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0 VERÔNICA VIANA SANTANA AVALIAÇÃO DA CONFORMIDADE DE ENTEROBACTERIACEAE EM AMOSTRAS DE CARCAÇAS DE BOVINOS DE UM ABATEDOURO FRIGORÍFICO DE BOVINOS Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao curso de Medicina Veterinária da Faculdade Facimp Wyden, como requisito parcial para obtenção do título de Médica Veterinária. Orientador(a): Profª. Dra. Arannadia Barbosa Silva IMPERATRIZ 2024 1 VERÔNICA VIANA SANTANA AVALIAÇÃO DA CONFORMIDADE DE ENTEROBACTERIACEAE EM AMOSTRAS DE CARCAÇAS DE BOVINOS DE UM ABATEDOURO FRIGORÍFICO DE BOVINOS Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao curso de Medicina Veterinária da Faculdade Facimp Wyden, como requisito parcial para obtenção do título de Médica Veterinária. Aprovada em ___/___/_____ BANCA EXAMINADORA _________________________________________________________ Prof. Dra. Arannadia Barbosa Silva (Orientadora) Doutora em Biodiversidade e Saúde Faculdade Facimp Wyden _________________________________________________________ Prof. Luiz Eduardo Cruz dos Santos Correia Doutor em Genética e Melhoramento Animal Faculdade Facimp Wyden _________________________________________________________ Prof. Msc. Laudicéia de Jesus Silva Especialista em Emergência e Intensivismo Faculdade Facimp Wyden 2 AVALIAÇÃO DA CONFORMIDADE DE ENTEROBACTERIACEAE EM AMOSTRAS DE CARCAÇAS DE BOVINOS DE UM ABATEDOURO FRIGORÍFICO DE BOVINOS Verônica Viana Santana1 Arannadia Barbosa Silva2 Resumo: O Maranhão é um grande produtor de carne bovina, mas a presença de enterobactérias, como Salmonella e Escherichia coli, pode comprometer a segurança alimentar. Essas bactérias se proliferam facilmente na carne devido à sua composição. A avaliação microbiológica das carcaças bovinas é essencial para identificar a presença desses patógenos, garantindo que os produtos atendam aos padrões de segurança alimentar. O presente estudo teve como objetivo avaliar a conformidade de análises realizadas em meias-carcaças de bovinos quanto à presença de enterobactérias em um abatedouro frigorífico de bovinos do município de Imperatriz do Maranhão. Foi realizada uma pesquisa em 105 meias carcaças de bovino em um abatedouro de bovinos no município de Imperatriz, no Estado do Maranhão, com levantamento de dados referente ao período de dez meses, compreendendo o mês de janeiro de 2024 à outubro de 2024. O estudo se deu em caráter retrospectivo, tendo como base de dados registros de laudos de análises microbiológicas realizadas e arquivadas pelo Controle de Qualidade do abatedouro frigorífico. Cada amostra foi coletada em quatro pontos da meia carcaça, seguindo o procedimento de coleta usando esponjas estéreis. Os resultados apresentados revelou a eficácia de programas de autocontrole, uma vez que não foram encontrados resultados classificados como inaceitável para Enterobacteriaceae em nenhuma das amostras analisadas nas carcaças de bovinos. Palavras-chave: Segurança de alimentos; Carne bovina; Enterobacteriaceae; Avaliação Microbiológica; Controle de Qualidade. 1 Acadêmica, 10º período do curso de Medicina Veterinária da Faculdade de Imperatriz – FACIMP WYDEN, (e- mail: veronicavianavet@gmail.com). 2 Orientadora, Doutora em Biodiversidade e Saúde, Professora do curso Medicina Veterinária da Faculdade de Imperatriz – FACIMP WYDEN, (e-mail: arannadiasilva@gmail.com). 3 Abstract: Maranhão is a large producer of beef, but the presence of enterobacteria, such as Salmonella and Escherichia coli, can compromise food safety. These bacteria easily proliferate in meat due to its composition. The microbiological evaluation of beef carcasses is essential to identify the presence of these pathogens, ensuring that the products meet food safety standards. The present study aimed to evaluate the compliance of analyzes carried out on half-carcasses of cattle regarding the presence of enterobacteria in a cattle slaughterhouse in the municipality of Imperatriz do Maranhão. A survey was carried out on 105 half-carcasses of cattle in a cattle slaughterhouse in the municipality of Imperatriz, in the State of Maranhão, with data collection for a period of ten months, covering the month of January 2024 to October 2024. The study This was done retrospectively, using as a database records of microbiological analysis reports carried out and archived by the Quality Control of the slaughterhouse. Each sample was collected at four points on the half carcass, following the collection procedure using sterile sponges. The results presented revealed the effectiveness of self-control programs, since no results classified as unacceptable for Enterobacteriaceae were found in any of the samples analyzed from cattle carcasses. Keywords: Food safety; Beef; Enterobacteriaceae; Microbiological Assessment; Quality control. 1 INTRODUÇÃO O Maranhão se destaca na bovinocultura de corte, com um rebanho estimado em mais de 4 milhões de cabeças, sendo um dos principais produtores da Região Nordeste (IBGE, 2023). Além disso, ocupa o 12º lugar como maior rebanho bovino do país e o 2º maior rebanho bovino do nordeste com efetivo bovino de 7.576.806 e bubalinos 83.490 (AGED-MA, 2016). Essa produção significativa não apenas sustenta a economia local, mas também fornece uma fonte vital de proteína para a população. No entanto, a contaminação por patógenos em carcaças bovinas pode comprometer a segurança de alimentos, levando a surtos de doenças que 4 afetam tanto a saúde pública quanto a confiança do consumidor. Estudos microbiológicos locais são essenciais para identificar e mitigar esses riscos, garantindo que a carne oferecida atenda aos padrões de qualidade exigidos e contribua para a saúde da população. A Segurança de Alimentos se refere à garantia da qualidade dos alimentos com relação aos fatores nutricionais e sanitários, segundo o Codex Alimentarius, que é um programa conjunto entre a Organização das Nações Unidas para a Agricultura e a Alimentação (FAO) e a Organização Mundial da Saúde (OMS) onde constam as normas, diretrizes, padrões e conceitua a segurança de alimentos como uma garantia de que os alimentos não causarão efeitos adversos à saúde do consumidor quando preparados e/ou consumidos de acordo com o uso a que se destinam. Para o Codex, este sistema deve ser aplicado desde a criação dos animais até o momento do alimento ser consumido (TESSARI, 2008). De acordo com a OMS, 600 milhões de pessoas adoecem e 420 mil morrem anualmente devido a doenças transmitidas por alimentos (DTA). Crianças menores de 5 anos representam 40% desse número (OMS, 2020). Esses dados mostram que a vigilância microbiológica é fundamental para reduzir a incidência de doenças transmitidas por alimentos. É notório que a contaminação microbiológica dos alimentos denota como uma das mais ameaçadoras à saúde humana, portanto, a realização de pesquisas microbiológicas pode aprimorar as práticas de manejo e processamento de carne, além de promover a identificação de falhas nos protocolos de higiene e controle de qualidade o que permitirá a implementação de medidas corretivas, assegurando uma produção mais segura nos abatedouros da região. Ao fortalecer a cadeia produtiva e assegurar que a carne bovina do Maranhão seja segura e de alta qualidade, os estudos locais não apenas beneficiam os agricultorese os abatedouros, mas também garantem a saúde e o bem-estar da população da região. Assim, a pesquisa microbiológica em carcaças de bovinos no município de Imperatriz é uma estratégia crucial para sustentar e expandir a importância da bovinocultura de corte no estado. A carne para ser considerada apta ao consumo humano necessita prontamente de cuidados de manipulação e armazenamento, desde o abate dos animais até a sua comercialização. Devido a suas características intrínsecas, como composição química, elevada atividade de água e pH próximo à neutralidade, são um ótimo meio para a multiplicação de bactérias altamente patogênicas como a Salmonella spp. e a Escherichia coli (STEC), que pertencem à família Enterobacteriaceae. Assim, conhecer e prevenir a presença de microrganismos que encontram na carne um ambiente propício para a sua proliferação 5 constituem fatores determinantes para a preservação de sua qualidade (FONTOURA, 2006). Diante desse cenário, a avaliação da conformidade das amostras de carcaças quanto à presença de enterobactérias bem como o controle desses patógenos torna-se indispensável para garantir a segurança alimentar e reduzir a incidência de doenças de origem alimentar. Além disso, a identificação de possíveis pontos críticos no processo de abate e manipulação de carcaças pode contribuir para a melhoria contínua das práticas sanitárias no frigorífico, resultando em produtos mais seguros e de qualidade (CARVALHO et al., 2017). Este estudo é relevante por sua contribuição para a segurança de alimentos, visto que a carne bovina é rica em proteínas e apresentam um bom equilíbrio de aminoácidos essenciais, figurando como um dos principais alimentos consumidos pela população no geral. Avaliar a presença de enterobactérias em carcaças de bovinos é crucial para identificar riscos à saúde pública e propor melhorias nos processos sanitários, garantindo a conformidade com as normas de qualidade e, assim, fortalecendo a confiança do consumidor nesse nicho da indústria alimentícia. Considerando a relevância do exposto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a conformidade de análises realizadas em meias-carcaças de bovinos quanto à presença de enterobactérias em um abatedouro frigorífico de bovinos do município de Imperatriz do Maranhão. 2 REFERENCIAL TEÓRICO 2.1 Segurança de Alimentos e Doenças Transmitidas por Alimentos A segurança de alimentos na produção de carne bovina surgiu como uma resposta às crises sanitárias e à necessidade crescente de garantir produtos seguros ao consumidor. O termo refere-se à proteção dos alimentos contra riscos biológicos, químicos e físicos que possam prejudicar a saúde humana. A partir da década de 1980, casos de doenças como a encefalopatia espongiforme bovina (EEB) elevaram a preocupação com a saúde pública, levando à implementação de regulamentos mais rigorosos. Instituições como a Organização das Nações Unidas para Alimentação e a Agricultura (FAO) e a Organização Mundial da Saúde (OMS) começaram a promover diretrizes que garantissem práticas de manejo e controle de qualidade na indústria. Assim, a segurança alimentar se consolidou como um pilar essencial para a 6 sustentabilidade e confiança na produção de carne (FAO, 2021). Há um número relevante de manipuladores que apresentam desconhecimento dos perigos de contaminação biológica, física e química; não sabem como evitá-las e desconhecem ou menosprezam as técnicas de manipulação na preparação dos alimentos. Há muitos estudos que comprovam a ineficácia do controle tradicionalmente empregado, que não são capazes de evitar a ocorrência de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA). Podemos classificar as DTAs entre as de origem física, química e microbiológica (PONATH et al., 2016). 2.2 Dados Epidemiológicos de Surtos Causados por Transmissão Hídrica e Alimentar No Brasil, entre os anos de 2007 a 2023, houve 11.809 surtos de Doenças de Transmissão Hídrica e Alimentar (DHTA), e em 2023 19.671 indivíduos doentes, tendo os restaurantes ocupado o segundo lugar das ocorrências, com 14,6% dos casos, e o primeiro lugar ocupado pela residência com 34%. No que diz respeito ao perfil epidemiológico de alimentos causadores, a carne bovina ocupa o 5º lugar com 5,6 %. Quanto aos agentes etiológicos mais identificadores durante esse período de 16 anos estão E. coli em primeiro lugar com 34,8% e Salmonella spp em segundo lugar com 9,6%, ambas pertencentes à família das Enterobacteriaceae (SINAN/SVSA/MINISTÉRIO DA SAÚDE, 2024). Os surtos podem ser evitados por meio da produção de alimentos seguros; para tanto, basta adotar medidas de controle da qualidade desde a origem do alimento até seu consumo. Neste processo, a atuação do manipulador seguindo as Boas Práticas (BP), recebendo treinamentos constantes para assimilar e praticar os procedimentos garantidores da segurança e consequente minimização dos perigos de origem alimentar (PONATH et al., 2016). 2.2 Enterobactérias Normas de Conformidade Microbiológica no Brasil As enterobactérias são uma família de bactérias gram-negativas que incluem diversos patógenos com potencial para contaminar carcaças de bovinos, como Salmonella spp. e E. coli. A presença dessas bactérias em carcaças é um indicador de práticas inadequadas de higiene durante o processamento, pois elas podem ser introduzidas por contaminação fecal ou manuseio inadequado. Estudos demonstram que a contaminação por Enterobacteriaceae está diretamente 7 relacionada à qualidade da carne, podendo resultar em sérios riscos à saúde pública, como infecções gastrointestinais (HOFFMANN et al., 2019). Portanto, a vigilância microbiológica nas carcaças é essencial para garantir a segurança do alimento e minimizar surtos de doenças transmitidas por alimentos. Quando os alimentos contaminados são consumidos, as enterobactérias podem causar doenças gastrointestinais, como diarreia e febre, que, em casos mais severos, podem levar a complicações graves. Portanto, o monitoramento e controle dessas bactérias são essenciais para garantir a segurança alimentar e proteger a saúde pública. 2.3 Normas de Conformidade Microbiológica e Parâmetros Aceitos A legislação brasileira estabelece diretrizes rigorosas para o controle microbiológico em produtos de origem animal, visando garantir a segurança alimentar e a saúde pública. A Instrução Normativa (IN) nº 60, de 2011, do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), estabelece padrões para a vigilância microbiológica de carnes, incluindo a coleta e análise de enterobactérias em carcaças de bovinos. Essa norma é parte de um conjunto mais amplo de regulamentações que inclui o Decreto nº 9.013, de 2017, que regula o controle de produtos de origem animal, assegurando que os estabelecimentos cumpram requisitos de higiene e qualidade (BRASIL, 2017). Essas medidas são essenciais para minimizar riscos de contaminação e surtos de doenças alimentares, promovendo a confiança do consumidor nos produtos brasileiros. Para pesquisa de microrganismo indicador de Enterobacteriaceae conforme o plano de amostragem estabelecido pela Instrução Normativa Nº 60, de 20 de dezembro de 2018, em cada sessão de coleta são selecionadas cinco meia carcaças de bovinos machos, com iguais chances de amostrar todos os lotes e turnos de abate, cada sessão representa uma amostra. Inicialmente, as coletas deverão ser realizadas em todos os dias que houver abate, e após o período de 28 dias consecutivos de resultados aceitáveis, a frequência de coletaserá reduzida para um dia por semana. Em seguida, após 28 resultados aceitáveis consecutivos nas coletas semanais, a frequência passará a ser quinzenal (BRASIL, 2018). Esse ciclo representa o ciclo usado no estabelecimento até a data em que esse trabalho foi escrito. Se acontecer deste ciclo se romper, de modo que haja algum resultado inaceitável, a empresa deverá entrar com uma medida de correção, o controle retorna ao seu início, e torna a fazer as coletas diariamente até conseguir progredir novamente (BRASIL, 2018). 8 A RDC nº 331/2019 da ANVISA estabelece parâmetros de avaliação microbiológica para alimentos, incluindo produtos de origem animal. No que diz respeito às enterobactérias, a resolução determina que a presença dessas bactérias não deve ser detectada em 25 g de amostra para carnes e produtos cárneos. Além disso, a RDC estabelece que, em casos de produtos prontos para o consumo, o limite aceitável para enterobactérias deve ser de até 1,5 log10 UFC/cm² logaritmo da média diária (Unidades Formadoras de Colônias por grama) (ANVISA, 2019). Esses limites visam garantir que os alimentos estejam livres de patógenos que possam representar riscos à saúde dos consumidores. De acordo com o Codex Alimentarius, os principais métodos utilizados para a detecção e quantificação de enterobactérias em carcaças bovinas em abatedouros frigoríficos incluem inoculação em meios de enriquecimento, como caldo Rappaport ou caldo Lactose que promovem o crescimento de enterobactérias, ainda assim, outros métodos de cultura também são aceitos, o Ágar Bile Vermelho Violeta Glicose (VRBG) usado para a detecção e enumeração de Enterobacteriaceae em laticínios, carnes, frios e outros alimentos. Meios seletivos como o ágar MacConkey ou ágar XLD (Xilose Lisina Desoxicolato), permitem isolar enterobactérias, especialmente E. coli e Salmonella spp. Para confirmar a presença de enterobactérias específicas, colônias suspeitas são submetidas a testes bioquímicos, como a fermentação de açúcares e a produção de gás. Além disso, técnicas moleculares, como a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), são empregadas para a detecção rápida e precisa de patógenos, permitindo a identificação específica. A quantificação das enterobactérias é realizada com base no número de colônias formadas em placas de cultivo, expressas em UFC/g (Unidades Formadoras de Colônias por grama) ou UFC/cm², possibilitando uma avaliação adequada da carga microbiana nas amostras. Os resultados são classificados da seguinte forma: Aceitável, se a logarítmica diária for ≤ m, indicando que o processo está sob controle; Intermediário, se a logarítmica diária estiver entre m e M, que representa que há tendência de desvio do processo, salienta-se que, neste caso, a unidade se responsabiliza em identificar a causa e adota ações corretivas e preventivas para restabelecer o controle do processo; Por fim, inaceitável, se a média logarítmica diária for ≥ M (BRASIL,2018). Os valores referenciais mencionados anteriormente estão corretamente descritos no quadro 1. Quadro 1. Valores referenciais para interpretação dos resultados em meias carcaças quentes. 9 Enterobacteriaceae Nível Aceitável Nível Intermediário Nível Inaceitável m 1,5 log UFC/cm² M11 monitorar a temperatura durante o armazenamento de carnes, garantindo que os produtos sejam mantidos em condições seguras. Além disso, pode incluir a verificação de práticas de higiene dos manipuladores e a análise de contaminações microbiológicas em amostras de alimentos. A implementação eficaz do APPCC não apenas cumpre os requisitos legais, como as diretrizes estabelecidas pela ANVISA, mas também contribui para a confiança do consumidor nos produtos. Como afirmado por Vieira (2017), "a adoção do APPCC é um compromisso com a qualidade e a segurança alimentar, que beneficia toda a cadeia produtiva." Dessa forma, o sistema APPCC se destaca como uma estratégia essencial para a promoção da saúde pública e a minimização de riscos alimentares. 3 METODOLOGIA Foi realizada uma pesquisa em caráter retrospectivo em um abatedouro de bovinos no município de Imperatriz, no Estado do Maranhão, que possui Serviço de Inspeção Federal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), que dispõe de abordagens higiênico-sanitárias adequadas para certificação de exportação de produtos para inúmeros países. O levantamento de dados é referente ao período de dez meses, compreendendo o mês de janeiro de 2024 a outubro de 2024, sendo provenientes de registros de laudos de análises microbiológicas realizadas e arquivadas pelo Controle de Qualidade do abatedouro frigorífico. A amostragem objetiva verificar a eficácia das boas práticas de fabricação e dos procedimentos sanitários operacionais durante as operações de abate, além de reduzir a prevalência de agentes patogênicos na superfície de meias carcaças. Cada amostra foi coletada em quatro pontos da meia carcaça, seguindo o procedimento de coleta usando esponjas estéreis, livres de biocida, e sempre após a lavagem final da carcaça no abate, e antes da entrada no resfriamento. A ordem de coleta de cada ponto seguiu o que consta no Manual de Coleta de Amostras de Produtos de Origem Animal conforme estabelece o MAPA: Primeiro ponto – Vazio; Segundo ponto – Peito; Terceiro ponto – Pescoço; Quarto ponto – Alcatra, conforme mostra na figura 1. Com a esponja estéril foram realizados movimentos de varredura na carcaça, sendo dez vezes em sentido horizontal e dez vezes em sentido vertical, representando em cada ponto a área de 100 cm², totalizando a área final de 400 cm² (BRASIL, 2020). 12 Figura 1. Pontos de Coleta de esfregadura de superfície em carcaça bovina com o uso de esponja Fonte: Arquivo Pessoal As amostras coletadas foram identificadas com o número sequencial da carcaça, número do lote, número da câmara que a carcaça irá passar pelo processo de resfriamento, data e hora da coleta, e em seguida foram devidamente alocadas em isopor com os meios refrigerantes para serem destinadas à um laboratório externo ao frigorífico. O método utilizado para detecção e enumeração de Enterobacteriaceae foi o método horizontal em meio de cultura Ágar Bile Vermelho Violeta Glicose, preconizado na ISO 21528- 2, essa técnica é utilizada quando o número de colônias procuradas é superior a cem por mililitro ou por grama de amostra de teste. Figura2. Cultura de amostras coletadas de carcaças de bovinos em meio Ágar Bile Vermelho Violeta Glicose para enumeração de enterobactérias, ISO 21528-2 13 Fonte: Imagens cedidas pelo Laboratório Após o material de coleta ser recepcionado no laboratório, as amostras foram submetidas ao isolamento em até vinte e quatro horas, e caso haja resultado positivo o material necessita ser reanalisado para fins de teste confirmatório por mais quarenta e oito horas, totalizando noventa e seis horas (BRASIL, 2018). 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO Foram avaliadas ao todo 105 meias carcaças de bovinos, cujos resultados das análises microbiológicas de indicadores de Enterobacteriaceae foram realizadas a partir de coletas quinzenais compreendendo o total de vinte e uma amostras referente ao período de janeiro à outubro de 2024. Em caráter interpretativo com relação aos resultados, estes foram classificados a partir de valores de referência para UFC/cm² (unidades formadoras de colônias por centímetro quadrado), e foram divididos da seguinte forma: Aceitável, se a logarítmica diária for ≤ m, indicando que o processo está sob controle; Intermediário, se a logarítmica diária estiver entre m e M, que representa que há tendência de desvio do processo, salienta-se que, neste caso, a unidade se responsabiliza em identificar a causa e adota ações corretivas e preventivas para restabelecer o controle do processo; Por fim, inaceitável, se a média logarítmica diária for ≥ M 14 (BRASIL, 2018). Os valores referenciais mencionados anteriormente estão corretamente descritos no quadro 1. Quadro 1. Valores referenciais para interpretação dos resultados em meias carcaças quentes. Enterobacteriaceae Nível Aceitável Nível Intermediário Nível Inaceitável m 1,5 log UFC/cm² MDisponível em: https://www.gov.br/anvisa/pt-br/assuntos/alimentos/legislacao/rdc-331-2019. Acesso em: 9 set. 2024. ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR ISO 21528-2: Microbiologia da cadeia produtiva de alimentos - Método horizontal para a detecção e enumeração de Enterobacteriaceae - Parte 2: Método de contagem de colônias. 1. ed. Rio de Janeiro, 2017. BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução da Diretoria Colegiada – RDC nº 216, de 15 de setembro de 2004. Diário Oficial da União, Brasília, 17 set. 2004. OMS. World Health Organization. Food safety and food hygiene. Geneva, 2003. VIEIRA, R. A. Importância do APPCC na segurança alimentar. Revista de Saúde Pública, 2017. BRASIL. Instrução Normativa nº 60, de 23 de outubro de 2018. Estabelece procedimentos para a gestão de produtos de origem animal. Diário Oficial da União, Brasília, DF, 25 out. 2018. Seção 1, p. 12. 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