ATIVIDADE DA URÉASE EXTRAÍDA COM SOLVENTE ALCOÓLICO SOBRE CONCENTRAÇÃO DE UREIA

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FACULDADE GUAIRACÁ
INSTITUTO SUPERIOR DE EDUCAÇÃO
BACHARELADO EM FARMÁCIA
ATIVIDADE DA URÉASE EXTRAÍDA COM SOLVENTE ALCOÓLICO
SOBRE CONCENTRAÇÃO DE UREIA
GUARAPUAVA
2016
Anderson Ricardo Ferreira Lima;
ATIVIDADE DA URÉASE EXTRAÍDA COM SOLVENTE ALCOÓLICO
SOBRE CONCENTRAÇÃO DE UREIA
 
 
Relatório 
a ser entregue ao Curso de Farmácia, como requisito parcial
 de avaliação da disci
plina de Enzimologia
, a
o Professor Guilherme Barroso
.
GUARAPUAVA
2016
1.0 INTRODUÇÃO
As enzimas são proteínas que catalisam reações químicas sendo catalisadores celulares poderosos, as enzimas são proteínas especializadas em acelerar reações biológicas e geralmente atuam especificamente em um dado substrato. O substrato liga-se à enzima num sítio especial desta, chamado sítio ativo, onde ocorre a reação enzimática. Essa é a região da enzima que possui certos aminoácidos que se ligam ao substrato por ligações não covalentes (Motta, 2006).
 A uréase é uma enzima que, em meio aquoso, catalisa a hidrólise da uréia em amônia e dióxido de carbono e ocorre em algumas sementes, tais como soja, melão, melancia, entre outras. Algumas enzimas requerem um componente não proteico para sua atividade denominado cofator. O cofator enzimático da uréase é o íon metálico Ni2+ (Ciurli e cols., 1999), portanto, a presença de íons de níquel ativa o sítio da uréase e é essencial tanto para a atividade funcional como para a integridade estrutural dessa enzima. (Almeida et al,2008).
A uréase é uma enzima extracelular produzida por bactérias, actinomicetos e fungos do solo ou, ainda, originada de restos vegetais. Sua atividade é aparentemente ótima em pH 8,5 a 9,0 (LANNA et al; 2010)
Atualmente a uréase é utilizada em procedimentos de diagnósticos clínicos, na determinação de uréia em fluídos biológicos como urina e sangue. A hidrólise da uréia, empregando essa enzima como biocatalisador, na temperatura de 20°C, é mais rápida que a hidrólise realizada em meio ácido a uma temperatura de 60 °C (Almeida et al,2008).
2.0 OBJETIVO
Este trabalho tem por objetivo realizar extração de uréase com solvente alcoólico sobre concentração de ureia.
3.0 Materiais
Tubos de ensaio;
Banho maria
Pipeta 5mL;
Vidraria para solução;
Liquidificador;
Filtro de papel; 
funil;
Soluções de ureia á 0,1 % e 5% (50ml);
Álcool etílico 98%.
4.0 METODOLOGIA
Para iniciar o processo, deve-se identificar os tubos. Sendo então, adicionados ao liquidificador 100ml de agua + 50 sementes de melancia, triturando-se e sendo filtrado com papel filtro com aproximadamente 110ml. Este mesmo volume é dividido em outros dois volumes, o qual sera V1 50ml em temperatura ambiente, e V2 50ml aquecido em 100°C por 5 minutos, para poder fazer desnaturação da enzima.
Em seguida, tritura-se 6 folhas de repolho roxo com 100ml de etanol, e filtra. Com os tubos já identificados, prepara-se as soluções, conforme mostra tabela 1.
	Tubo
	Soluções
	T1
	1ml solução repolho + 2ml ureia 0,1% + 1ml de solução melancia (V1) (agitar e observar).
	T2
	1ml solução repolho + 2ml ureia 0,1% + 1ml de solução melancia (V2) (agitar e observar).
	T3
	1ml solução repolho + 2ml ureia 5% + 1ml de solução melancia (V1) (agitar e observar).
	T4
	1ml solução repolho + 2ml ureia 5% + 1ml de solução melancia (V2) (agitar e observar).
Tabela 1 – Procedimento
RESULTADO E DISCUSSÃO
Geralmente as enzimas são ativas em uma estreita faixa de pH e, na maioria dos casos, há um pH ótimo definido. O efeito do pH sobre a atividade enzimática se deve às variações no estado de ionização dos componentes do sistema e à medida que o pH varia. Como as enzimas são proteínas, contêm inúmeros grupos ionizáveis e existem em diferentes estados de ionização. Por isso, a atividade catalítica é restrita a uma pequena faixa de pH. É importante destacar, contudo, que a estabilidade da enzima ao pH ótimo depende inclusive de muitos fatores como temperatura, força iônica, concentração de íons metálicos, concentração de substratos ou cofatores da enzima, contaminantes (Almeida et al,2008).
O efeito da temperatura sobre a cinética de reação enzimática é resultado de dois eventos simultâneos. O primeiro evento é caracterizado pelo aumento na velocidade da reação catalisada em resposta ao aumento da temperatura do sistema. A elevação da temperatura provoca o aumento da energia cinética das moléculas componentes do sistema. Nesta pratica, observou-se o comportamento da enzima uréase extraída das sementes de melancia, em temperatura ambiente e submetida a temperatura de 100°C durante 5 minutos, desnaturando a mesma, para que haja perda total da atividade catalítica.
Sendo então, a enzima uréase ativa (temperatura ambiente) em contato com o substrato, transforma a ureia em amônia e dióxido de carbono. Assim entende-se que, a decomposição de um mol de ureia, origina a formação de dois mols de NH3 e um mol de CO2, conforme figura 1.
Figura 1 - Atividade da enzima uréase
Devido a presença de CO2 na reação, pode-se esperar uma variação no pH do meio para níveis inferiores ao pH 7,0. Porém, houve através da mudança de coloração do violeta para o verde, indicou que o pH da solução aumentou para um valor igual ou maior que 11,0, como referido na Tabela 2.
	Cor
	Faixa de pH
	Vermelho
	1-4
	Violeta
	5-8
	Azul
	9-10
	Verde
	11-12
	Amarelo
	>13
Tabela 2 – Mudanças de coloração referentes ao pH
O aumento do pH pode ser atribuído a presença de amônia, devido sua ionização em meio aquoso, disponibilizando hidroxilas na solução, a reação de decomposição da amônia libera quantidade superior a quantidade de gás carbônico, predominando então o meio básico na solução, o que confere a coloração verde nos tubos 3 e 4, pode ser considerado também que nestes tubos foi utilizado a ureia em maior concentração, portanto, quanto mais ureia maior a formação de amônia, o que irá resultar em meio básico.
Figura 2 – Resultados obtidos
Através do aquecimento da solução de sementes de melancia, houve a desnaturação da enzima, tornando-a inativada pelo calor, porém a reação pode ocorrer mas em menor velocidade, este fato é demonstrado nos tubos 1 e 2. Neste tipo de reação, não há liberação de hidroxila em solução, portanto não há alterações na coloração e no pH da solução.
A reação de coloração durante o processo da experimentação aconteceu conforme o esperando, ainda que em uma velocidade muito grande, onde quase não foi possível observar as cores transitórias antes do de alcançar a cor final.
Os resultados encontram-se dentro dos padrões esperados, apresentando as variações segundo a concentração de ureia e pH, sendo que os mesmo podem ser considerados como uma identificação qualitativa, ocorrida por mudança ácido-base.
Através dos resultados obtidos, pode-se constar que a prática foi de suma importância para o desenvolvimento dos acadêmicos, agregando aos mesmo conhecimentos e experiências na área, permitindo aos mesmos observar mudanças referentes ao pH de cada solução, sendo também observado as diferentes concentrações de ureia e a interferência de temperatura em cada meio.
Conclusão
A prática em questão foi realizada com sucesso, sendo possível diferenciar visivelmente mudanças no pH, através da coloração e por mudanças de concentração de ureia e pelo aquecimento da solução. 
Considerações Finais
A identificação de pH e diferenciação da ação de cada componente foi observada nesta prática.
 Referências Bibliográficas
Almeida, V.V, Bnafé G.E, Stavanato B.F, Souza E.N, Visentainer L.J, Matsushita M., Catalisando a Hidrólise da Uréia em Urina – 2008.
MOTTA, V.T. Bioquímica Básica – Enzimas. Disponível em . (Acesso em 2016).http://professor.pucgoias.edu.br/SiteDocente/admin/arquivosUpload/16673/material/bioquimica-basica.pdf
LANNA Anna Cristina; Silveira P. M., Silva M. B., Ferraresi T. M., Kliemann H. J. - Atividadede Urease no Solo com Feijoeiro Influenciada Pela Cobertura Vegetal e Sistemas de Plantio - R. Bras. Ci. Solo, 34:1933-1939, 2010