Isolamento De Ácidos Nucléicos

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A
B
C
1 Marcar para revisão
Um pesquisador está organizando um experimento
para testar a eficiência de três métodos de extração de
DNA a partir de células bucais coletadas com swab.
Para garantir a validade científica dos resultados, ele
decide adotar um desenho experimental rigoroso,
baseado em amostragem aleatória simples e controle
das variáveis independentes.
Considerando os fundamentos do desenho
experimental e as boas práticas laboratoriais, qual
atitude representa um erro metodológico que pode
comprometer a confiabilidade dos resultados?
Incluir apenas voluntários que consentiram
participar do estudo
Definir previamente a concentração dos
reagentes utilizados em cada extração
Utilizar um mesmo técnico para realizar todas
as extrações, minimizando a variação.
D
E
A
B
Adotar como critério de seleção apenas os
voluntários disponíveis no dia da coleta.
Realizar as análises utilizando o mesmo
equipamento para todos os testes.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra D.
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Gabarito Comentado
Esse tipo de amostragem é considerada não
probabilística por conveniência, o que pode
introduzir vieses e comprometer a
representatividade dos dados. Para garantir
validade e generalização dos resultados, o ideal é
utilizar amostragem probabilística.
2 Marcar para revisão
Com relação à coleta, transporte, armazenamento e
processamento de amostras de sangue para posterior
extração de DNA, avalie as sentenças e assinale a
alternativa INCORRETA:
A amostra de sangue fresca deve ser
imediatamente resfriada e mantida a 2-8°C
até a extração do DNA.
O agente anticoagulante preferencialmente
utilizado é o EDTA ao invés da heparina.
C
D
E
Tubos de vidro devem ser evitados.
O rompimento das hemácias pode liberar o
grupamento heme, este é um contaminante
prejudicial. Portanto, devemos separar o
plasma.
A amostra de sangue não precisa ser
resfriada e pode ser transportada em
temperatura ambiente por até 2 dias.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra E.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
Para a correta preservação da amostra de sangue
para extração de DNA, é necessário que a mesma
seja imediatamente resfriada e mantida a uma
temperatura de 2-8°C. O transporte em
temperatura ambiente por até 2 dias pode
comprometer a integridade do DNA na amostra,
tornando a extração ineficaz.
3 Marcar para revisão
Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-
se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos
nucleicos, é importante a escolha adequada de
protocolos e reagentes para aquele material que se
quer extrair e para que fim se destina. Em um protocolo
de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como
reagente:
A
B
C
D
E
Proteases
Tampão
Nucleases
Sais
Álcool
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a alternativa
correta. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A resposta correta é: Nucleases. As nucleases são
enzimas que degradam o DNA e o RNA, e por isso
não devem ser usadas em um protocolo de
extração de DNA ou RNA.
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4 Marcar para revisão
Após completar a extração do DNA de uma amostra de
sangue, não há como saber se a extração foi
devidamente realizada a não ser que se faça um
controle de qualidade do material extraído. Com
relação ao controle de qualidade, podemos afirmar
que:
A
B
C
D
E
É composto por três etapas: quantificação,
coloração e validação.
Deve ser realizado a partir da observação,
estabelecimento de hipóteses, análise,
conclusões e divulgação de um relatório final.
A etapa de quantificação apenas pode ser
realizada com o uso da técnica de
fluorometria.
A espectrofotometria mede a quantidade de
luz, na faixa de 260 nm, absorvida pelo DNA
e RNA, desta forma é capaz de quantificar e
identificar a pureza da amostra.
A eletroforese é feita para medir a integridade
do extraído e tem como princípio diferenciar a
solubilidade de cada componente.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra D.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A espectrofotometria é uma técnica que mede a
quantidade de luz que é absorvida por uma
substância em uma determinada faixa de
comprimento de onda, neste caso, 260 nm. Esta
técnica é utilizada para quantificar e identificar a
pureza de amostras de DNA e RNA, pois essas
moléculas absorvem luz nessa faixa de
comprimento de onda. Portanto, a
espectrofotometria é uma ferramenta essencial no
Questão 8 de 10
Corretas (3)
Incorretas (7)
Em branco (0)
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
Lista de exercícios Isolamento… Sair
A
B
C
D
E
controle de qualidade após a extração do DNA de
uma amostra de sangue.
5 Marcar para revisão
O DNA (ácido desoxirribonucleico), material genético
de seres vivos, é uma molécula de fita dupla, que pode
ser extraída de forma caseira a partir de frutas, como
morango ou banana amassados, com uso de
detergente, de sal de cozinha, de álcool comercial e de
uma peneira ou de um coador de papel. O papel do
detergente nessa extração de DNA é:
Aglomerar o DNA em solução para que se
torne visível.
Promover lise mecânica do tecido para
obtenção de DNA.
Emulsificar a mistura para promover a
precipitação do DNA.
Promover atividades enzimáticas para
acelerar a extração do DNA.
Romper as membranas celulares para
liberação do DNA em solução.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra E.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A
B
C
O detergente tem a função de romper as
membranas celulares para liberação do DNA em
solução. Isso ocorre porque as membranas
celulares são compostas principalmente por
lipídios, e os detergentes são substâncias que têm
a capacidade de interagir com esses lipídios,
desestabilizando e rompendo a membrana celular.
Com a ruptura da membrana, o DNA contido no
interior da célula é liberado na solução.
6 Marcar para revisão
Em um laboratório especializado na extração de RNA a
partir de tecidos tumorais, uma bióloga observou que a
qualidade do RNA extraído estava comprometida, com
sinais de degradação. Após revisar os protocolos,
verificou-se que a amostra foi deixada à temperatura
ambiente por cerca de 3 horas antes da adição de
qualquer solução estabilizante.
Qual das alternativas descreve, de forma mais precisa,
o motivo da degradação observada?
A presença de hemoglobina nas células
tumorais acelera a degradação do RNA
A amostra não foi embebida em formol,
comprometendo a integridade do RNA.
A ausência de solução estabilizante permitiu a
ação contínua de ribonucleases
D
E
A
B
O transporte da amostra foi feito sem gelo
seco, aumentando a atividade das DNases.
A demora na adição de agentes quelantes
impossibilitou a extração adequada do RNA
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra C.
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Gabarito Comentado
As ribonucleases (RNases) são enzimas
extremamente estáveis e ativas, mesmo em
condições adversas. Sem a adição imediata de
estabilizantes ou congelamento adequado, essas
enzimas degradam o RNA rapidamente,
comprometendo a qualidade da extração
7 Marcar para revisão
Para selecionar uma amostra aleatória de tamanho n
de uma população formada por N unidades, que são
numeradas de 1 a N segundo uma certa ordem,
escolhe-se aleatoriamente uma unidade entre as k
primeiras unidades da população, onde k = N / n e
seleciona-se cada k-ésima unidade da população em
sequência. Esta técnica de amostragem denomina-se
amostragem:
Sistemática
Por etapas
C
D
E
Probabilística
Não-probabilística
Aleatória simples
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a alternativa
correta. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A técnica de amostragem descrita no enunciado é
conhecida como amostragem sistemática. Nesse
método,seleciona-se uma unidade aleatória entre
as k primeiras unidades da população, onde k é
igual a N (o tamanho total da população) dividido
por n (o tamanho da amostra desejada). Após essa
seleção inicial, cada k-ésima unidade da
população é selecionada em sequência. Portanto,
a alternativa correta é a "Sistemática".
8 Marcar para revisão
Durante uma capacitação em um laboratório de
análises clínicas, a equipe responsável pelos testes
moleculares está revisando os procedimentos para
garantir a qualidade das análises. Um dos técnicos
relata que uma amostra de sangue utilizada em um
teste de PCR apresentou resultado inválido. Ao
investigar o caso, a equipe descobriu que o sangue foi
armazenado com heparina como anticoagulante.
A
B
C
D
E
Diante dessa situação, qual das opções explica, de
forma mais adequada, a razão pela qual o resultado do
teste foi comprometido?
A heparina impede a separação do plasma,
impossibilitando a extração do DNA.
A heparina interfere nas reações químicas da
PCR, inibindo a amplificação do material
genético
A presença de heparina acelera a degradação
do RNA, comprometendo os testes
moleculares.
A heparina causa lise dos leucócitos,
impedindo a identificação de polimorfismos
genéticos
A utilização de heparina reduz a quantidade
de plasma disponível para análise, tornando o
teste inconclusivo
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a alternativa
correta. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A heparina, apesar de ser um anticoagulante
eficaz, é conhecida por inibir reações de PCR, pois
interfere diretamente na atividade da DNA
polimerase. Por isso, em testes moleculares que
utilizam essa técnica, ela deve ser substituída por
outros anticoagulantes mais compatíveis, como o
EDTA ou ACD
A
B
C
D
E
9 Marcar para revisão
Considerando a sequência de RNAm abaixo, qual dos
primers específicos para esta sequência deve ser
utilizado?
5' AUGCAAUUGGUCCAGUCGAUGCAGUCAGAACCAUG
3'
5' ATGCTTUUGGUCCAG 3'
5' GACCUGGTTAACGTA 3'
5' CATGGTTCTGACTGC 3'
5' TTTTTTTTTTTTTTT 3'
5' CGTCAGTCTTGGTAC 3'
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra C.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A resposta correta é: 5' CATGGTTCTGACTGC 3'. O
primer deve ser complementar à sequência de
RNAm, ou seja, deve ser antiparalelo à sequência
de RNAm. Além disso, o primer deve ser de
tamanho adequado para ser amplificado pelo PCR.
O primer 5' CATGGTTCTGACTGC 3' é
complementar à sequência de RNAm e é de
tamanho adequado para ser amplificado pelo PCR.
Portanto, este é o primer que deve ser utilizado.
A
B
C
D
E
10 Marcar para revisão
Na extração de RNA, todos os cuidados citados abaixo
devem ser tomados, exceto:
Uso de solução fenol/clorofórmio em pH
ácido.
Todo o material deve ser RNAse free e lavado
com soluções neutralizadoras de RNAses.
É preferível o uso de um aparelho sonicador
para a quebra das membranas celulares, ao
invés do uso de detergentes.
Na extração de RNA, usamos acetato de
amônio para auxiliar a separação entre a fase
orgânica e a aquosa.
O RNA deve ser rapidamente congelado em
nitrogênio líquido.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra D.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
O acetato de amônio não é utilizado para auxiliar
na separação entre a fase orgânica e a aquosa
durante a extração de RNA. As demais alternativas
são procedimentos corretos e comumente
adotados nesse processo.