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Prezado (a) Aluno(a), Você fará agora seu TESTE DE CONHECIMENTO! Lembre-se que este exercício é opcional, mas não valerá ponto para sua avaliação. O mesmo será composto de questões de múltipla escolha. Após responde cada questão, você terá acesso ao gabarito comentado e/ou à explicação da mesma. Aproveite para se familiarizar com este modelo de questões que será usado na sua AV e AVS. INTRODUÇÃO À BIOLOGIA MOLECULAR 1. (2012 - FUNCAB) O DNA é uma longa estrutura presente em nossas células. Para caber no núcleo, o DNA utiliza algumas estratégias, como a formação de nucleossomo. Pode-se afirmar que um nucleossomo é: uma parte do DNA que codifica uma proteína. uma longa fita de DNA com diversos genes. uma proteína que tem a capacidade de se ligar ao DNA. um cromossomo no estágio final de empacotamento. uma estrutura com um núcleo octamérico de histonas, no qual o ADN se enrola duas vezes. Explicação: O nucleossomo é o primeiro estágio de compactação do DNA de eucariotos. Essa estrutura é formada pelo enrolamento de 146 nucleotídeos em um octâmero de proteínas (histonas) 2. (Pucmg 99) O DNA apresenta importantes funções celulares. Uma delas é a síntese de proteína. Numa síntese de proteína com 185 ligações peptídicas, o filamento de DNA que proporcionou essa síntese deverá ter o seguinte número total de nucleotídeos: 62 93 558 279 186 Explicação: Cada ligação peptídica corresponde a 3 nucleotídeos, logo 185x3 = 555 + os 3 nucleotídeos necessários para abrir a síntese. Alternativa 558 3. Em relação aos genomas bacterianos podemos afirmar que: eles apresentam apenas um cromossomo, uma origem de replicação e uma região de término, além de elementos móveis extracromossomais. eles apresentam pelo menos um cromossomo, podendo ser circular ou linear, com uma origem de replicação e uma região de término cada, regiões intergênicas, além de elementos móveis extracromossomais. eles apresentam pelo menos um cromossomo, podendo ser circular ou linear, com uma origem de replicação e uma região de término cada. eles apresentam pelo menos um cromossomo circular, com uma origem de replicação e uma região de término cada, e elementos móveis extracromossomais. o menor genoma tem um tamanho de 580 mil pares de bases ou 470 genes, além de elementos móveis extracromossomais. Explicação: O genoma bacteriano é constituído por um ou mais cromossomos que podem lineares ou circulares, além de apresentar genes extracromossomomiais encontrados em plasmídeos. ISOLAMENTO DE ÁCIDOS NUCLEICOS 4. (NUCEPI, 2012) A técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma ferramenta que permite variações metodológicas nos laboratórios de perícia criminal. Nesse sentido, a Nested-PCR utiliza dois pares de iniciadores (primers) com o objetivo de: diminuir o consumo de nucleotídeos durante a reação. inibir a amplificação de produtos inespecíficos. aumentar a quantidade do produto amplificado. evitar a degradação do produto amplificado. diminuir o número de ciclos de amplificação. Explicação: O nested PCR é uma variação da PCR convencional utilizada no intuito de aumentar a especificidade da amplificação. Ela consiste na amplificação de um fragmento especifico utilizando mais de um par de primers, sendo um par anelado mais externamente a sequência alvo e um interno ¿pegando¿ somente a sequência alvo. 5. (CESPE, 2016) No método de extração orgânica do DNA: o DNA adsorve especificamente membranas/superfícies/ /partículas de sílica em presença de certos sais e em um determinado pH. ocorre a ligação reversível do DNA a superfície sólida/grânulo/partícula magnética, que tenha sido revestida com anticorpo de ligação ao DNA. as proteínas são desnaturadas, utilizando-se proteases, e removidas com solventes orgânicos como fenol, ou com uma mistura de 1:1 de fenol e clorofórmio. ocorre interação específica entre fosfatos carregados negativamente do acido nucleico e moléculas carregadas positivamente na superfície do substrato sólido. o DNA purificado é eluído por extração com etanol. Explicação: Na extração orgânica a combinação de fenol clorofórmio é utilizada para desnaturação e remoção das proteínas contaminantes. 6. (IF-Farroupilha, 2016) Analise as afirmativas abaixo, sobre a reação da polimerase em cadeia (PCR), e marque (V) para verdadeiro ou (F) para falso: ( ) A PCR amplifica regiões específicas do DNA. ( ) A PCR explora certas características do processo de replicação do DNA. ( ) O molde de DNA de fita simples, utilizado na PCR, pode ser obtido pelo aquecimento de uma fita dupla de DNA a temperaturas próximas à ebulição. ( ) O ponto inicial, para cada síntese de DNA, pode ser determinado pelo fornecimento de um oligonucleotídeo iniciador que se liga ao molde naquele ponto. ( ) Na PCR, a DNA polimerase pode ser direcionada para sintetizar uma região específica do DNA. A sequência correta é: V, F, F, F, V V, V, V, F, V F, F, F, F, F V, V, V, V, V V, V, V, V, F Explicação: A PCR é uma técnica que permite a amplificação de sequências especificas do DNA a partir da utilização dos primers e fita molde de DNA. AMPLIFICAÇÃO IN VITRO DE DNA 7. Diego está iniciando sua vida profissional como técnico de laboratório em um laboratório molecular. Sua chefe, a biomédica Lais, solicitou que ele corresse um gel para que juntos pudessem analisar o resultado da PCR. Para realizar essa metodologia Diego confeccionou: um gel de agarose que servirá de matriz para corrida dos fragmentos de diferentes tamanhos de acordo com tamanho e carga. Estes fragmentos são fluorescentes e podem ser visualizados no microscópio após a corrida. um gel de gelatina onde ocorrerá a separação de fragmentos genômicos de acordo com o tamanho e a velocidade de migração em direção ao polo negativo. Os fragmentos podem ser visualizados em luz UV após a adição do brometo de etidio no gel. um gel de gelatina para fazer transferência do DNA para uma membrana de nitrocelulose onde ocorrerá a separação de fragmentos genômicos de acordo com a velocidade e carga. Uma membrana de nitrocelulose onde ocorrerá a corrida dos fragmentos de acordo com a carga e tamanho. A visualização dos fragmentos se dá em luz UV após a associação com intercalante de DNA. um gel de agarose onde ocorrerá a separação de fragmentos genômicos de acordo com com tamanho e carga. Os fragmentos podem ser visualizados em luz UV após a adição do brometo de etidio no gel. Explicação: A eletroforese é uma etapa pós PCR necessária para visualização da amplificação dos fragmentos alvos. Para que ela ocorra é necessário que a amostra seja adicionada a uma matriz (gel agarose), onde os fragmentos serão separados por uma corrente elétrica de acordo com seu tamanho e carga. Após a corrida é adicionado ao gel um intercalante de DNA para que os fragmentos possam ser visualizados ao receberem luz UV. SEQUENCIAMENTO, CLONAGEM E TÉCNICAS DE HIBRIDIZAÇÃO 8. Sequenciamento de nova geração, conhecido também como NGS ou sequenciamento profundo de ácidos nucleicos, é um termo geral utilizado para descrever uma série de tecnologias modernas de sequenciamento. Sobre esta tecnologia é correto afirmar que: Apesar dos inúmeros avanços gerados pelas técnicas de sequenciamento de nova geração, ainda é tecnicamente impossível utilizá-las para analisar os genes que estão sendo expressos em um determinado tecido ou condição. Illumina (Solexa), 454 (Roche) e Ion Torrent (Próton/PGM) são sequenciadores de nova geração que realizam o sequenciamento diretotanto de DNA quanto de RNA. Uma das maiores vantagens das tecnologias de sequenciamento de nova geração é o fato de que as sequências obtidas geralmente são longas, contendo, ao menos, 1 kilobases. As tecnologias recentes de sequenciamento de ácidos nucleicos permitem sequenciar tanto DNA como RNA de forma mais rápida e barata do que anteriormente era conseguido com o sequenciamento de Sanger e, por conta disto, estão revolucionando os estudos de genomas e a biologia molecular. Uma das restrições ao uso do sequenciamento de nova geração é a necessidade de serem utilizadas amostras grandes com alta concentração de ácidos nucleicos. Explicação: Os novos sequenciadores como ilumina e RNAseq permitem o sequenciamento rápido, barato e de longas sequências de DNA e RNA, respectivamente. 9. (INPI - 2006) Considerando os princípios da clonagem molecular, assinale a opção correta. Bactérias selvagens são aquelas que receberam o DNA recombinante, portanto possuem um genoma diferente da bactéria parental. As técnicas de clonagem molecular envolvem a introdução de DNA exógeno em um organismo hospedeiro. Nos experimentos de clonagem molecular, são utilizadas enzimas de restrição capazes de restaurar a estrutura linear dos plasmídeos. O plasmídeo é um tipo de vetor capaz de se comportar como um cromossomo de levedura. Nos experimentos de clonagem molecular, são utilizadas enzimas de restrição capazes de restaurar a estrutura anelar de plasmídeos. Explicação: A clonagem é uma técnica na qual o DNA exógeno é inserido em um vetor e incorporado em uma bactéria ou célula eucariota para replicação. 10. Juliana, é biomédica e ingressou no mestrado para trabalhar com biologia molecular. Seu projeto engloba a identificação de sequências específicas do genoma bacteriano correlacionado com mecanismos de virulência. Para detectar estas sequências ela deve recorrer a técnicas moleculares de hibridização. Que técnica que você sugeriria para ela? Southern Blotting Nothern Blotting Western Blotting Clonagem molecular PCR Explicação: Southern Blotting é uma técnica molecular que serve para verificar se uma determinada sequência de DNA está ou não presente em uma amostra analisada.
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