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Biotecnologia Microbiana METABOLISMO Conjunto de reações químicas em um microrganismo Reações químicas de degradação (catabolismo) de substâncias Reações químicas de síntese (anabolismo) de substâncias Degradação de compostos orgânicos em moléculas menores. RESPIRAÇÃO e FERMENTAÇÃO Síntese de compostos orgânicos Açúcares, aminoácidos, nucleotídeos e ácidos nucléicos Tecnologia das fermentações • A fabricação industrial de produtos microbianos normalmente envolve fermentações. A fermentação industrial é um cultivo em larga escala de microrganismos para produzir substâncias de valor comercial. • Recipientes para fermentação industrial são denominados biorreatores, sendo projetados com atenção especial para a aeração e controle de pH e temperatura. • Existem muitos tipos de equipamentos diferentes, mas os mais amplamente utilizados são os biorreatores de agitação contínua. • Os biorreatores são, por vezes, muito grandes, podendo armazenar cerca de 500 mil litros. Fermentadores mais utilizados com microrganismos são aqueles que contam com aeração e agitação mecânica. Sem aeração forçada Agitação é suficiente para suprir o oxigênio necessário ao processo. É o caso dos processos que não necessitam de anaerobiose estrita como a produção de etanol por Saccharomyces cerevisiae, ou de processos aeróbicos. Com aeração forçada O ar deve ser estéril, sem umidade. Utiliza-se ar comprimido. Processos anaeróbicos devem sofrer aeração com nitrogênio ou monóxido de carbono até a saturação do ar e a eliminação do oxigênio. BIORREATORES OU FERMENTADORES Biorreatores para fermentações industrias Fonte: Tortora et al. Microbiologia BIORREATORES Fonte: https://www.gea.com/pt/products/distillation- fermentation/bioreactors/index.jsp Sistemas de produção CONTÍNUO ✓ O substrato é adicionado continuamente de modo que sua concentração fique constante. ✓ Ao mesmo tempo, retira-se o mosto fermentado de modo que o volume total permaneça constante. ✓ A velocidade do crescimento e de consumo do substrato são constantes e vão depender da concentração do “substrato limitante”. ✓ Elimina-se quase totalmente o tempo improdutivo. ✓ Produção de cerveja, fermento de padaria a partir do melaço. DESCONTÍNUO: ✓ Fermentador carregado com a matéria-prima e o inóculo correspondente; ✓ Fermentação prossegue até o esgotamento dos nutrientes. ✓ Concluído o processo e extraído o produto, o fermentador é esvaziado, limpo e esterilizado antes de receber outra carga. ✓ Processo bastante utilizado na indústria farmacêutica. Representação de um processo fermentativo genérico. Fonte: https://goo.gl/g71XZ. https://goo.gl/g71XZm Metabólitos • Os microrganismos na fermentação industrial produzem tanto metabólitos primários, como o etanol, quanto metabólitos secundários como as penicilinas. • Os metabólitos primários são formados ao mesmo tempo que as novas células. • Os metabólitos secundários não são produzidos até que o microrganismo tenha concluído praticamente toda a sua fase de crescimento logarítmico e tenha entrado na fase estacionária do ciclo de crescimento. Metabólitos Primários e Secundários Metabólitos Primários: Produzidos durante a fase exponencial de crescimento do microrganismo Metabólitos Secundários: Sintetizados na fase estacionária de crescimento do microrganismo LINHAGENS INDUSTRIAIS Fermentador economicamente viável: • Microrganismo que se reproduzir rapidamente • Sintetizar grande quantidade do produto a partir de uma matéria-prima barata (soro de leite, melaço de cana, amido de milho). • Não devem ser patogênicas, não produzir toxinas. ✓ O melhoramento das linhagens industriais tende a ser feito pela engenharia genética. ✓ Organismos geneticamente modificados podem não só introduzir melhoras no processo, mas também sintetizar produtos novos. Entendendo “linhagem” • A melhoria de linhagens também é uma atividade em desenvolvimento na microbiologia industrial. • Uma linhagem microbiana difere fisiologicamente de maneira significativa. Exemplo: Uma linhagem tem uma enzima que realiza algumas funções adicionais ou não tem essa habilidade, mas essa não é uma diferença suficiente para mudar sua identidade como espécie. Fermentações anaeróbias ✓A viabilidade econômica de um produto industrial produzido por fermentação anaeróbia é determinada pelo preço do produto, o preço do substrato e o custo de recuperação do produto a partir a cultura. ✓Os substratos mais comuns para fermentações industriais são: ❖O melaço negro que é o líquido residual escuro que sobra depois que o açúcar é recuperado da cana ou xarope de beterraba. ❖O soro de leite é um subproduto da indústria de laticínios. Por exemplo na produção de 2 kg de queijo cerca de 4 litros de soro são gerados. Fermentador anaeróbio Queijos • Os queijos cheddar e suíço são maturados pelo crescimento anaeróbio de bactérias do ácido lácticas em seu interior. Ocorre a fermentação do ácido lático. • No queijo suíço uma espécie de Propionibacterium produz dióxido de carbono que forma os buracos no queijo. Queijos cheddar Queijo suíço Queijos • Queijo azul e Roquefort são maturados por fungos Penicillium inoculados no queijo. • A textura do queijo é macia o bastante para que uma quantidade adequada de oxigênio possa atingir os fungos aeróbios. • O crescimento dos fungos Penicillium é visível na forma de manchas azul-esverdeadas no queijo. Queijo azul Queijo Roquefort Penicillium roquefortii Iogurte • Laticínio ligeiramente ácido, é feito de leite do qual pelo menos um quarto de água é evaporado em uma panela a vácuo. • O leite espesso resultante é inoculado com uma cultura mista de Streptococcus thermophilus principalmente para a produção de ácido, e Lactobacillus delbruekii subespécie bulgaricus, para contribuir com sabor e aroma. • A temperatura de fermentação é de cerca de 45°C por várias horas, durante esse tempo S. thermophilus cresce excessivamente e supera a população de Lactobacillus delbruekii subespécie bulgaricus. • A manutenção de um equilíbrio adequado entre os microrganismos produtores de sabor e de ácido é o segredo da fabricação de iogurte. Lactobacillus delbruekii subespécie bulgaricus Streptococcus thermophilus Iogurte As bactérias utilizam a lactose como fonte de carbono e de energia através de um processo de fermentação láctica. Esta transformação resulta na produção de ácido láctico, responsável pelo caráter ácido deste alimento. No início da fermentação, o valor de pH do leite favorece o desenvolvimento de Streptococcus thermophilus e, com o aumento do teor de ácido láctico Lactobacillus delbruekii subespécie bulgaricus. Kefir e Kumiss • Bebidas à base de leite fermentado populares na Europa Oriental. • É uma fermentação alcoólica combinada com ácido lático. • As bactérias produtoras de ácido lático utilizadas, Streptococcus lactis e Lactobacillus bulgaricus, normalmente são suplementadas com leveduras fermentadoras da lactose, para dar a essas bebidas um teor alcoólico de 1 a 2%. Kefir Kumiss CERVEJA “Para nenhum povo da antigüidade, por mais que consumissem a cerveja, ela foi tão significativa e importante como para os egípcios. Entre eles, além de ter uma função litúrgica determinada no banquete oferecido aos mortos ilustres, a cerveja era a bebida nacional [...]. ilustres, a cerveja era a bebida nacional [...]. As mulheres que fabricavam a cerveja tornavam-se sacerdotisas, tal era a importância dessa bebida digna de ser oferecida como libação aos deuses.” (VIDA biblioteca. Como fazer cerveja. 3.ed. São Paulo: Três, 1985. p. 51-52.) Ainda que a cerveja seja fabricada há milhares de anos, a essência de sua produção continua a mesma: fermentação de cereais. Cerveja • As cervejas são produzidas a partir da fermentação do amido de cereais por leveduras. • A cerveja é fermentada lentamente pelas linhagens de leveduras quepermanecem no fundo dos tanques (leveduras de fundo). • A cerveja Ale tem uma fermentação relativamente rápida, a uma temperatura elevada, com linhagens de leveduras que normalmente formam grupos que flutuam até o topo devido ao CO2 (leveduras de topo). • Como as leveduras não são capazes de fermentar o amido diretamente , o amidos dos grãos deve ser convertido em glicose e maltose, que podem ser fermentadas pelas leveduras em etanol e dióxido de carbono. • Nessa conversão, chamada de maltagem, os grãos contendo amido, como a maltagem da cevada, são colocados para germinar e então são secos e moídos. • Este produto, denominado malte, tem enzimas degradadoras de amido (amilases) que convertem o amido de cereais em carboidratos, que podem ser fermentados pelas leveduras. Bebidas alcoólicas Destiladas • Nas bebidas como uísque, vodca e rum os carboidratos obtidos a partir dos grãos de cereais, batatas e melado são fermentados até álcool. • O álcool então é destilado para a produção de bebidas alcoólicas concentradas. Saquê • O saquê, vinho de arroz japonês, é feito a partir do arroz sem a maltagem, um vez que o fungo Aspergillus é inicialmente utilizado para converter o amido do arroz em açúcares (pela produção de amilase) que podem ser fermentados pela leveduras para produzir álcool. Vinhos • 1º passo: Escolha das castas As 10 uvas mais plantadas hoje no mundo são: Cabernet Sauvignon, Merlot, Airen, Tempranillo, Chardonnay, Syrah, Garnacha tinta, Sauvignon Blanc, Trebbiano Toscano, Pinot Noir. • 2º passo: colheita (vindima) e desengace dos cachos Muitos produtores ainda fazem a colheita da forma tradicional, ou seja, manualmente; principalmente na elaboração de vinhos de alta gama, que demandam um cuidado maior com os frutos. Mas a partir dos anos de 1960, o uso de máquinas na colheita de grandes áreas plantadas tem sido frequente. Esse método diminui os custos, mas pode comprometer o estado das uvas. Após a colheita, os frutos são selecionados e separados das hastes: é o desengace. http://blog.vinumday.com.br/como-e-feito-o-vinho/ 3º Passo: esmagamento e primeira fermentação (alcoólica) São usadas prensas especiais que possuem regulagens de pressão durante o esmagamento. Esse processo rompe com as peles (cascas) e libera o conteúdo das bagas, formando o mosto de uvas. Ao contrário dos vinhos tintos, onde as cascas permanecem durante a próxima etapa, nos brancos elas são separadas. Feito isso, o mosto (uvas esmagadas) vai para os tanques onde ocorre a fermentação alcoólica através das leveduras presentes nas uvas. Essas são chamadas de leveduras nativas ou indígenas. São elas que processam os açúcares (fermentação) produzindo o álcool do vinho. Atualmente na maioria das regiões do mundo, o inóculo natural é praticamente eliminado através do tratamento do mosto com bissulfito. Após esse processo adiciona-se uma cultura pura de uma cepa de levedura de vinho confiável . • 4º Passo: estabilização a frio e calor Caso haja o aparecimento de cristais, devido ao ácido tartárico, é feita então uma estabilização a frio. O vinho é resfriado em temperaturas abaixo de zero grau, o que estabiliza a ação dos microrganismos e torna-o mais límpido. 5º Passo: vinho de prensa Após a fermentação alcoólica, a parte sólida do mosto é separada e passa por uma prensa. O líquido derivado da prensagem (vinho de prensa) é de qualidade inferior ao que ficou nos tanques de fermentação. • 6º Passo: fermentação malolática e maturação As bactérias ácido-lácticas são importantes quando o vinho é feito de uvas que são especialmente ácidas devido a altas concentrações de ácido málico. Essas bactérias convertem o ácido málico em ácido láctico mais fraco em um processo chamado fermentação malolática, também chamada de segunda fermentação. Essas bactérias láticas adicionadas tem como objetivo principal suavizar os taninos. Os vinhos então, são acondicionados em barris de carvalho, inox ou cimento, para que ocorra a maturação. Vale observar que estamos falando de processos básicos, pois cada estilo de vinho pode passar por alguns microprocessos específicos, ou por um tempo diferente em cada etapa. • 7º Passo: testes de laboratório Os testes são feitos nos laboratórios, na maioria das vezes dentro das próprias vinícolas. São medidos os níveis de açúcar (Brix), o pH (acidez e alcalinidade), açúcar residual, dióxido de enxofre, acidez volátil e porcentagem de álcool. São analisados vários lotes diferentes, e a partir dos resultados o enólogo decide como será a mistura para o vinho final. Fonte: http://blog.vinumday.com.br/como-e-feito-o-vinho/ • 8º Passo: mistura e colagem Após os testes anteriores, alguns lotes podem ser misturados com o objetivo de equilibrar ou trazer preponderância para alguma característica do vinho. • 9º Passo: conservantes sulfitos A adição do dióxido de enxofre (SO2) no vinho ocorre na forma de ácido sulfuroso, não de gás, que é prejudicial a saúde, tem como função a conservação do vinho. Elimina as bactérias e leveduras indesejáveis. • 10º Passo: filtração Nem todos os vinhos passam por filtração. Esse processo pode ocorrer quando se pretende uma clarificação, que é a remoção de resíduos. São usados filtros com membranas muito pequenas (menores que um milésimo de milímetro) que barram as partículas, inclusive bactérias. A filtração do vinho também ajuda na estabilização microbiana, fazendo com que ele tenha níveis mínimos de ações dos microrganismos. • 11º Passo: engarrafamento A etapa final é o engarrafamento. Através das máquinas envasadoras, as garrafas são enchidas, fechadas com rolhas, e os rótulos são colados. Elas seguem para a adega até a distribuição comercial. Fonte: http://blog.vinumday.com.br/como-e- feito-o-vinho/ ETAPAS BÁSICAS DA FABRICAÇÃO DO VINHO Fonte: http://blog.vinumday.com.br/como-e-feito-o-vinho/ Vinagre ✓O vinagre é uma solução de ácido acético feita em um processo de duas etapas: ✓Primeiro as leveduras fermentam o açúcar em um suco de frutas, geralmente maça (vinagre de cidra) ou uva (vinagre de vinho), em etanol. A levedura usada geralmente é Saccharomyces cerevisiae. ✓Em seguida a Acetobacter spp., bactéria aeróbia obrigatória, oxida o etanol não completamente em ácido acético e água, em vez de oxidar completamente em CO2 e água, como a maioria dos microrganismos faria. Acetobacter aceti. Fonte: https://naturalhistory.fandom.com/wiki/Acetobacter_aceti Microrganismos como produtos industriais ✓Os microrganismos por si mesmos podem constituir um produto industrial. ✓A levedura do pão (Saccharomyces cerevisiae) é produzida em grandes tanques de fermentação aereados. ✓Ao final da fermentação, o conteúdo dos tanques é de cerca de 4% de massa de leveduras. ✓As células são coletadas por centrifugação contínua e são prensadas. ✓São comercializadas para a preparação de bolos e massas caseiras. Fermento biológico. Fonte: https://fermais.com.br/o-que-e-fermento-biologico/ Microrganismos como produtos industriais ✓As bactérias simbióticas fixadoras de nitrogênio são outros microrganismos importantes comercializados. ✓Os inoculantes são comercializados para várias culturas como feijão, soja, milho e trigo. Anualmente, mais de 7 bilhões de dólares em fertilizantes nitrogenados são economizados com o uso de inoculantes contendo o microrganismo Bradyrhizobium japonicum. Fonte: https://agropos.com.br/inoculante-soja/ Microrganismos como produtos industriais ✓No controle biológico de fitopatógenos com fungos benéficos destaca-se o gênero Trichoderma. ✓A espécie Trichoderma harzianum é a mais comercializada mundialmente. ✓No Brasil, até dezembro de 2019 cerca de 70% dos bioprodutos registrados contendo esse agente microbiológico pertenciam a essa espécie, sendo comercializados para o controle dos seguintes fitopatógenos: Sclerotinia sclerotiorum (mofo- branco), Rhizoctonia solani (podridão radicular),Fusarium solani (fusariose), Thielaviopsis paradoxa (podridão abacaxi ou podridão negra) e para o controle do nematóide Pratylenchus zeae. Gênero Trichoderma Fonte: https://www.promip.agr.br/entendendo-os- bioprodutos-parte-02/ Microrganismos como produtos industriais ✓Dentre as bactérias utilizadas como agentes biológicos destacam-se aquelas do gênero Bacillus. Apresentam ocorrência bastante generalizada e ampla, sendo encontradas em diversas regiões em todo o mundo. São encontradas no solo, parte aérea de plantas, região das raízes, grãos armazenados, insetos mortos, dentre outros. ✓ São bactérias do tipo Gram-positivas e aeróbicas, podendo facultativamente crescer em anaerobiose. Certas espécies do gênero Bacillus produzem endósporos (Bacillus thuringiensis, Bacillus larvae, e Bacillus popilliae) são patógenos de insetos. ✓Esse conjunto é responsável por mais de 90% dos bioprodutos à base de microrganismos comercializados em todo o mundo. Microrganismos como produtos industriais ✓A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) é um dos principais agentes microbiológicos comercializados no Brasil e em diversos países. ✓A sua atividade inseticida está relacionada com a presença de inclusões proteicas cristalinas conhecidas como delta endotoxinas, as quais são produzidas no momento da esporulação. Essas toxinas são inofensivas para os seres humanos, demais vertebrados e meio ambiente. ✓Atualmente as mais utilizadas são as toxinas Cry, as quais apresentam um amplo espectro de ação, sendo efetivas para diversas ordens de insetos. Inseticida microbiológico. Bacillus thuringiensis var. kurstaki HD-1 Fonte:http://biovalens.com.br/produto/bt-turbo-max/ Microrganismos como produtos industriais ✓Bacillus thuringiensis formam cristais de proteínas, chamadas corpos parasporais, concomitante à formação de endósporo. ✓Quando um inseto suscetível come a proteína, ela é clivada no estômago do inseto em um fragmento de proteína altamente destrutivo, que ulcera a parede intestinal e mata o inseto. ✓Por mais de 30 anos B. thuringiensis foi usado para produzir um bioinseticida chamado Bt. ✓O Bt é pulverizado sobre a folha das plantas para controlar lagartas e outros insetos. Uma hora depois de consumir os endósporos, as lagartas param de se alimentar e morrem vários dias mais tarde. Bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) Fonte:http://biovalens.com.br/produto/bt-turbo-max/ De doenças de plantas a xampus e molhos para saladas • Xanthomonas campestris é um bacilo Gram-negativo que causa uma doença chamada podridão negra na raiz das plantas. Depois de acessar os tecidos vasculares das plantas, a bactérias usa a glicose transportada nos tecidos para produzir uma substância pegajosa, semelhante a uma goma. • Essa substância se acumula para formar massa gomosas, as quais, eventualmente boqueiam o transporte de nutrientes para as plantas. A goma que forma essas massas, a xantana, é composta de um polímero de manose de alto peso molecular. Podridão negra no repolho Fonte: http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/xantha n.htm • As xantanas não tem efeito adversos quando consumidas por seres humanos, sendo utilizada como espessante em laticínios, molhos para saladas, cosméticos, xampus, pastas de dentes, sorvete, pudim, geléias, etc • O norte-americano consome em média 13 kg de queijo anualmente e cada 2 kg de queijo produz cerca de 4 litros do líquido do subproduto, o soro de leite. • Esse subproduto é utilizado é utilizado por X. campestris para a produção de xantana. Figura- A bactéria Xanthomonas campestris pv. campestris. a: X. campestris pv. Campestris causou podridão negra em um campo de repolho. b: lesão em folha de repolho. c: Duas plantas de repolho infestadas ao lado de um controle saudável. d: Imagem de microscopia eletrônica de X. campestris pv. campestris, com um flagelo polar. e: X. campestris pv. campestris crescendo no meio Kings. f: X. campestris pv. campestris crescendo em meio de carbonato de cálcio dextrose de levedura. De Vicente e Holub, 2013, número de licença: 3983650320184 Fonte: T. Steffens. Engineering and characterization of Xanthomonas campestris pv. campestris towards an enhanced production of the exopolysaccharide xanthan Published in 2017. https://www.semanticscholar.org/paper/Engineering-and-characterization-of-Xanthomonas-pv.-Steffens/a4101f121b4581c75cc79eb21cfbdf2c0e914817 https://www.semanticscholar.org/paper/Engineering-and-characterization-of-Xanthomonas-pv.-Steffens/a4101f121b4581c75cc79eb21cfbdf2c0e914817 https://www.semanticscholar.org/paper/Engineering-and-characterization-of-Xanthomonas-pv.-Steffens/a4101f121b4581c75cc79eb21cfbdf2c0e914817 • Figura-Aspecto da goma xantana precipitada, logo após a adição de álcool (a), após 24 horas de repouso (b) e o biopolímero separado do sobrenadante (c). Fonte: Pereira e Ferraz. Revista da Universidade Vale do Rio Verde, Três Corações, v. 14, n. 2, p. 756-776, 2016. ENZIMAS ✓Os microrganismos são uma fonte rica de enzimas com muitas utilizações comercias. ✓A demanda por enzimas é alta, uma vez que elas são específicas e não geram produtos residuais caros ou tóxicos. ✓Além disso, diferentemente dos processos químicos tradicionais que requerem calor ou ácido, as enzimas atuam sob condições moderadas e seguras e biodegradáveis. ✓As mais baratas são as extracelulares, geralmente amilases, proteases e celulases. ✓As mais caras são as enzimas intracelulares, que requerem um grau de pureza maior por serem muitas delas utilizadas como fármacos ou em testes diagnóstico. Cepa de actinobactéria produtora de celulase isolada do Parque Nacional de Ubajara. Fonte: Silva et al. 2020 ENZIMAS ✓As amilases são utilizadas na produção de xaropes de amido de milho e na produção de glicose a partir do amido. ✓A produção microbiológica da amilase é considerada a primeira patente biotecnológica emitida nos Estados Unidos, concedida ao cientista japonês Jokichi Takamini. ✓Enzimas proteolíticas (destruidoras de proteínas) são utilizadas em sabão em pó para remoção de determinadas manchas dos tecidos, como por exemplo manchas de sangue, através da dissolução de proteínas que as vinculam às fibras dos tecidos. ✓A maioria das enzimas comerciais é produzida aerobiamente. Cepa de actinobactéria produtora de amilase isolada do Parque Nacional de Ubajara. Fonte: Silva et al. 2020 Halo de hidrólise Fonte: Santos, F. D.,2020 Solubilização de fosfato por cepa de actinobactérias. Fonte: Silva, V. M., 2020 Atividade xilanolítica por cepa de actinobactérias. Fonte: Silva, V. M., 2020 Figura: Atividade pectinolíticas da cepa de rizóbios L109 e da actinobactérias UB08 do Parque Nacional de Ubajara. As setas indicam as zonas de hidrólise. Fonte: Silva, V. M., 2020 Figura: Demonstração da atividade metabólica de cepas de actinobactérias e rizóbios do Parque Nacional de Ubajara em diferentes temperaturas. Fonte: Silva, V. M., 2020 Figura 6: Demonstração da atividade metabólica de cepas de actinobactérias e rizóbios do Parque Nacional de Ubajara em diferentes concentrações de NaCl. Fonte: Silva, V. M., 2020 Figura: Demonstração da atividade metabólica de cepas de actinobactérias e rizóbios do Parque Nacional de Ubajara em diferentes pHs. Fonte: Silva, V. M., 2020 Atividade celulolítica de fungos isolados do solo do manguezal da Reserva Ecológica de Sapiranga A presença de zonas claras ao redor das culturas indica a atividade de celulase, além da magnitude desta (Figura 1). Os diâmetros das colônias e dos halos de hidrólise produzidos são medidos com régua milimetrada. O índice enzimático é calculado da seguinte forma: I. E. = diâmetro do halo de hidrólise diâmetro do halo de crescimento Algumas enzimas produzidas por microrganismos Enzima Atividade Microrganismo produtor Utilização Celulase Hidrolisa celulose Trichoderma Konigi Digestão/Digerir ColagenaseHidrolisa colágeno Clostridium histolyticum Promove a cicatrização de feridas/queimaduras Diastase Hidrolisa amido Aspergillus oryzae Digestão/Digerir Glicose isomerase Converte glicose em frutose Streptomyces phaeochromogenes Converte glicose a partir de milho hidrolisado Invertase Hidrolisa sacarose Saccharomyces cerevisae Fabricação de doces Lipase Hidrolisa lipídeos Rhizopus spp. Digestão/Digerir Pectinase Hidrolisa pectina Scletorina libertina Clarifica suco de frutas Protease Hidrolisa proteína Bacillus subtillis Usado em detergentes ENZIMAS ✓O passo decisivo para a expansão da Reação em Cadeia (PCR) da Polimerase foi a descoberta da enzima Taq polimerase, extraída da bactéria Thermus aquaticus. Esse organismo vive em fontes termais e muitas de suas enzimas são termoestáveis. ✓Essa característica especial tornou-a adequada para utilização em metodologias como a PCR que envolve etapas de aquecimento a temperaturas de mais de 90°C. ✓As enzimas de restrição (endonucleases) são produzidas por bactérias para se defender de vírus. ✓São as ferramentas básicas da engenharia genética, desempenhando função de clivagem (corte) da molécula de DNA em pontos específicos, em reconhecimento a determinadas sequências de nucleotídeos. Aminoácidos ✓Os aminoácidos tornaram-se um grande produto industrial dos microrganismos. ✓Vários aminoácidos são obtidos por fermentação aeróbia para uso na indústria alimentícia. ✓Alguns são usados para melhorar ou modificar o sabor de um alimento, outros para realçar o valor nutricional. ✓Corynebacterium glutamicum, bactéria produtora do aminoácido ácido L-glutâmico ✓Mais de 1 milhão de toneladas de ácido glutâmico, utilizados na fabricação de realçador de sabor glutamato monossódico são produzidos a cada ano. ✓Dois aminoácidos sintetizados por microrganismos, a fenilalanina e o ácido aspártico, tornaram-se importantes como ingredientes do adoçante aspartame. Corynebacterium glutamicum Fonte: M. Wachi & M. Nishimura Corynebacterium glutamicum ATCC 13032T Corynebacterium glutamicum Fonte: https://bacdive.dsmz.de/strain/3092 https://www.atcc.org/Products/All/13032.aspx Utilizações de aminoácidos produzidos comercialmente Aminoácido Utilização Alanina Adicionado ao suco de fruta para melhorar o sabor. Aspartato Adicionado ao suco de fruta para melhorar o sabor. Cisteína Adicionado ao pão e ao suco de fruta para realçar o sabor. Glutamato Adicionado a muitos alimentos para realçar o sabor. Glicina Realça o sabor em diversos alimentos. Histidina + triptofano Evita o ranço em diversos alimentos. Lisina Usado no Japão para fazer o pão com mais proteínas. Metionina Gera produtos derivados da soja com mais proteínas. Fonte: Ajinomoto, 2007 Ácido cítrico ✓O ácido cítrico tem uma grande variedade de usos, além de dar acidez e sabor aos alimentos ✓É um antioxidante e é usado para ajustar o pH em muitos alimentos, sendo frequentemente utilizado em laticínios como emulsificador. ✓Mais de 1,6 milhão de toneladas de ácido cítrico são produzidos a cada ano em todo mundo. ✓Grande parte é produzida pelo fungo Aspergillus niger, com a utilização de melado como substrato. ✓Na cosmética como regulador de pH e na indústria farmacêutica como ingredientes em tabletes efervescentes. Aspergillus niger Fonte: Kateryna Kon/Shutterstock. https://www.news- medical.net/life-sciences/What-is-Aspergillus-niger- Aspergillus niger Fonte: https://bacdive.dsmz.de/strain/3092 Vitaminas ✓Os microrganismos podem fornecer uma fonte de baixo custo de algumas vitaminas. ✓A vitamina B12 é produzida por espécies de Pseudomonas e Propionibacterium. ✓A riboflavina (B2) é produzida por fermentação, principalmente por fungos, como Ashbya gossypii. ✓A vitamina C (ácido ascórbico) é produzida em uma taxa de 60 mil toneladas por ano, por espécies de Acetobacter. Cepas de Pseudomonas denitrificans. Fonte: Rajvi Enterprise. Ashbya gossypii, produtor de vitamina B2. Fonte: Keyon College. https://www.rajvienterprise.co.in/pseudomonas-denitrificans-3326226.html https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Ashbya_gossypii Produtos farmacêuticos ✓Os esteróides são um importante grupo de substâncias químicas que incluem a cortisona, que é utilizada como fármaco anti-inflamatório, e os estrogênios e progesteronas, que são utilizados como contraceptivos orais. ✓Recuperar esteróides de fontes animais ou sintetizá-los quimicamente é difícil, mas os microrganismos podem sintetizá-lo a partir de esteróides ou compostos relacionados. Fonte: Tortora, Funke e Case. Microbiologia Produtos farmacêuticos ✓A microbiologia farmacêutica moderna foi desenvolvida depois da Segunda Guerra Mundial, com a introdução da produção de antibióticos. ✓Muitos antibióticos são produzidos por fermentações microbianas. ✓Cerca de 6 mil antibióticos já foram catalogados. ✓A actinobactéria Streptomyces hygroscopius, tem linhagens diferentes que produzem quase 200 antibióticos diferentes. Actinobactéria Streptomyces hygroscopius Fonte: https://bacdive.dsmz.de/strain/15311. Antibióticos ✓A descoberta de antibióticos começou com o microbiologista escocês Alexander Fleming em 1929. ✓O sucesso da penicilina, juntamente com as limitações, estimulou a busca de novos antibióticos nos anos que seguiram à Segunda Guerra Mundial. ✓Nos anos 1950, Albert Schatz e Selman Waksman, descobriram a estreptomicina. ✓A estreptomicina era eficiente no tratamento da tuberculose e de algumas bactérias Gram-negativas que a penicilina não tinha ação. ✓Diversos antibióticos de amplo espectro, eficientes no tratamento de uma grande variedade de doenças causadas por bactérias foram descobertos através da pesquisas realizadas por empresas farmacêuticas. Alexander Fleming Fonte:http://www.bitesizehistory.net/2780-2/ Antibiótico Microrganismo produtor Alvo Produzido por fungos Cefalosporina Cephalosporium acremonium Amplo espectro Penicilina Penicillium chrysogenum Bactérias Gram-positivas Produzido por bactérias Gram-positivas, formadoras de endósporos Bacitracina Bacillus subtilis Bactérias Gram-positivas Polimixina B Bacillus polymyxa Bactérias Gram-negativas Produzido por bactérias Gram-positivas, actinobactérias Cloranfenicol Streptomyces venezuelae Amplo espectro Cicloheximida Streptomyces griseus Leveduras patogênicas Eritromicina Streptomyces erythreus Bactérias Gram-positivas Kanamicina Streptomyces kanomyceticus Bactérias Gram-positivas Nistatina Streptomyces noursei Fungos Estreptomicina Streptomyces griseus Bactérias Gram-negativas Tetraciclina Streptomyces rimosus Amplo espectro Biocombustíveis ✓O Brasil produz uma quantidade de etanol a partir da cana-de-açúcar, cerca de um terço do combustível para transporte. ✓Em alguns países há preocupação na produção de etanol a partir do milho, pois cria pressões sobre o suprimento e nos preços de um gênero alimentício de valor comercial. Biocombustíveis Biocombustíveis de segunda geração Nesta geração de combustíveis, leveduras ou bactérias com sistemas digestivos especiais conseguem quebrar amidos complexos encontrados em gramíneas, arbustos e árvores para transformá-los em biocombustíveis. Solventes orgânicos ✓A acetona e o butanol são comercialmente úteis como solventes orgânicos. ✓São produtos de fermentação anaeróbia de várias espécies de Clostridium. ✓O processo tem sucesso somente se outros microrganismos puderem ser excluídos do meio. Para tanto foi necessário desenvolver uma tecnologia de cultura pura em massa. Clostridium acetobutylicum Fonte: https://www.sbi.uni - rostock.de/research/projects/detail/29 Slide 1: Biotecnologia Microbiana Slide 2: METABOLISMO Slide 3: Tecnologia das fermentações Slide 4 Slide 5 Slide 6: BIORREATORES Slide 7: Sistemas de produção Slide 8 Slide 9: Metabólitos Slide 10: Metabólitos Primários e Secundários Slide 11: LINHAGENS INDUSTRIAIS Slide 12: Entendendo “linhagem” Slide 13: Fermentaçõesanaeróbias Slide 14: Queijos Slide 15: Queijos Slide 16: Iogurte Slide 17: Iogurte Slide 18: Kefir e Kumiss Slide 19: CERVEJA Slide 20: Cerveja Slide 21 Slide 22: Bebidas alcoólicas Destiladas Slide 23: Saquê Slide 24: Vinhos Slide 25 Slide 26 Slide 27 Slide 28 Slide 29 Slide 30 Slide 31: ETAPAS BÁSICAS DA FABRICAÇÃO DO VINHO Slide 32: Vinagre Slide 33 Slide 34: Microrganismos como produtos industriais Slide 35: Microrganismos como produtos industriais Slide 36: Anualmente, mais de 7 bilhões de dólares em fertilizantes nitrogenados são economizados com o uso de inoculantes contendo o microrganismo Bradyrhizobium japonicum. Slide 37: Microrganismos como produtos industriais Slide 38: Microrganismos como produtos industriais Slide 39: Microrganismos como produtos industriais Slide 40: Microrganismos como produtos industriais Slide 41: De doenças de plantas a xampus e molhos para saladas Slide 42 Slide 43 Slide 44: ENZIMAS Slide 45: ENZIMAS Slide 46 Slide 47 Slide 48 Slide 49 Slide 50 Slide 51 Slide 52: Atividade celulolítica de fungos isolados do solo do manguezal da Reserva Ecológica de Sapiranga Slide 53: Algumas enzimas produzidas por microrganismos Slide 54: ENZIMAS Slide 55: Aminoácidos Slide 56: Utilizações de aminoácidos produzidos comercialmente Slide 57 Slide 58: Ácido cítrico Slide 59: Vitaminas Slide 60: Produtos farmacêuticos Slide 61: Produtos farmacêuticos Slide 62: Antibióticos Slide 63 Slide 64: Biocombustíveis Slide 65 Slide 66: Solventes orgânicos Slide 67