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Fecundação e Clivagem ➢ Obstetrícia – estuda fêmea antes, durante e depois da gestação ➢ Fecundação – SPTZ entrando no óvulo para gerar nova vida o Variação genética – importante para evolução (ser capaz de superar desafios – ex. COVID-19, algumas pessoas sentem algo e outras não) o Ocorre na tuba uterina (oviduto) o SPTZ no canal vaginal tem que subir, passa pela cérvix, útero e chegar até a tuba uterina o SPTZ – cauda para motilidade ▪ Acrossoma: bolsa cheia de enzimas para quebrar membrana (zona pelúcida) do óvulo para entrar Fecundação ➢ As células germinativas dão origem as células tronco: o Gametas masculinos – espermatogônias o Gametas femininos – ovogônia (oogônias) o Surgem do intestino primitivo, no mesentérico, e vão andando por movimentos amebóides até chegar à crista gonadal do embrião, que dá a futura gônada (testículo / ovário) ▪ Se a célula não chega nesse lugar, ela precisa morrer por apoptose, se não morrer, ela pode começar a desenvolver e virar um tumor, um teratoma com tecidos diferenciados (dente, pelo) ▪ Quando as células chegam à crista gonadal, ela começa a se desenvolver na região retro-peritoneal, perto do rim • O testículo precisa descer para desenvolver o Se não desce, vira criptorquidismo • No ovário, já nasce com um grande número de óvulos o Não produz novas células o Fêmeas fazem mitose apenas na vida pré-natal (feto) ▪ Não multiplicam mais essas células SPTZ = espermatozoide ➢ Mitose: processo de divisão celular onde uma célula origina duas células idênticas à célula-mãe, contendo o mesmo número de cromossomos ➢ Meiose: processo de duas divisões nucleares, onde ocorre a transformação de uma célula diploide em quatro células haploides por meio da meiose 1 e 2. Possuem metade do número de cromossomos da células-mãe o Macho – 1 células-mãe dá origem a 4 células filhas o Fêmea – 1 célula-mãe dá origem a 1 célula filha ▪ O oócito precisa suportar todo o desenvolvimento embrionário, então não pode diminuir de tamanho. Ele escolhe um cromossomo (da mãe ou do pai), e o “joga fora” formando o Corpúsculo Polar. Por isso acaba dividindo apenas um dos dois e gerando apenas 1 célula-filha DNA duplicado Pró-núcleo feminino Oótide / Quando os dois pró-núcleos (gametas) se unem, forma o Zigoto STZ entra / Pró- núcleo masculino Oótide = óvulo fecundado Fase fetal Fase fetal Puber- dade Puber- dade Fecundação Oogônia Oócito Separa cromossomo homólogo Separa as cromátides irmãs Pico LH Joga citoplasma fora A força para motilidade vem da mitocôndria Núcleo pequeno ➢ Fêmeas: folículo = gameta + células adjacentes / ovócito = só o óvulo/gameta lá dentro o Células / folículos primordiais – estágio de quiescência, primeiros a serem formados no ovário. Ovócito primário circundado por uma única camada de células da pré- granulosa com aspecto achatado o Folículos primários – ovócitos primários em crescimento circundado por uma camada de células da granulosa de formato cuboide, zona pelúcida em formação. Não tem células tecais diferenciadas o Folículos secundários – ovócito primário inteiramente circundado por uma zona pelúcida, presença de no mínimo duas camadas de células da granulosa de formato cúbico o Folículos terciários / antral / de Graaf / pré-ovulatórios – ovócito circundado pela zona pelúcida, pela corona radiata, pelas células do cumulus, células foliculares, uma cavidade contendo líquido folicular, uma membrana basal e duas camadas de células tecais (teca interna / célula da granulosa) ▪ Na ovulação ele estoura e joga o óvulo (gameta) para fora Ovócito = oócito Classificação status nuclear: oócito primário Folículos pré-antrais – primordial / primário / secundário Folículos antrais (terciário / pré- ovulatório / graff) • Hormônio que induz a ovulação – hormônio luteinizantes (LH) o Processo de luteinização – transforma esse folículo em um Corpo Lúteo, que produz o hormônio progesterona (P4) ▪ Se não tiver gestação, ele morre pela ação do hormônio prostaglandina (PGF2α {alfa}) e vira o Corpo Albicans (cicatriz – branca) • O estrógeno (E2) estimula o LH para causar a ovulação ▪ Célula da teca interna – células mais achatadas • Possui receptor de LH, quando o LH se liga nela, ela pega o colesterol e transforma no hormônio testosterona (não vai para o corpo), vai para a célula da granulosa ▪ Célula da granulosa – células redondas • Converte a testosterona em estrógeno ▪ Células do cumulus – se comunicam com o oócito por ligações comunicantes (junções gap – poros pequenos que passam pequenas substâncias) para sustentar o desenvolvimento embrionário Corpo Lúteo Corpo Albicans 1 – Folículo primordial 2 – Folículo primário 3 – Folículo secundário 1 – Folículo primário 2 – Folículo secundário 1 – Folículo primordial 2 – Folículo primário 3 – Folículo secundário 4 – Folículo antral ➢ Macho: o Formação do gameta = testículo (túbulos seminíferos) o Célula de Leydig – produz testosterona o Célula de Sertoli – converte a testosterona em estrógeno ▪ Mesma função da fêmea – só muda o nome • Célula de Leydig = célula teca interna (fora) • Célula de Sertoli = célula da granulosa (dentro) o Espermatócitos primários – junções ocludentes (Tight junctions) não deixam passar nada entre eles ▪ Não pode passar a enzima (acrosina – atua como protease) do acrossoma para fora, acaba virando um corpo estranho ▪ Barreira hemato-testicular – espermatozoide não entra em contato com sistema imune o Na cabeça do SPTZ tem receptores e proteínas que se encaixam na zona pelúcida do óvulo (chave-fechadura / espécie- específico) ▪ Quando espécies são parecidas (ex. mula que é híbrido, entre o jumento com a égua = equídeos, produzem híbridos) ➢ Reação Acrossomal: o Quando a membrana plasmática se une a membrana acrossomal externa formando vesículas híbridas (parte das duas membranas) e liberando o conteúdo acrossomal o Depois o SPTZ só fica com a membrana acrossomal interna em cima do núcleo, protegendo-o o Para não vazar o conteúdo do núcleo, o que sobrou da membrana plasmática se une a membrana acrossomal interna, gerando proteínas de fusão que são reconhecidas pela membrana do oócito para conseguir entrar Membrana plasmática Membrana acrossomal externa Acrossoma Membrana acrossomal interna Membrana nuclear Núcleo Membrana plasmática Acrossoma Núcleo Vesículas híbridas Reação Acrossomal ➢ Quando os dois se ligam e SPTZ passa pela zona pelúcida, vai para o espaço peri-vitelínico o As proteínas de fusão são reconhecidas pela membrana vitelínica e ocorre o Cone de Fertilização (SPTZ é fertilizado inteiro) o Quando o SPTZ se liga, grânulos corticais são liberados no espaço peri-vitelínico para bloquear a poliespermia ▪ Possuem enzimas que digerem os receptores de ligação para nenhum outro SPTZ entrar (não é compatível com a vida) o Depois o oócito rompe a membrana nuclear do SPTZ o Núcleo do SPTZ bem compacto, DNA está enrolado na célula em volta da proteína protamina (só se encontra em SPTZ, protamina é usado para reverter heparina) ▪ Embrião precisa voltar o DNA igual de uma célula, substituir a protamina pela histona o Enquanto os dois pró-núcleos estão caminhando para se encontrarem, eles estão se duplicando, então quando se juntam (processo: singamia), já começa a mitose o Os dois pró-núcleos se unem (fusão do material genético) e formam o zigoto Clivagem ➢ Embrião / zigoto começam a fazer uma série de divisões mitóticas,extremamente rápidas, nas quais o zigoto que tem grande volume citoplasmática, é dividido em numerosas células pequenas que são chamadas de blastômeros ➢ Não tem ganho de tamanho entre uma divisão e outra, apenas de duplica e divide ➢ É a secreção da tuba uterina que o alimenta e o mantem vivo pelos 5-6 dias ➢ Depois chega ao corno uterino (blastocisto) ➢ Fases: o Mórula – quando não consegue mais contar quantas células tem o Começa a surgir um antro, uma cavidade líquida chamada de blastocele e a célula começa a ser chamada de blastocisto inicial o Blastocisto – tem um blastocele que ocupa metade do citoplasma o Blastocisto em expansão / expandido – tem um blastocele grande, começa a esticar a zona pelúcida, ficando fina o Blastocisto em eclosão – quando rompe a zona pelúcida ▪ Consegue se ligar no útero e formar a placenta ➢ Blastocisto tem: o Uma camada de células externa chamada trofoblasto (que vira placenta) ▪ Entre as duas tem as junções ocludentes (Tight junctions) ▪ Bombeiam sódio para dentro, acumulando água • Blastocele – líquido pelo bombear de sódio e no final estoura o Uma camada de células interna chamada de massa celular interna (que vira o feto) ▪ Entre as duas tem as junções comunicantes (Gap junctions) ➢ Zona pelúcida – protege de aderir no lugar errado (se romper antes de chegar no útero, pode gerar uma gestação ectópica) Genoma Embrionário ➢ Genoma: todo material genético que existe nele (DNA) ➢ Ativação: começa a expressar o genoma (DNA) o DNA vira RNA que pela ação do ribossomo vira proteína o HSP – não deixa as proteínas “se enrolarem” depois de passar pelo ribossomo ➢ Descoberta: o Dominância materna inicial em híbridos interespecíficos ▪ Embrião do híbrido com as proteínas igual da mãe o Início da clivagem na ausência de um núcleo funcional o Desenvolvimento até o estágio de blástula (exceto em mamíferos) quando a transcrição nuclear é bloqueada o Expressão fenotípica de genes mutantes maternos ➢ Usa a transcrição materna de 1 a 4 células ➢ Usa a transcrição embrionária a partir de 8 células o Não depende mais da mãe ➢ Embrião bovino ativa genoma com 8 a 16 células ➢ Eclosão do blastocisto: o Bombeamento de Na (sódio) o Expansão pelo blastocele o Trofoblasto produz – síntese de proteases ▪ Colagenase / estripsina / estromalisina / ativador de plasminogênio Informações das Espécies ➢ Equinos: o Ampola do oviduto / Clivagem 24 hpf o Compactação 8-16 células o Chega no útero: sexto dia (mo-bi) o Retenção de óvulos no oviduto (PGE2) o Deutoplasmólise (extrusão – vai sumindo até 16 células, reabsorção) o Após entrada no útero, há formação de capsula acelular entre zona pelúcida (até 20 dias) ▪ Capsula precisa da interação com endométrio para ser formado ▪ Embrião in vitro não forma essa cápsula ➢ Cães: o Sincronia entre ovulações o Ovula: Ovócito primário sem extrusar o primeiro corpúsculo polar o Maturação no oviduto leva 2-5 dias o Ovulação 48h após pico de LH o Pico de LH 2-4 ng/ml de P4 o Ovulação 7ng/ml de P4 o Fertilização 2-3 dias pós ovulação (4-5 pLH) o Entra no útero 10 dias (mo-bi) o Eclosão 16 dias / Implantação 18 dias