Dosagem de Creatina Quinase

Prévia do material em texto

CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL 
 
IDENTIFICAÇÃO 
1. Acadêmico: 
2. Matrícula: 
3. Curso: 4. Turma: 
5. Disciplina: Bioquímica Clínica 
6. Tutor(a) Externo(a): 
 
DADOS DA PRÁTICA 
1. Título: Dosagem de Creatina Quinase 
2. Semestre 
3. Data: 
 
INTRODUÇÃO 
O colesterol é um esteroide alicíclico cuja estrutura química é formada por um per-
hidrociclopentenofenantreno, um grupo hidroxila, um centro insaturado, uma cadeia 
hidrocarbônica ramificada e dois grupos metil. É formado por 27 carbonos provenientes da 
acetil-coenzima A (acetil-CoA), insolúvel em água e solúvel em solventes não polares. Esse 
composto é fundamental no organismo humano, uma vez que compõe a membrana 
plasmática e participa da síntese dos sais biliares, além de ser precursor de hormônios 
esteroides e vitamina D. 
O colesterol pode ser encontrado em sua forma livre (não esterificado) ou esterificada 
(ésteres de colesterol), sendo sua menor parte encontrada na forma livre. O 
transporte dessas moléculas pelo plasma ocorre por meio das lipoproteínas, 
macromoléculas solúveis em água. 
 
OBJETIVOS 
• identificar a função e a importância de todos os reagentes necessários para o 
funcionamento do kit, que deve ser específico para a dosagem de CK; 
• aplicar os cálculos de linearidade e absorbâncias; 
• analisar os resultados obtidos e interpretá-los corretamente. 
 
 
MATERIAIS 
 
Água destilada; • Béquer de 50 mL; • Caneta marcadora; • Cubetas; • Espectrofotômetro; • 
Kit para determinação de creatina quinase; • Micropipeta de 100 µL; • Micropipeta de 1000 
µL; • Ponteira para micropipeta; • Recipiente de descarte; • Suporte para micropipeta; • 
Suporte para tubo de coleta; • Suporte para tubo de ensaio; • Tubo de coleta com amostra 
de soro; • Tubo de ensaio. 
CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
 
 
METODOLOGIA 
SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 Higienize as mãos na pia. Coloque os equipamentos de proteção individual localizados 
no “Armário de EPIs”. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco branco, luvas de 
procedimento e óculos de proteção. 
 
 IDENTIFICANDO OS TUBOS 
 Identifique o primeiro tubo de ensaio com a sigla A. Identifique o terceiro tubo de 
ensaio com a sigla P. Identifique a primeira cubeta com a sigla A. Identifique a segunda 
cubeta com a sigla B. Identifique a terceira cubeta com a sigla P. 
 
 PREPARANDO OS REAGENTES 
Ajuste o volume da micropipeta de 1000 µL para 800 µL. Pipete 800 µL do tampão. 
Transfira a solução pipetada para o tubo de ensaio A (amostra). Pipete, novamente, 800 
µL do tampão e transfira para o tubo P. Descarte a ponteira. Ajuste o volume da 
micropipeta de 1000 µL para 200 µL. Pipete 200 µL do substrato. Transfira a solução 
pipetada para o tubo de ensaio A (amostra). Pipete, novamente, 200 µL do substrato e 
transfira para o tubo P. Descarte a ponteira. Adicione a água destilada no recipiente da 
solução padrão. Tampe o recipiente. Aguarde a solução do recipiente repousar por 10 
minutos. Homogeneíze o recipiente do padrão, por inversão, 5 vezes. 
 
PREPARANDO A AMOSTRA 
 Ajuste o volume da micropipeta de 100 µL para 20 µL. Pipete 20 µL do padrão. Transfira 
a solução pipetada para o tubo de ensaio P (padrão). Descarte a ponteira. Pipete 20 µL 
da amostra de soro. Transfira a solução pipetada para o tubo de ensaio A (amostra). 
Descarte a ponteira. Homogeneíze os tubos A e P por 20 segundos. 
 
 ZERANDO O EQUIPAMENTO 
 Ligue o espectrofotômetro. Configure o espectrofotômetro para o comprimento de 
onda de 340 nm. Abra o equipamento. Ajuste o volume da micropipeta para 1000 µL. 
Pipete 1000 µL de água destilada. Transfira o conteúdo para a cubeta B. Descarte a 
ponteira. Coloque a cubeta do branco (B) no equipamento. Feche o equipamento. Zere 
o equipamento. Abra e retire a cubeta B do espectrofotômetro. 
 
REALIZANDO LEITURA DO PADRÃO 
Pipete 1000 µL do conteúdo do tubo P. Transfira o conteúdo para a cubeta P. Descarte 
a ponteira. Aguarde por 2 minutos. Coloque a cubeta com a solução padrão (P) no 
espectrofotômetro, feche o equipamento e realize a leitura. Retire a cubeta P. Aguarde 
por 1 minuto. Coloque a cubeta P no espectrofotômetro e repita a leitura da 
absorbância. Retire a cubeta P. Aguarde por 2 minutos. Coloque a cubeta P no 
espectrofotômetro e repita a leitura da absorbância. Retire a cubeta P. Aguarde por 3 
minutos. Coloque a cubeta P no espectrofotômetro e repita a leitura da absorbância. 
Retire a cubeta P. 
 
REALIZANDO LEITURA DA AMOSTRA 
 Pipete 1000 µL do conteúdo do tubo A. Transfira o conteúdo para a cubeta A. Descarte 
a ponteira. Aguarde por 2 minutos. Coloque a cubeta com a amostra (A) e realize a 
leitura. Abra o equipamento e retire a cubeta. Aguarde por 1 minuto. Coloque a cubeta 
CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
 
 
A no espectrofotômetro e repita a leitura da absorbância. Retire a cubeta A. Aguarde 
por 2 minutos. Coloque a cubeta A no espectrofotômetro e repita a leitura da 
absorbância. Retire a cubeta A. Aguarde por 3 minutos. Coloque a cubeta A no 
espectrofotômetro e repita a leitura da absorbância. Retire a cubeta A. Feche o 
equipamento. Preencha o laudo com o resultado. 
 
RESULTADOS E DISCUSSÕES 
Esta técnica é aplicada em laboratório de análises clínicas, mediante solicitação médica de 
exame, podendo ter direcionamentos para o diagnóstico de patologias específicas baseadas 
em sua alteração de concentração. A dosagem de CK é indicada para o acompanhamento e 
diagnóstico de lesões cardíacas, especialmente infarto agudo do miocárdio. Além de lesão 
cardíaca, o aumento de CK total pode ser observado em distrofia muscular, danos cerebrais 
agudos, convulsões, alcoolismo, hipotireoidismo, acromegalia e uso de cocaína. Neste 
experimento, você vai realizar a dosagem de CK total, que consiste em um método cinético 
ultravioleta (UV) de referência da International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), 
usando um kit específico de dosagem, aparelho de fotômetro, pipetas, cubetas 
termostatizadas e cronômetro. 
 
 
 
 
 
 
REGISTRO FOTOGRÁFICO 
 
REFERÊNCIAS 
 
 
 
CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD