Colesterol Total (1)

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CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL 
 
IDENTIFICAÇÃO 
 
 
 
 
 
 
DADOS DA PRÁTICA 
 
INTRODUÇÃO 
O colesterol é um esteroide alicíclico cuja estrutura química é formada por um 
per-hidrociclopentenofenantreno, um grupo hidroxila, um centro insaturado, 
uma cadeia hidrocarbônica ramificada e dois grupos metil. É formado por 27 
carbonos provenientes da acetil-coenzima A (acetil-CoA), insolúvel em água e 
solúvel em solventes não polares. Esse composto é fundamental no organismo 
humano, uma vez que compõe a membrana plasmática e participa da síntese 
dos sais biliares, além de ser precursor de hormônios esteroides e vitamina D. 
Considerado o principal esterol sintetizado no tecido animal, o colesterol é 
obtido, em parte, por meio da alimentação, e em parte por síntese nas células, 
principalmente as hepáticas e intestinais, que, diante de uma redução da 
produção do colesterol por ingestão alimentar, aumentam a síntese para suprir 
essa demanda. Em contrapartida, quando há o aumento da ingestão de 
colesterol na dieta, a biossíntese endógena diminui. O colesterol pode ser 
encontrado em sua forma livre (não esterificado) ou esterificada (ésteres de 
colesterol), sendo sua menor parte encontrada na forma livre. O transporte 
dessas moléculas pelo plasma ocorre por meio das lipoproteínas, 
macromoléculas solúveis em água. O colesterol contido nessas moléculas 
pode estar na forma esterificada ou livre. Com base na densidade das 
lipoproteínas, é possível classificá-las em quatro tipos principais: quilomícron 
(QM); lipoproteína de alta densidade (HDL, high-density lipoprotein); 
lipoproteína de baixa densidade (LDL, lowdensity lipoprotein); e lipoproteína 
de densidade muito baixa (VLDL, very-low-density lipoprotein). Entre elas, a 
LDL é a principal molécula associada aos distúrbios dislipidêmicos, pois tem a 
 
 
 
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maior quantidade de colesterol em sua estrutura, sendo a mais associada a 
aterosclerose e outros distúrbios cardiovasculares 
 
OBJETIVOS 
Aprender sobre o colesterol, uma molécula orgânica da classe dos lipídeos 
que tem papel fundamental para a homeostasia celular. Essa molécula tem 
sido avaliada no plasma sanguíneo ou soro a fim de monitorar seus índices, 
que frequentemente têm sido associados a comorbidades. A redução do 
colesterol total tem sido parte integrante de campanhas de saúde pública, bem 
como de modelos de previsão de risco de doenças cardiovasculares. 
Este experimento permite avaliar os níveis de colesterol total no soro/plasma 
pelo método enzimático. 
• reconhecer a estrutura química do colesterol total; 
• avaliar os níveis de colesterol total no plasma/soro; 
• interpretar os resultados obtidos no teste bioquímico. 
 
 
 
 
MATERIAIS 
• Banho-maria; • Caneta marcadora; • Cubeta; • Espectrofotômetro; • Kit 
Colesterol total (reagente de trabalho e solução padrão de colesterol); • 
Micropipeta de 100 µL; • Micropipeta de 1000 µL; • Ponteira para micropipeta; 
• Recipiente de descarte; • Suporte para micropipeta; • Suporte para tubo de 
coleta; • Suporte para tubo de ensaio; • Tubo de coleta com amostra de soro; 
• Tubo de ensaio. 
 
METODOLOGIA 
Envolve o uso de enzimas específicas para reagir com o colesterol presente 
no sangue e gerar uma reação que resulta em uma mudança de cor. A 
 
 
 
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intensidade da cor gerada está diretamente relacionada à concentração de 
colesterol total na amostra. A leitura dessa intensidade de cor é feita em 
espectrofotômetro. 
Passos principais do método enzimático: 
1. Coleta da amostra de sangue: A amostra de sangue geralmente é 
coletada em um tubo contendo anticoagulante ou diretamente em um 
tubo de coleta seco. 
2. Preparação da amostra: A amostra de sangue é preparada para a 
análise. Em alguns casos, pode ser necessário separar o soro ou 
plasma da parte celular do sangue. 
3. Adição de reagentes: Reagentes contendo enzimas como a colesterol 
oxidase, peroxidase e outras podem ser adicionados à amostra. O 
colesterol presente na amostra será convertido em um composto 
colorido, através da ação dessas enzimas. 
4. Reação química: O colesterol é oxigenado pela enzima colesterol 
oxidase, liberando peróxido de hidrogênio (H₂O₂), que é então utilizado 
em uma reação com um indicador colorido, gerando uma mudança de 
cor na solução. 
5. Leitura da absorbância: A intensidade da cor gerada é medida por um 
espectrofotômetro a uma determinada longitude de onda (geralmente 
cerca de 500 nm). A concentração de colesterol total é proporcional à 
absorbância medida. 
6. Cálculo da concentração de colesterol: A partir da absorbância 
medida, o valor da concentração de colesterol total é calculado 
utilizando uma curva padrão previamente determinada. 
 
 
RESULTADOS E DISCUSSÕES 
1. Qual é o conceito da espectrofotometria? 
 
 
 
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A espectrofotometria é uma técnica que mede a quantidade de luz 
absorvida ou transmitida por uma amostra. A intensidade de absorção 
está relacionada à concentração de substâncias na amostra, com base 
na Lei de Beer-Lambert. 
2. O que é absorbância e transmitância? 
• Absorbância é a medida da luz absorvida pela amostra, sendo 
proporcional à concentração da substância. 
• Transmitância é a fração de luz que passa pela amostra, sendo 
inversamente proporcional à absorbância. 
3. Explique o tipo de reação bioquímica que ocorreu na realização do 
teste? 
No teste de colesterol total, o colesterol é oxidado pela colesterol 
oxidase, gerando peróxido de hidrogênio (H₂O₂). Este, por sua vez, 
reage com um substrato cromogênico na presença de peroxidase, 
formando um produto colorido. A intensidade da cor gerada é medida 
espectrofotometricamente e está diretamente relacionada à 
concentração de colesterol. 
 
 
REGISTRO FOTOGRÁFICO 
 
 
REFERÊNCIAS 
DEVLIN, T. M. Manual de bioquímica com correlações clínicas. 7. ed. São 
Paulo: Blucher, 2011. 
 
 
 
 
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JAMA, 2001, v. 285, n. 19, p. 2486-2497. Disponível em: 
http://dx.doi.org/10.1001/jama.285.19.2486. Acesso em: 7 jul. 2021. 
 
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Acesso em: 9 jul. 2021. 
 
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Acesso em: 7 jul. 2021. 
 
MCPHERSON, Richard A.; PINCUS, Matthew R.; HENRY, John Bernard. 
Diagnósticos clínicos e tratamento por métodos laboratoriais de Henry. 
21. ed. São Paulo: Manole, 2012. 
 
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Lehninger. 7. ed. São Paulo: Artmed, 2019.