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1. Fixação do Complemento (FC) Conceitos importantes 2. Princípio Antigeno (Ag): que induz resposta imune Princípio e se liga especificamente ao anticorpo. 0 sistema complemento é ativado e consumido Ocorre quando anticorpos unem ("fixado") quando formação do complexo Ag-Ac. Anticorpo (Ac): imunoglobulina que se liga ao contendo antigenos, formando Formação A presença de anticorpos especificos no soro é de forma específica. agregados (grumos) visiveis a olho nu. de grumos inferida pela de Ag-Ac Epítopo: porção do reconhecida pelo anticorpo. Pode ser utilizada para detectar antigenos (aglutinação) Complexo imune: resultado da ligação Ag-Ac. ou anticorpos. Como funciona (etapas) complemento (fixação) Soro: fração líquida do sangue, sem células e sem Tipos 1 Mistura-se soro do paciente com um antigeno utilizada nas sorológicas. Aglutinação direta Aglutinação indireta (passiva) conhecido e complemento. Especificidade: capacidade de reconhecer apenas 2 Se houver anticorpos forma-se 0 complexo Antígenos naturalmente Antigenos ou anticorpos adsorvidos 0 antigeno correspondente. Ag-Ac e complemento é consumido (fixado). presentes na superficie celular em particulas artificiais gelatina, Sensibilidade: capacidade de detectar pequenas hemácias). 3 Adicionam-se hemácias sensibilizadas por anticorpos (bactérias, hemácias, etc.). quantidades do analito. Exemplo: pesquisa de fator reumatoide, (sistema indicador). Exemplo: tipagem sanguínea ABO. Sem hemólise detecção de antigenos virais. 4 Observa-se a hemólise. (positivo) Resultado Sem hemólise Técnicas Formação de grumos Ausência de grumos Resultado Com hemólise Resultado POSITIVO Resultado NEGATIVO Complemento consumido Complemento livre (fixado) Resultado NEGATIVO Aplicações Resultado POSITIVO Diagnóstico rápido de infecções. Aplicações Diagnóstico de algumas doenças infecciosas (ex.: Sorológicas Tipagem Detecção de anticorpos ou viroses, riquétsias, fungos, parasitos). Vantagens Limitações Estudos imunológicos. Simples, rápida e de baixo custo. Menor sensibilidade que outras técnicas. Vantagens Limitações Resultados Pode ocorrer reações inespecificas. Boa especificidade. Técnica mais complexa. Interpretação subjetiva em alguns casos. Menor IMUNOLOGIA Detecta anticorpos contra diversos tipos de antigenos (virus, bactérias, etc.). Atualmente pouco utilizada (substituida por ELISA, entre outras). Baseadas na interação 4. Precipitação (Ag-Ac) Princípio Formação Ocorre quando reagem com anticorpos 3. Inibição da Aglutinação para detectar, identificar ou quantificar de precipitado especificos, formando complexos (precipitados) visiveis. antígenos, anticorpos ou outras substâncias E necessária uma proporção adequada entre antigeno e anticorpo (complexo insolúvel) livre Princípio de interesse diagnóstico. (zona de equivalência). bloqueia 0 anticorpo A presença do antigeno livre na amostra impede Tipos Em meio líquido Em gel (imunodifusão) que ocorra a aglutinação, pois ele se liga ao Principais aplicações das técnicas sorológicas Forma-se um precipitado visivel Forma-se uma linha de precipitação anticorpo e bloqueia. no tubo de ensaio. no gel de Diagnóstico de doenças infecciosas. Como funciona (etapas) Exemplo: reação de floculação Exemplos: Ouchterlony (difusão dupla), Detecção de autoanticorpos e doenças autoimunes. (VDRL para sifilis). Mancini (difusão radial). 1 anticorpo é incubado com a amostra. Tipagem sanguinea. Dosagem de hormônios e outras moléculas. Aplicações Limitagens 2 Se 0 estiver presente, ele ocupa os anticorpos. Estudos de epidemiologia e imunidades. Identificação e quantificação de proteínas. Não ocorre Menor sensibilidade. 3 Em seguida, são adicionadas contendo Triagem sorológica em bancos de sangue. Diagnóstico laboratorial. aglutinação Requer proporção adequada de Ag e Ac. mesmo antigeno. (positivo) Pesquisa e desenvolvimento em imunologia. Estudos imunológicos. Pode ser demorada. 4 Não ocorre aglutinação. Vantagens gerais 5. Imunofluorescência (IF) Resultado Ausência de aglutinação Presença de aglutinação Especificidade na detecção. Princípio Resultado POSITIVO Resultado NEGATIVO Aplicação em diferentes amostras (soro, plasma, líquor, etc.). Utiliza anticorpos marcados com fluorocromos fluorescentes) para localizar antigenos ou anticorpos em células e (antígeno presente) (antígeno ausente) Importantes para triagem e diagnóstico laboratorial. A é observada em microscopio de Algumas técnicas são simples e de baixo custo. Fluorocromos mais usados: FITC (isotiocianato de fluoresceina) e rodamina. Aplicações Imunofluorescência direta (IFD) Imunofluorescência indireta (IFI) Testes hormonais (ex.: detecção de hCG em métodos clássicos). Limitações gerais anticorpo marcado liga-se diretamente 0 anticorpo primário não marcado. Diagnóstico de infecções virais. ao antigeno na amostra. Um anticorpo secundário fluorescente Podem apresentar reações cruzadas. Mais e com menos etapas. liga-se ao anticorpo primário. Pesquisa de antigenos em geral. Sensibilidade e especificidade variáveis. Aplicações: diagnóstico de infecções virais, Maior sensibilidade (amplificação do sinal). para moléculas pequenas (hormônios, antigenos solúveis). Algumas são mais subjetivas. pesquisa de antigenos em tecidos (ex.: raiva, Aplicações: pesquisa de autoanticorpos Vantagens Substituidas em muitos casos por métodos mais sensiveis herpes, clamidia). (ex.: diagnostico de doenças autoimunes, detecção de anticorpos contra microrganismos. e automatizados (ex.: ELISA, PCR). Limitações Vantagens Limitações Menor sensibilidade. "Sorologia: pequenas reações, Alta sensibilidade e especificidade. Requer de Hoje pouco utilizada, por métodos mais modernos. Permite localizar 0 antigeno no Equipamentos e reagentes mais caros. grandes diagnósticos!" Util em diagnóstico de infecções e doenças Pode apresentar inespecifica.

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