RESUMO TEC. EM BIOMOL

Prévia do material em texto

BIOBALISTICA
A biobalística utiliza microprojéteis de ouro ou tungstênio acelerados a altas velocidades (superiores a 1.500km/h) por um gás carreador, que projeta ácidos nucleicos e outras moléculas em células e tecidos in vivo. As micropartículas aceleradas penetram na parede e membrana celular de maneira não-letal, localizando-se aleatoriamente nas organelas celulares. 
Em seguida, o DNA é dissociado das micropartículas pela ação do líquido celular, ocorrendo o processo de integração do gene exógeno no genoma do organismo a ser modificado. Uma das vantagens do sistema de transformação através do processo de biobalística é que este permite a introdução e expressão gênica em qualquer tipo celular, porem é mais utilizada em plantas para criar transgenicos.
AGROBACTERIAS
As agrobacterias são microrganismos que se aproveitam de células vegetais para obtenção de nutrientes. Elas transferem parte de seu material genético para a planta hospedeira. Os genes transferidos são traduzidos como se fossem da propria celula vegetal, resultando no desenvolvimento de tumores ou raízes adventicias no sitio de infecção. As células que receberam o material sintetizam e excretam compostos derivados de aminoácidos e açúcares, que servem de nutrientes apenas para a agrobacteria. Ou seja, a celula vegetal é subjugada para produzir nutrientes para a agrobacteria invasora, que obtem esses nutrientes sem precisar competir com as demais bacterias do solo.
SEQUENCIAMENTO
Sequenciamento de DNA é o processo de determinação da ordem dos nucleotídeos de um dado fragmento de DNA. A sintese é feita a partir de primers. A partir desta regiao, uma nova fita de DNA é produzida, pela ação da DNA polimerase. Os fragmentos obtidos, possuindo diferentes tamanhos, são separados por peso molecular em processos de eletroforese em gel de poliacrilamida.
RFLP
São fragmentos de DNA obtidos de enzimas de restrição, separados por eletroforese e visualizados por meio de hibridização com sondas marcadas com radioatividade ou fluorescência.
O dna é extraído e digerido com endonucleases de restrição (cortam a molécula de DNA através do reconhecimento de sequencias nucleotídicas especificas). São separados com a tecnica de eletroforese, e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. Ocorre a hibridização com as sondas marcadas. São vizualisados atravez da auto-radiografia
Bases geneticas dos marcadores de RFLPs: O polimorfismo observado na tecnica de RFLPs ocorre porque o DNA de individuos geneticamente distindos difere na sequencia de nucleotideos ao longo da fita.
PFGE
O PFGE (Eletroforese em Gel de Campo Pulsante - "Pulsed Field Gel Electrophoresis") é uma técnica usada para separar essencialmente cadeias longas de DNA de acordo com seus tamanho. Nela, em um gel de agarose, as moléculas são submetidas a campos elétricos aplicados alternadamente em duas direções, o DNA é purificado e clivado com enzimas de restrição, só que, no caso da PFGE, as enzimas utilizadas cortam o DNA em número menor de fragmentos e, portanto, maiores em tamanho. 
HIBRIDAÇÃO POR MICROARRANJO
Um DNA-microarray (microarranjo de DNA) é uma coleção de pontos microscópios formados por sequências de DNA fixados em uma superfície sólida constituída de vidro, plástico ou silicone. Estes segmentos microscópicos são chamados de sondas. Milhares delas são ligadas ao suporte, formando um pequeno chip que será utilizado como plataforma para a realização de reações de hibridização que possibilitarão a detecção da sequência ou sequências-alvo no material analisado. 
As sequências de DNA (ou cDNA) a serem analisadas são marcadas com corantes fluorescentes e colocadas para reagir com as sequências fixadas na superfície do microarranjo. Ao final, o sistema é lavado, as amostras não hibridizadas são removidas e a concentração de DNA é medida pela intensidade da emissão de fluorescência. Um ou dois fluoróforos são utilizados, dependendo da plataforma utilizada, sendo geralmente o Cy3 e Cy5 usados para marcar DNA. Os DNAs marcados são analisados num microarray scanner para a visualização da fluorescência após excitação com um raio laser de comprimento de onda definido.