Sequenciamento, Clonagem e Técnicas De Hibridização

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As técnicas de sequenciamento de Nova
Geração (NGS) baseiam-se em uma amplificação
clonal antes da reação de sequenciamento em si.
No entanto, cada equipamento utiliza uma
técnica diferente de amplificação clonal. Sobre
estas técnicas, assinale a opção correta.
Questão 1 de 6
Corretas (3)
Incorretas (3)
Em branco (0)
1 2 3 4 5
6
Lista de exercícios Sequenciament… Sair
A
B
C
Uma das técnicas utilizadas é a PCR em
ponte, na qual as fitas de DNA são
dispersas em uma placa,
aleatoriamente, e a PCR é realizada
através de pareamento de bases com
fitas de DNA presentes nesta placa;
esta técnica é utilizada na metodologia
do sequenciador 454
(pirosequenciamento).
A PCR em emulsão é uma técnica
utilizada na metodologia do
sequenciador 454
(pirosequenciamento) e consiste em
uma emulsão de água, em uma fase
oleosa, formando gotículas de água que
contêm os reagentes de PCR, uma fita
de DNA a ser sequenciada e uma
"bead" para sua ancoragem.
Uma das técnicas utilizadas é a PCR em
ponte, na qual as fitas de DNA são
dispersas em uma placa aleatoriamente
e a PCR é realizada através de
pareamento de bases com fitas de DNA
presentes nesta placa; esta técnica é
utilizada na metodologia do
sequenciador Sanger.
D
E
A PCR em emulsão é uma técnica
utilizada na metodologia do
sequenciador Sanger e consiste em
uma emulsão de água em uma fase
oleosa, formando gotículas de óleo que
contêm os reagentes de PCR, uma fita
de DNA a ser sequenciada e uma
"bead" para sua ancoragem.
A PCR em emulsão é uma técnica
utilizada na metodologia do
sequenciador Illumina e consiste em
uma emulsão de água em uma fase
oleosa, formando gotículas de água que
contêm os reagentes de PCR, uma fita
de DNA a ser sequenciada e uma
"bead" para sua ancoragem.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o gabarito
comentado!
Gabarito Comentado
Esta técnica é utilizada na metodologia do
sequenciador 454, também conhecido como
pirosequenciamento. A PCR em emulsão
consiste em uma emulsão de água em uma
fase oleosa, formando gotículas de água.
Cada gotícula contém os reagentes
necessários para a reação de PCR, uma fita
de DNA que será sequenciada e uma "bead"
que serve como ponto de ancoragem para o
DNA. As outras alternativas estão incorretas
porque associam técnicas de PCR a
sequenciadores de forma equivocada.
A
B
C
2 Marcar para revisão
O desenvolvimento da engenharia genética
permitiu a retirada de genes de uma espécie e a
posterior introdução deles em outro indivíduo de
espécie diferente. Com essa ferramenta em
mãos, o homem foi capaz de reproduzir genes de
interesse.
Com base nos conceitos de organismos
geneticamente modificados (OGMs), assinale a
alternativa correta.
COSTA, Marco
Antônio F.;
COSTA, Maria
de Fátima B.
Biossegurança
de OGM: uma
visão
integrada. Rio
de Janeiro:
Publit, 2009,
p. 154, com
adaptações.
Os OGMs, na respectiva totalidade, são
considerados transgênicos.
Organismos que tiveram genes
alterados apenas quanto à respectiva
posição ou expressão são transgênicos.
Os transgênicos são produzidos através
da alteração de genes em organismos
adultos, sendo a modificação genética
transmitida de uma célula a outra
através de transformação.
D
E
O setor da saúde não apresenta
qualquer tipo de questionamento em
relação ao uso dos OGMs,
considerando os inúmeros benefícios
trazidos por eles para o setor.
Os OGMs são organismos cujo material
genético (RNA ou DNA) tenha sido
modificado por qualquer técnica.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra E.
Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
Os OGMs são organismos cujo material
genético (RNA ou DNA) tenha sido
modificado por qualquer técnica. Isso está
correto porque a definição de um organismo
geneticamente modificado (OGM) é
exatamente essa: um organismo cujo
material genético foi alterado de alguma
forma que não ocorreria naturalmente pela
reprodução ou recombinação natural. As
técnicas usadas para criar OGMs geralmente
envolvem a manipulação direta do DNA ou
RNA do organismo.
3 Marcar para revisão
A hibridização in situ é uma ferramenta
diagnóstica de doenças genéticas, como a
distrofia muscular de Duchenne, e infecciosas,
como a infecção por papilomavírus humano
A
B
C
D
E
(HPV) em colo uterino. Sobre as técnicas de
hibridização in situ, é incorreto afirmar que:
Utilizam sondas de anticorpos, capazes
de reconhecer a sequência-alvo;
São feitas em tecidos e células fixadas
e permeabilizadas, para preservação
das estruturas celulares e entrada das
sondas, respectivamente;
As sondas podem ser marcadas com
enzimas, fluoróforos e radioatividade;
Permite a identificação com precisão do
local na célula ou tecido em que a
sequência-alvo está;
Exigem leitura através de microscópios
especializados.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra A.
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Gabarito Comentado
Na verdade, elas utilizam sondas de DNA ou
RNA complementares à sequência-alvo.
Essas sondas são projetadas para se ligar
especificamente à sequência-alvo,
permitindo sua detecção e localização.
Portanto, a afirmação de que as sondas de
anticorpos são usadas é falsa.
A
B
C
4 Marcar para revisão
Sequenciamento de nova geração, conhecido
também como NGS ou sequenciamento profundo
de ácidos nucleicos, é um termo geral utilizado
para descrever uma série de tecnologias
modernas de sequenciamento. Sobre esta
tecnologia é correto afirmar que:
Illumina (Solexa) e 454 (Roche) são
sequenciadores de nova geração que
realizam o sequenciamento direto tanto
de DNA quanto de RNA.
Uma das maiores vantagens das
tecnologias de sequenciamento de nova
geração é o fato de que as sequências
obtidas geralmente são longas,
contendo, ao menos, 1 Kpb.
Apesar dos inúmeros avanços gerados
pelas técnicas de sequenciamento de
nova geração, ainda é tecnicamente
impossível utilizá-las para analisar os
genes que estão sendo expressos em
um determinado tecido ou condição.
D
E
Uma das restrições ao uso do
sequenciamento de nova geração é a
necessidade de serem utilizadas
amostras grandes com alta
concentração de ácidos nucleicos.
As tecnologias recentes de
sequenciamento de ácidos nucleicos
permitem sequenciar tanto DNA como
RNA de forma mais rápida e barata do
que anteriormente era conseguido com
o sequenciamento de Sanger e, por
conta disto, estão revolucionando os
estudos de genomas e a biologia
molecular.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o gabarito
comentado!
Gabarito Comentado
As tecnologias recentes de sequenciamento
de ácidos nucleicos permitem sequenciar
tanto DNA como RNA de forma mais rápida e
barata do que anteriormente era conseguido
com o sequenciamento de Sanger e, por
conta disto, estão revolucionando os
estudos de genomas e a biologia molecular.
5 Marcar para revisão
O sequenciamento de DNA revolucionou nosso
conhecimento sobre o material genético e
revelou que a maior parte dele não codifica
nenhuma proteína. Com relação ao
A
B
C
sequenciamento de DNA, assinale a alternativa
correta.
Os métodos de sequenciamento têm
base na produção de fragmentos de
DNA de comprimento crescente, que
começam em um ponto comum e
possuem todos os quatro tipos de
nucleotídeos nas respectivas
extremidades.
Após a etapa de desnaturação do DNA,
é colocado um primer na extremidade 5'
de uma das cadeias e, com a ajuda de
uma DNA polimerase, sintetiza-se a
cadeia complementar por completo.
Após o término da reação de
sequenciamento, ela é submetida à
eletroforese capilar. Todos os
fragmentos recém-sintetizados, cada
um terminado em um nucleotídeo
diferente e cada um marcado com um
diferente fluoróforo, são separadospelas respectivas cores.
D
E
Os nucleotídeos empregados nessa
técnica são quimicamente modificados
de forma que não apresentam um
terminal hidroxila (3´-OH), impedindo a
inserção de um novo nucleotídeo pela
DNA polimerase.
O método de Sanger revolucionou o
sequenciamento de DNA pela não
utilização de substâncias radioativas
marcando os ddNTPs, e ficou
conhecido como sequenciamento da
segunda geração.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra D.
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Gabarito Comentado
Os nucleotídeos utilizados na técnica de
sequenciamento de DNA são quimicamente
modificados de forma a não apresentarem
um terminal hidroxila (3´-OH). Isso é crucial
para o processo, pois impede a inserção de
um novo nucleotídeo pela DNA polimerase.
Essa modificação química é uma
característica fundamental do método de
sequenciamento de DNA, permitindo a
determinação precisa da sequência de
nucleotídeos.
6 Marcar para revisão
Alguns processos biotecnológicos podem ser
empregados na produção de bioderivados, como
é o caso dos ensaios de hibridização. Qual nome
A
B
C
D
E
é dado para o processo de hibridização em que o
DNA é fixado e transferido para uma membrana
de nitrocelulose ou nylon?
Hibridização in situ
Hibridização por microarray
Southern Blot
Western Blot
Northern Blot
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o gabarito
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Gabarito Comentado
O processo de hibridização em que o DNA é
fixado e transferido para uma membrana de
nitrocelulose ou nylon é conhecido como
Southern Blot. Este método é utilizado para
detectar a presença de uma sequência de
DNA específica em uma mistura complexa
de DNA. A técnica envolve a transferência
de DNA de um gel para uma membrana,
seguida pela hibridização com uma sonda de
DNA marcada. Portanto, a alternativa correta
é a "Southern Blot".