Amplificação In Vitro De Dna

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A
B
C
1 Marcar para revisão
A importância primordial da sensibilidade da
PCR transcende diversos cenários
biomoleculares, incluindo diagnósticos clínicos,
pesquisas genéticas e análises de patógenos.
Nesse contexto, qual é exatamente o conceito
subjacente à sensibilidade da PCR?
Sensibilidade da PCR refere-se à
capacidade de amplificar DNA em
altas temperaturas, o que facilita a
detecção.
Sensibilidade da PCR representa a
habilidade da enzima Taq polimerase
em se ligar ao DNA-alvo.
Sensibilidade da PCR é a quantidade
máxima de DNA que pode ser
amplificada em uma reação.
Questão 1 de 10
Corretas (6)
Incorretas (4)
Em branco (0)
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
Lista de exercícios Amplificaç… Sair
D
E
Sensibilidade da PCR é a capacidade
de detectar o sinal do DNA-alvo em
amostras contendo-o na realidade.
Sensibilidade da PCR é a velocidade
com que os produtos de amplificação
são gerados.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra
D. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A sensibilidade da PCR se refere à
capacidade de identificar e amplificar com
precisão sequências de DNA-alvo
presentes em baixas concentrações nas
amostras. É importante para a detecção
confiável de alvos moleculares mesmo
quando estão presentes em quantidades
mínimas.
2 Marcar para revisão
A Biotecnologia utiliza conceitos das áreas da
Biologia Molecular e da Genética Molecular, que
têm uma ampla gama de técnicas, métodos e
equipamentos específicos para cada objetivo.
Com relação à análise e identificação de
material genético utilizando técnicas de biologia
molecular, assinale a opção correta.
A
B
C
D
E
A eletroforese em gel de agarose é
preferencialmente utilizada para
separar fragmentos de DNA, como
produtos de PCR.
Quando uma solução aquosa de DNA
é aquecida até 100 °C ou exposta a um
pH maior ou igual a 13, a hélice da
molécula rapidamente se dissocia em
duas fitas duplas.
Cromossomos inteiros não podem ser
individualizados por meio de técnicas
de Biologia Molecular.
Para análise de perfil genético, por
exemplo, na Biologia forense, utiliza-
se a tecnologia do DNA recombinante,
ou por clonagem gênica.
A hibridação de sondas de DNA com
RNAs celulares em uma qPCR permite
determinar se um gene sofreu ou não
uma mutação.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A resposta correta é: A eletroforese em gel
de agarose é preferencialmente utilizada
para separar fragmentos de DNA, como
produtos de PCR.
A
B
C
D
E
3 Marcar para revisão
No âmbito da replicação do DNA in vitro, a
enzima polimerase assume um papel de
extrema importância e centralidade. Qual é a
principal função desempenhada pela enzima
polimerase durante a replicação do DNA em
ambiente controlado?
Abrir a fita dupla de DNA em fitas
simples.
Adicionar os primeiros nucleotídeos à
fita sintetizada.
Realizar a complementação das bases
nitrogenadas.
Quebrar as pontes de hidrogênio entre
as bases.
Neutralizar a carga elétrica das bases
nitrogenadas.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra
C. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A enzima polimerase é responsável por ler
cada base nitrogenada da fita molde
(simples) e adicionar a base nitrogenada
complementar na fita que está sendo
sintetizada, formando a nova fita de DNA.
Essa complementação das bases
nitrogenadas (A com T e C com G) é
A
B
C
fundamental para a replicação precisa da
informação genética.
4 Marcar para revisão
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
desempenha um papel fundamental na biologia
molecular, possibilitando a amplificação seletiva
de segmentos específicos de DNA. Qual é a
diferença central entre a PCR qualitativa e a
PCR quantitativa (em tempo real)?
A PCR qualitativa requer ciclos
adicionais para quantificar o produto,
enquanto a PCR quantitativa não
necessita de revelação posterior.
A PCR quantitativa é mais rápida e não
exige revelação posterior, enquanto a
PCR qualitativa é mais lenta.
A PCR qualitativa ocorre em um
termociclador especializado (tempo
real), enquanto a PCR quantitativa
utiliza um termociclador comum.
D
E
A PCR quantitativa é mais sensível na
detecção de alvos específicos
necessitando de amplificação em
tempo real, enquanto a PCR qualitativa
é mais rápida na amplificação.
A PCR qualitativa não requer
amplificação do produto alvo,
enquanto a PCR quantitativa quantifica
a presença do alvo em tempo real.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
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Gabarito Comentado
A principal diferença entre a PCR
qualitativa e a PCR quantitativa (em tempo
real) é que a PCR qualitativa requer ciclos
adicionais para amplificar o produto alvo e,
posteriormente, uma etapa de revelação
para determinar a presença ou ausência do
alvo amplificado. Por outro lado, na PCR
quantitativa em tempo real, a amplificação
e a quantificação são realizadas
simultaneamente, eliminando a
necessidade de uma etapa adicional de
revelação.
5 Marcar para revisão
SNPs são empregados amplamente para a
identificação humana e possuem diferenças
relevantes. A análise dos SNPs também pode
estar associada aos fenótipos individuais,
A
B
C
D
E
havendo uma possibilidade futura de
identificação de traços físicos como, por
exemplo, a cor da íris. Os SNPs são:
Elementos repetitivos do genoma
nuclear
Sequências presentes somente no
DNA mitocondrial
Homozigotos
Polimorfismos de nucleotídeo único;
uma variação na sequência de DNA
Heterozigotos
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
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Gabarito Comentado
Os SNPs, ou Polimorfismos de Nucleotídeo
Único, são variações na sequência de DNA
que ocorrem quando um único nucleotídeo
(A, T, C ou G) na sequência do genoma é
alterado. Eles são uma ferramenta
importante na genética e na genômica, pois
podem ajudar a identificar genes
associados a doenças e a responder a
medicamentos. Portanto, a alternativa
correta é a D: "Polimorfismos de
nucleotídeo único; uma variação na
sequência de DNA".
A
B
6 Marcar para revisão
No diagnóstico clínico-molecular, a reação em
cadeia da polimerase (PCR) em tempo real
pode ser utilizada para a avaliação da carga
viral ou bacteriana, para a determinação da
resistência a antibióticos e, até mesmo, para o
prognóstico de tumores malignos. A figura
abaixo apresenta ciclos de amplificação de
amostras por PCR em tempo real, sendo (A)
uma amplificação de um determinado segmento
gênico que identifica um determinado marcador
tumoral em células neoplásicas e (B) uma
amplificação do mesmo segmento gênico em
células não neoplásicas.
A partir das informações apresentadas, conclui-
se que:
o Ct (ciclo threshold) pode ser
determinado pela intersecção da linha
do limiar de detecção da reação
threshold, com a linha da amplificação
gênica de cada amostra.
O aumento da fluorescência indica
que a amplificação da sequência-alvo
está ocorrendo, pois a cada ciclo,
durante a desnaturação da dupla fita,
ocorre liberação da fluorescência.
C
D
E
A linha paralela ao eixo referente ao
número de ciclos, na altura em que se
inicia a fase exponencial da
amplificação gênica, denominado
threshold, representa falsos sinais
positivos por contaminação das
amostras por DNA genômico.
A análise comparativa das duas
amostras deve ser realizada a partir da
estabilização da amplificação, que
ocorre na fase platô, sendo alcançada
no ciclo 28 para a amostra A, e no
ciclo 40, para a amostra B.
O maior Ct (26) é observado no início
da fase exponencial de amplificação
em células não neoplásicas ( B ), e
indica maior expressão
comparativamente às células
neoplásicas ( B ), que apresentamCt =
17, não sendo esta sequência-alvo um
bom marcador tumoral.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
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Gabarito Comentado
A resposta correta é: o Ct (ciclo threshold)
pode ser determinado pela intersecção da
linha do limiar de detecção da reação
threshold, com a linha da amplificação
gênica de cada amostra.
A
B
C
7 Marcar para revisão
Ao se analisar a evolução das estratégias para
determinação de identidade genética, que se
tornaram um procedimento sensível e
informativo, pode-se notar três fases: uma
inicial, após a descrição de um marcador
voltado ao polimorfismo genético em 1980, que
deu origem às impressões digitais de DNA, com
a aplicação de técnicas de polimorfismo de
tamanho dos fragmentos de restrição -
restriction fragment length polymorphism
(RFLP) -; uma segunda fase de incorporação de
novas técnicas, no final da década de 80 do
século XX, como a reação em cadeia da
polimerase (PCR), que permitiu um significativo
aumento na sensibilidade dos métodos e a
consequente identificação de indivíduos com
amostras colhidas de fragmentos de unhas,
goma de mascar etc.; e uma terceira etapa,
mais recente, cuja ênfase foi a padronização
metodológica e estatística e a geração de
bancos de dados.
Considerando as aplicações da PCR, assinale a
opção correta.
Amplificação de conjuntos de
repetições em tandem curtas (short
tandem repeats) facilita a identificação
de indivíduos.
O uso correto da PCR requer cuidados
para evitar a desnaturação do DNA na
etapa em que as fitas são separadas.
A RT-qPCR permite a amplificação por
meio da adição de aminoácidos a
novas fitas de polímero sintetizadas.
D
E
Uma das limitações da PCR é a
impossibilidade de se amplificar
diferentes sequências
simultaneamente.
Ao se planejar um experimento para
identificação de indivíduos, deve-se
ter o cuidado de escolher sondas para
qPCR em regiões que não contenham
mutações.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A amplificação de conjuntos de repetições
em tandem curtas (short tandem repeats)
facilita a identificação de indivíduos. Isso
ocorre porque essas repetições são únicas
para cada indivíduo, funcionando como
uma espécie de "impressão digital"
genética. A técnica de PCR permite
amplificar essas sequências específicas de
DNA, tornando possível a identificação de
indivíduos a partir de pequenas amostras
de material genético.
8 Marcar para revisão
A Biotecnologia trabalha predominantemente
manipulando material genético de seres vivos;
para a maioria dos organismos, o material
genético é a molécula de DNA. Acerca da
A
B
C
D
E
estrutura da molécula de DNA, assinale a opção
correta.
O DNA é composto por quatro tipos de
bases nitrogenadas: adenina, citosina,
timina e uracila.
O açúcar contido na molécula de DNA
é a ribose.
Em uma cadeia de DNA, os
nucleotídeos se ligam aos açúcares e
fosfatos por pontes de hidrogênio.
As duas fitas que compõem a
molécula de DNA são ligadas por
pontes de hidrogênio entre suas bases
nitrogenadas.
Há complementaridade entre as bases
nitrogenadas adenina e timina e entre
guanina e uracila.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra
D. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
As duas fitas que compõem a molécula de
DNA são ligadas por pontes de hidrogênio
entre suas bases nitrogenadas. Isso ocorre
porque a estrutura do DNA é uma dupla
hélice, onde as bases nitrogenadas de
cada fita se ligam às da outra fita por meio
de pontes de hidrogênio, formando pares
de bases. Adenina sempre se liga à timina
e citosina sempre se liga à guanina,
A
B
C
D
E
garantindo a complementaridade e a
replicação precisa do DNA.
9 Marcar para revisão
A principal função do PCR multiplex é permitir a
detecção simultânea de múltiplos alvos de DNA
em uma única reação. Qual é a principal função
da técnica de PCR multiplex no diagnóstico de
doenças genéticas?
Amplificar regiões próximas de
repetições de DNA.
Identificar a presença de infecções
virais.
Determinar a estrutura tridimensional
de proteínas.
Avaliar a expressão gênica em
diferentes tecidos.
Detectar pequenas mutações em
alelos distintos.
Resposta incorreta
Opa! A alternativa correta é a letra
E. Confira o gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A técnica de PCR multiplex é utilizada para
detectar pequenas mutações em alelos
distintos em uma mesma reação. Isso é
A
B
C
especialmente útil para reconhecer
mutações que poderiam levar ao
desenvolvimento de doenças genéticas,
como no caso de alelos mutantes
associados a doenças hereditárias.
10 Marcar para revisão
Em algumas situações, a obtenção de DNA a
partir de RNA transcrito é importante, como, por
exemplo, na construção de bibliotecas.
Considerando os conceitos relacionados a essa
estratégia e a figura acima, que mostra uma das
possíveis estratégias para síntese de DNA a
partir de RNA, assinale a opção correta.
A reação mostrada na etapa 3 ilustra a
atividade da enzima transcriptase
reversa.
A reação mostrada na etapa 4 ilustra a
atividade da enzima DNA polimerase.
Na etapa 4, para que ocorra a reação,
é suficiente a adição dos nucleosídios
representados por A, U, C, G.
D
E
O DNA obtido pelo método ilustrado é
denominado tDNA.
A reação mostrada na etapa
demonstra a desnaturação da fita de
mRNA.
Resposta correta
Parabéns, você selecionou a
alternativa correta. Confira o
gabarito comentado!
Gabarito Comentado
A resposta correta é: A reação mostrada na
etapa 4 ilustra a atividade da enzima DNA
polimerase.