrado. 
 
 
 
 
 
 
RESULTADOS E DISCUSSÕES 
O aumento na dosagem de bilirrubina permite a análise de um quadro de icterícia, que 
compreende a coloração visível dos tecidos pela bile, que geralmente ocorre com taxas acima 
de 2,5mg/dL. As causas mais comuns de aumento da bilirrubina direta são as doenças 
hepatocelulares e as obstruções das vias biliares. 
Já os casos de valores altos de bilirrubina indireta correlacionam-se com as seguintes causas: 
aumento na produção de bilirrubina, decorrente de hemólise; diminuição do transporte de 
bilirrubina, por ação de medicamentos e anticorpos; e defeito na captação de bilirrubina 
(deficiência ou bloqueio das lingandinas) ou em sua conjugação (icterícia fisiológica do 
recém-nascido, doença de Gilbert, etc.). 
 
 
 
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REGISTRO FOTOGRÁFICO 
 
 
REFERÊNCIAS