Apostila praticas em Hematologia

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HHEEMMAATTOOLLOOGGIIAA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Biomédica Jessyka Farrah Fernandes Campos 
Biomédica CRBM - 22526 
 
 
 
CAMPINAS 
2013 
2 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
ÍNDICE 
 
 
 
 
1. ESFREGAÇO SANGUÍNEO 04 
2. DETERMINAÇÃO DO HEMATÓCRITO 11 
3. CONTAGEM DE ERITRÓCITOS 14 
4. CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS (CL) 17 
5. CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCÓCITOS (DIF) 21 
6. DETERMINAÇÃO DA HEMOGLOBINA 23 
7. INDICES HEMATIMÉTRICOS 27 
8. CONTAGEM DE RETICULÓCITOS 29 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
HEMOGRAMA 
 
 
 
O hemograma é uma análise ao sangue que tem o intuito de avaliar os 
componentes sanguíneos. Essa análise serve para fazer o diagnóstico correto 
e o acompanhamento da evolução de doenças como anemia, infecções 
bacterianas ou virais, inflamações, leucemias ou plaquetopenias, por exemplo. 
O hemograma consiste de analisar parâmetros como: Leucócitos, Eosinófilos, 
Eritrócitos, Hemoglobina, Hematócrito, Volume corpuscular médio, 
Hemoglobina corpuscular média e Leucograma. 
Para realizar com competência técnica o hemograma é preciso seguir 
uma linha de conduta devidamente padronizada que se inicia com a recepção 
do paciente. Essa fase inclui a própria receptividade, oferecendo ao cliente um 
ambiente adequado com tratamento profissional. A identificação do paciente 
deve conter os seguintes dados: nome completo, sexo, idade ou data de 
nascimento, endereço completo, telefone, nome do médico que solicitou o 
hemograma e o número do registro do paciente no laboratório. A coleta deve 
ser precedida por algumas observações como: estado físico do paciente 
(normal, ofegante, febril, excitado, desidratado, etc.) e se está fazendo uso de 
algum medicamento. As informações pertinentes devem ser anotadas no 
prontuário do paciente. A obtenção da amostra de sangue deve ser realizada 
com o paciente descansado, bem acomodado (deitado ou sentado), com o 
garrote suficientemente ajustado evitando seu uso prolongado. 
Após a coleta, o tubo contendo o sangue, deve ser homogeneizado 
lentamente por inversão no mínimo por cinco vezes e, a seguir, retirar pequena 
alíquota para fazer o esfregaço sanguíneo. O tubo com o sangue, esfregaço e 
prontuário devem ser encaminhados juntos para a análise no período máximo 
de 4 horas (muitos neutrófilos têm vida média de 4 horas). Após as análises o 
profissional de laboratório tem o dever de conferir os resultados, inter-
relacionando-os e confrontando-os com idade, sexo, uso de medicamentos e 
com o estado físico do paciente (quando alterado) anotado no prontuário. 
 
 
 
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1. ESFREGAÇO SANGUÍNEO 
 
O esfregaço sanguíneo é um importante exame, pois permite avaliar as 
células sanguíneas quanto a alterações de forma, presença ou não de 
parasitos, inclusões e anemias. 
 O esfregaço sanguíneo bem feito é composto por três partes: espessa, 
medial e fina. A coloração é efetuada com corantes que tem em sua 
composição o azul de metileno, a eosina e o metanol. Há vários tipos de 
métodos: Leishman, Giemsa, May-Grunwald, Wright, panóptico, etc. Alguns 
desses métodos necessitam de tampão com pH 7.0 e de baixa molaridade 
(água tamponada). A melhor análise se consegue na porção média do 
esfregaço (figura 1), enquanto que na porção fina os eritrócitos e leucócitos 
aparecem geralmente com deformações artefatuais. Ao percorrer o esfregaço é 
necessário obedecer a um padrão de deslizamento transversal e longitudinal, 
contemplando o corpo do esfregaço. 
 
 
Figura 1: área recomendada do esfregaço sangüíneo para contagem diferencial. 
 a) destaque da área b) padrão para contagem. 
 
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1.1 Amostra 
Sangue total periférico colhido com EDTA, porém para uma melhor 
qualidade da lâmina pode-se usar sangue venoso sem anticoagulante 
 
1.2 Interferentes 
 
As lâminas feitas a partir de sangue colhido com anticoagulantes devem 
ser confeccionadas até 30 minutos após a coleta, para evitar deformações 
celulares. Não usar amostras com fortes sinais de hemólise e nem com 
presença de coágulos. 
Outros interferentes: Sangue hemolisado e presença de coágulos; Uso 
de medicação continua 10 dias antes do exame; Coleta de sangue periférico 
total após grande esforço físico. 
OBS: É imprescindível o controle de qualidade interno, com revisão de 
no mínimo 10% das lâminas positivas/alteradas e 15% das negativas/normais, 
por outro microscopista mais experiente do serviço e o controle inter-
laboratorial com o laboratório de referência ao qual estiver ligado. 
 
1.3 Equipamentos e materiais necessários 
 
Lâmina 
Lâmina extensora 
Suporte para Coloração 
Pipetas para medir amostras e reagentes 
Gaze 
Cronômetro 
Microscópio 
 
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1.4 Procedimento técnico 
 (A) Colocar gota de sangue total na extremidade de uma lâmina de vidro. 
(B) Posicionar a borda de uma se lâmina extensora (mantida a um ângulo de 
45 graus) sobre a gota de sangue até que essa disperse. 
(C) Posicionar a primeira lâmina em uma superfície plana e tracionar a 
segunda lâmina rápida e uniformemente para a outra extremidade da primeira. 
(D) O esfregaço deve ter uma borda fina e irregular, como mostra a figura 2. 
Esfregaços espessos podem ser produzidos espalhando-se uma gota de 
sangue em um pequeno círculo na lâmina. Após secagem do esfregaço a 
lâmina deve ser identificada em uma das extremidades, com data, espécie, 
identificação do paciente e localização da coleta. 
 
 
Figura 2: esquema ilustrando a confecção de um esfregaço sanguíneo 
 
 
 
 
 
 
 
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1.5 Problemas encontrados na preparação de esfregaços sanguíneos e 
suas possíveis causas 
 
 
PROBLEMAS POSSÍVEL(IS) CAUSA(S) 
Esfregaço muito fino ou muito longo 
* Gota de sangue muito pequena. 
*Lâmina extensora em um ângulo muito 
baixo. 
*Velocidade incorreta na distensão. 
Esfregaço muito grosso ou muito curto. 
*Gota de sangue muito grande. 
*Lâmina extensora em um ângulo muito 
alto. 
*Velocidade incorreta na distensão. 
Estrias ou ondas no esfregaço. 
*Pressão desigual na lâmina extensora. 
*Hesitação no movimento de distensão. 
 
Vazios no esfregaço. 
 
*Lâmina suja (gordura). 
*Borda irregular ou suja da extensora. 
Distribuição desigual das células. 
 
*Pressão desigual durante a distensão. 
*Demora em distender o sangue. 
*Bordo irregular ou suja da extensora. 
Artefatos ou morfologia incomum das 
células. 
*Esfregaço secou muito lentamente. 
*Esfregaço não foi fixado dentro de 1 hora 
após o preparo. 
*Alta umidade no ambiente. 
 
 
1.6 Coloração pelo Método Leishman 
 
1- Coloque o esfregaço seco na estante de coloração ou em uma superfície 
plana com o lado do sangue para cima 
2- Cubra o esfragaço com o corante de Leishman* (eosina azul de metileno), 
sem deixar extravasar pelos lados da lâmina 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
* o corante de Leishman (DINÂMICA) pode ser adquirido já dissolvido ou para 
ser preparado. Para realizar a diluição de 0,1g do pó deve-se dissolver em 100 
mL de álcool metílico puro, armazenando em frasco âmbar. 
3- Deixe ocorante agir por 5 minutos 
4- Adicione água destilada de reação neutra (água tamponada) gota à gota (de 
25 a 30 gotas), evitando o extravasamento lateral 
5- Assopre suavemente com o auxílio de uma pipeta de vidro a superfície do 
fluído com o objetivo de misturar as soluções (corante + tampão). Um brilho 
verde metálico deverá aparecer na superfície. 
6- Deixe agir por 10 minutos 
7- Enxágue exaustivamente e continuamente com jato suave de água destilada 
ou água da torneira para evitar o desprendimento do corante 
8- Escorra a água da lâmina 
9- Limpe a parte de trás da lâmina com gaze úmida para a retirada do excesso 
de corante 
10- Coloque a lâmina na posição vertical em uma estante para a secagem 
 
1.7 Coloração pelo Método de Wright 
 
1 – Coloque o esfregaço seco na estante de coloração ou em uma superfície 
plana com o lado do sangue para cima 
2 – Cubra o esfragaço com o corante de Wright* (eosina azul de metileno), sem 
deixar extravasar pelos lados da lâmina 
* o corante de Wright pode ser adquirido já dissolvido ou para ser preparado. 
Para realizar a diluição de 0,1g do pó Wright e dissolver em 100 mL de álcool 
metílico puro, armazenando em frasco âmbar. 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
3 – Deixe o corante agir por 3 minutos. 
4 – Adicione água destilada de reação neutra (água tamponada) gota à gota 
(de 25 a 30 gotas), evitando o extravasamento lateral. 
5 – Assopre suavemente com o auxílio de uma pipeta de vidro a superfície do 
fluído com o objetivo de misturar as soluções (corante + tampão). 
6 – Deixe agir por mais 7 minutos. 
7 – Enxágue exaustivamente e continuamente com jato suave de água 
destilada ou água da torneira para evitar o desprendimento do corante. 
8 – Escorra a água da lâmina. 
9 – Limpe a parte de trás da lâmina com gaze úmida para a retirada do 
excesso de corante. 
10 – Coloque a lâmina na posição vertical em uma estante para a secagem. 
 
1.8 Problemas e causas de uma má coloração 
 
 
PROBLEMAS POSSÍVEL(IS) CAUSA(S) 
Lâminas que estão demasiados 
róseas, pode ser devido a: 
*Tempo de coloração muito curto. 
*Tempo de lavagem muito longo. 
*pH do corante ou do tampão muito ácido. 
Lâminas que estão demasiados azuis, 
pode ser devido a: 
* Supercoloração. 
*Tempo de lavagem ou do tampão muito 
curto. 
*pH do corante ou do tampão muito alcalino. 
 
 
 
 
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1.9 Cuidados e precauções especiais 
 
1 - Somente para uso diagnóstico in vitro; 
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta; 
3 - A água utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de 
agentes contaminantes; 
4 - Manusear o reagente com cuidado, evitar o contato com a pele e mucosas; 
5 - As lâminas para confecção dos esfregaços devem estar limpas e isentas de 
gordura; 
6 - A gota de sangue utilizada para a confecção do esfregaço não deve ser 
muito grande, pois quanto maior a gota mais espesso o esfregaço. 
7- O descarte do material utilizado deverá ser feito odedecendo-se os critérios 
de biossegurança, de acordo com a legislação vigente. 
 
1.10 Limitações do método 
 
Os esfregaços que apresentarem coloração azul ou esverdeada estão 
alcalinos, devido ao tempo prolongado de ação do corante, esfregaços grossos 
ou lavagem insuficiente da lâmina. 
Os esfregaços que apresentarem coloração vermelha estão 
excessivamente ácidos devido a coloração insuficiente, tempo de lavagem 
excessivo ou acidez do corante. 
Os precipitados podem aparecer quando as lâminas estão mal lavadas, 
com poeira ou quando ocorre secagem do corante durante o processo de 
coloração. 
 
 
 
 
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2 DETERMINAÇÃO DO HEMATÓCRITO 
 
 O hematócrito é uma medida do volume parcial dos glóbulos vermelhos 
do sangue. Este é um indicador-chave do estado de hidratação, anemia ou 
perda grave de sangue do corpo, bem como da capacidade do corpo para 
transportar oxigênio. Uma redução do hematócrito pode dever-se a uma sobre 
hidratação, que resulta no aumento do volume de plasma, ou a uma diminuição 
do número de glóbulos vermelhos provocada por anemias ou perda de sangue. 
Por outro lado, um aumento do hematócrito pode dever-se a perda de fluidos 
como, por exemplo, em caso de desidratação, tratamento diurético e 
queimaduras, ou a uma subida dos glóbulos vermelhos como no caso de 
distúrbios cardiovasculares e renais, policitemia vera e ventilação diminuída. 
 
2.1 Interferentes 
 
1) Hemólise, excesso de anticoagulante. 
2) Indivíduos que vivem em grandes altitudes terão Hct elevados. 
3) Normalmente, o valor diminui um pouco na hidremia fisiológica da gravidez. 
4) Os valores normais de hematócrito (Ht) variam com a idade e o sexo. O 
valor normal para lactantes é maior porque o recém-nascido tem muitas 
hemácias macrocíticas, os hematócritos em mulheres são geralmente um 
pouco menores que nos homens. 
5) Em pessoas com mais de 60 anos temos menores valores de Ht devido ao 
menor número de hemácias. 
6) Forte desidratação por qualquer causa provoca falsa elevação do Ht. 
7) O paciente deve estar em jejum de 4 horas. 
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2.2 Equipamentos e materiais necessários 
 
Tubo de ensaio 
Pipetas 
Ponteiras 
Capilares 
Massa de modelar para fechar a extremidade do capilar 
Centrifuga de micro hematócrito 
 
2.3 Procedimento técnico 
1) Preencher um tubo capilar com sangue até ¾ da sua altura. 
2) Fechar uma das extremidades (massa de modelar ou outros materiais 
podem ser utilizados para a oclusão do capilar). 
3) Colocar o capilar em uma centrífuga apropriada por 5 minutos em 10000 
a 12000 rpm. 
 
2.4 Cálculos 
 
 A medida é registrada como uma porcentagem da quantidade total de 
sangue no tubo capilar (figura 1). 
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Figura 1: esquema de um capilar antes e após centrifugação 
 
 
2.5 Valores de referência 
 
Um hematócrito < 20% pode levar à insuficiência cardíaca e morte, um > 
60% está associado à coagulação espontânea do sangue. 
 
 
2.6 Interpretação 
 
 Hematócrito elevado pode ser encontrado nas policitemias, após exercício 
intenso, em altitude elevada e nas hemoconcentrações. Hematócrito baixo está 
presente nas anemias. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3. CONTAGEM DE ERITRÓCITOS 
 
 
A contagem de hemácias é a primeira informação fornecida e é expressa 
em milhões por mm3. Níveis de hemácias aumentados indicam poliglobulia. A 
concentração de hemoglobina é expressa em g/dL, e sua avaliação é de 
grande importância pelo papel no transporte de oxigênio e por estar 
diretamente relacionada à anemia, sendo sua melhor forma de avaliação 
laboratorial. O volume relativo das hemácias dentro do volume de sangue é 
fornecido pela análise do hematócrito, que é calculado e expresso 
percentualmente, e do VCM, que é determinado pelo método de volumetria 
automatizado. A relação entre esses diferentes parâmetros pode ser obtida 
pela análise dos índices hematimétricos que irão fornecer informações 
adicionais sobre variações de volume e concentração da hemoglobina. Os 
achados morfológicos do esfregaço corado fornecem mais informações sobre 
conteúdo da hemoglobina, forma, tamanho e inclusões eritrocitárias. O sangue 
é diluído em um líquido que preserva os elementos figurados. O númerode 
partículas contadas microscopicamente em determinado volume, é multiplicado 
por um fator, obtendo-se o número de eritrócitos/mm3 de sangue 
 
 
3.1 Equipamentos e Materiais Necessários 
 
Luvas 
Estante 
Tubos de ensaio 
Câmara de Neubauer com lamínula especial 
Gaze 
Microscópio 
Pipetas 
Ponteiras 
Parafilme 
Líquido diluidor (Hayem) 
 
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 3.2 Procedimento Técnico 
 
A. Diluição em tubo de ensaio (macrodiluição): 
 
1) Em um tubo de ensaio colocar 4mL da solução diluente (Hayem ou Gower). 
2) Acrescentar 20 µL de sangue total colhido com EDTA homogeneizado e 
rinsar a pipeta. 
3) Homogeneizar a solução final por inversão do tubo. 
4) Preencher a câmara de Neubauer com o auxílio da pipeta ou de um tubo 
capilar. 
5) Contar as hemácias em objetiva de 400x 
 
B. Contagem de hemácias 
 
A contagem de hemácias é feita usando o quadrado central (figura1) da área 
quadriculada, como mostra a figura 1. Dentro do quadrado central existem 25 
quadrados menores. Desses 25 quadrados, os quatro quadrados do canto e o 
quadrado central são utilizados para a contagem. Cada um desses 5 
quadrados contém quatro fileiras de quadrados. Todas As células dentro de 
cada pequeno quadrado são contadas, usando o padrão da esquerda-direita, 
direita-esquerda na contagem. As células tocando os limites superior e lateral 
esquerdo não são contadas (figura 2). As células que tocam os limites superior 
direito não são contadas. Células além desses limites não são contadas. 
 
 
Figura1: área de contagem das hemácias 
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Figura 2: contagem de eritrócitos em câmara de Neubauer, mostrando os critérios de 
contagem, usando a regra dos limites. Os números mostrados indicam a quantidade de células 
contadas em cada pequeno quadrado do quadrante central. 
 
C. Cálculos da Contagem 
 
A área contada é 0,20mm2 (cada quadrado tem um comprimento de 0,2mm e 
argura de 0,2mm, que representa uma área de 0,04mm2). 
D: fator de diluição 
Hemácias/ mm3 = Média dos 5 campos x 10x D = Média dos 5 campos x 1000 
 0,20 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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4. CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS (CL) 
 
 
A contagem de leucócitos serve como um guia útil da gravidade do 
processo patológico. Podem ser esperados padrões específicos de resposta 
leucocitária em vários tipos de doenças, conforme determinado pela contagem 
diferencial. Pode ser realizado um teste de função leucocitária para 
determinara capacidade dos leucócitos de fagocitar e destruir bactérias. O 
sangue é diluído em um líquido que lisa praticamente todos os eritrócitos, 
preservando as células nucleadas (por ex.: leucócitos e eritroblastos) O número 
das partículas contadas microscopicamente em determinado volume, é 
multiplicado por um fator, obtendo-se o número de leucócitos/mm3 de sangue. 
 
4.1 Interferentes 
 
1) Presença de eritrócitos nucleados 
2) Diluição imperfeita 
3) Formação de pequenos coágulos por lentidão no preparo da técnica 
4) Profundidade inexata da câmara 
5) Distribuição desigual dos glóbulos na câmara 
6) Presença no líquido diluidor, de levedos, os quais podem ser confundidos 
com eritrócitos (contaminação do líquido diluidor) 
 
4.2 Equipamentos e materiais necessários 
 
Liquido diluidor: Tuerck 
Câmara de Neubauer 
Tubo de ensaio 
Ponteiras 
Pipetas automáticas 
Microscópio 
 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
4.3 Procedimento técnico 
 
1) a pipeta para glóbulos brancos é preenchida até a marca 0,5 com sangue 
colhido em anticoagulante ou com sangue capilar. Limpa-se a ponta da 
mesma, completa-se o preenchimento até a marca 11 com um líquido diluente 
apropriado (Turk). A diluição habitual é a de 1/20. 
2) a pipeta é agitada delicadamente no sentido de seu menor eixo, para melhor 
homogeneização. 
3) desprezam-se as primeiras gotas da pipeta que só contêm líquido diluente e 
preenche-se a câmara (já preparada), com o cuidado de não haver falta, 
excesso de líquido ou presença de bolhas. 
4) o aumento utilizado para a contagem é o de 100 x (ocular 10x, x objetiva 
10x) 
 
OBS: 1) no lugar da pipeta de Thomas, podemos empregar diluições feitas em 
tubos de ensaio, com o mesmo diluente, usando-se a mesma proporção. Ex: 
uma pipeta de Sahly ou uma pipeta automática: 0,02 ml de sangue para 0,4 ml 
de líquido diluente de Tuerck; 
2) a contagem de leucócitos pode ser feita em aparelhos eletrônicos. 
 
4.4 Cálculos 
 
Os leucócitos são contados nos 4 quadrados externos A, B, C e D da 
câmara de Neubauer, modificada. Cada quadrado está sub-dividido em 16 
quadrados de 1/16 mm² de área. A área total da contagem é a de 64/16 mm². A 
altura entre o retículo gravado na câmara e a parte inferior da lamínula é de 
1/10 de mm. O volume total será, portanto, igual a 64 /16mm² x 1/10 = 64 
/160mm³ (V= 2/5mm³), 
Substituindo-se as constantes na fórmula: 
 
 A A 
No. de leucócitos /mm3 = ------------, teremos ----------- = A x 50 
 D x V 1/20 x 2/5 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
A: área contada / 4 
D: fator de diluição 
V: volume da câmara 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Esta câmara contém um retículo com 9 quadrados de 1 mm2 de área, 
tendo um total de 9 mm2 de superfície. Cada um desses 9 quadrados é 
subdividido: quatro quadrados externos são divididos em 16 pequenos 
quadrados (1/16 do mm2), um quadrado central é dividido em 25 pequenos 
quadrados (1/25 do mm2). Cada um destes, por sua vez, é dividido em 16 
quadradinhos (1/400 do mm2). 
 A profundidade da câmara é de 0,1 mm . 
 Volume total é de 0,9 mm3 
 
4.5 Valores críticos 
 
CL < 500/mm³ ou < 0,5x103 mm³ representa um valor de alarme 
 
CL > 30.000/mm³ ou 30x10³ é um valor de alarme 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
4.6 Limitações do método 
 
1) Ritmo horário: há um nível baixo no começo da manhã e um pico no final da 
tarde 
2) Idade: em recém-nascidos e lactantes, a contagem é alta e diminui 
gradualmente em crianças maiores até que sejam atingidos os valores adultos 
com cerca de 21 anos 
3) Qualquer situação de estresse que leve a um aumento na produção de 
epinefrina endógena e a um rápido aumento na contagem de leucócitos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
 5. CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCÓCITOS (DIF) 
 
A contagem diferencial é expressa como uma porcentagem do número 
total de leucócitos (CL). A distribuição do número e tipo de células e o grau de 
aumento ou diminuição são significativos no diagnóstico. As porcentagens 
indicam o número relativo de cada tipo de leucócito no sangue. 
Uma contagem indica a quantidade dessas células em um microlitro 
(milímetro cúbico) de sangue total. As contagens de leucócitos podem variar 
até em 2.000, em qualquer dia em particular, em função de exercício 
desgastante, tensão ou digestão. A contagem de leucócitos pode aumentarou 
diminuir significativamente em determinadas doenças, porém é 
diagnosticamente útil somente quando o diferencial de glóbulos brancos e o 
estado clínico do paciente são levados em consideração. Uma contagem 
elevada de leucócitos (leucocitose) com freqüência assinala uma infecção, 
como, por exemplo, um abscesso, meningite, apendicite ou amigdalite. Uma 
contagem alta de leucócitos pode também resultar de leucemia e necrose 
tecidual devido à queimaduras, infarto do miocárdio ou gangrena. Uma 
contagem diminuída de leucócitos (leucopenia) indica depressão da medula 
óssea, que pode resultar de infecções virais ou de reações tóxicas, como, por 
exemplo, as que acompanham o tratamento com antineoplásicos, ingestão de 
mercúrio ou outros metais pesados, ou exposição ao benzeno ou arsênicos. A 
leucopenia caracteristicamente acompanha influenza, febre tifóide, sarampo, 
hepatite infecciosa, mononucleose e rubéola. 
 
5.1 Interferentes 
 
Sangue hemolisado e presença de coágulos. 
Uso de medicação continua 10 dias antes do exame. 
Coleta de sangue periférico total após grande esforço físico. 
 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
5.2 Equipamentos e materiais necessários 
 
Esfregaço sanguíneo corado 
Microscópio 
 
5.3 Procedimento técnico 
 
A contagem diferencial é obtida contando os tipos de leucócitos até 
totalizarem 100 células. O número total dos tipos de leucócitos é dado 
matematicamente multiplicando-se o valor percentual de um tipo de leucócito 
pelo número total de leucócitos: 
 
 
Valor absoluto = valor relativo x contagem total de leucócitos 
 (Leucócitos/mm³) (%) (células/mm³) 
 
 
 A contagem diferencial isolada tem valor limitado e deve sempre ser 
interpretada em relação à contagem total de leucócitos. 
 
 5.4 Limitações do método 
 
 Ritmo horário: há um nível baixo no começo da manhã e um pico no final 
da tarde 
 Idade: em recém-nascidos e lactantes, a contagem é alta e diminui 
gradualmente em crianças maiores até que sejam atingidos os valores adultos 
com cerca de 21 anos 
 Qualquer situação de estresse que leve a um aumento na produção de 
epinefrina endógena e a um rápido aumento na contagem de leucócitos. 
 
 
Obs: PARA INDENTIFICAÇÃO DOS LEUCÓCITOS, UTILIZAR IMAGENS EM 
ANEXOS. 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
6. DETERMINAÇÃO DA HEMOGLOBINA 
 
 A determinação da Hemoglobina possui várias aplicações clínicas no 
estudo das anemias, sangramentos, acidentes graves e queimaduras. Várias 
outras situações tais como o período gestacional, no neonatal e nas 
desnutrições crônicas, utilizam a determinação da Hemoglobina. 
O método baseia-se na oxidação do átomo de Ferro(ferro II) da molécula 
de Hemoglobina pelo Ferricianeto de potássio em pH fracamente alcalino, 
formando a metahemoglobina que é convertida em cianometahemoglobina 
após a reação com o Cianeto de potássio. A coloração avermelhada é 
proporcional à concentração de Hemoglobina presente na amostra. 
 
6.1 Equipamentos e materiais necessários 
 
Luvas 
Espectrofotômetro 
Cubetas 
Amostra de sangue com EDTA 
Filme plástico ou parafilme 
Pipetas graduadas 
Micropipetas 
Tubo de ensaio 
Estante 
Caneta para marcar o tubo 
Padrão de hemoglobina kit Bioclin na concentração 100 mg/dL 
Cronômetro 
 
6.2 Procedimento técnico 
 
1 – Homogeneizar a amostra do paciente por 3 a 5 minutos. 
2 – Identificar o tubo de ensaio. 
3 – Adicionar 5,0 mL do Drabkin de uso. 
4 – Pipetar 20 L de sangue total. 
5 – Limpar a ponteira com o lenço de papel ou gaze. 
24 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
6 – Fechar os tubos de ensaio com filme plástico ou parafilme. 
7 – Verter os tubos ate homogeneizar a amostra. 
8 – Aguardar 10 minutos à temperatura ambiente. 
9 – Fazer a leitura no espectrofotômetro de onda para 540 nm. 
 
* O líquido de Drabkin pode ser adquirido pronto não sendo necessário o 
preparo do mesmo. 
 
 Branco Padrão Amostra 
Líquido de 
Drabkin 
5 mL 5 mL 5 mL 
Padrão - 20 µL - 
Amostra 
de sangue 
- - 20µL 
 
Homogeneizar e aguardar 10 minutos à temperatura ambiente, fazer a leitura a 
540 nm (520-550) acertando o zero com o Líquido de Drabkin. A reação de cor 
é estável por 60 minutos. 
 
6.3 Descrição dos cálculos 
 
Para calcular o valor em g/dL ver as instruções contidas no conjunto Padrão de 
Hemoglobina Bioclin. 
 
Fator de calibração = Concentração do padrão 
 Absorbância do padrão 
 
Hemoglobina (g/dL ou g%) = Absorbância da amostra x Fator de calibração. 
A reação é linear até 20 g/dL. 
 
 
 
 
25 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
6.4 Interferentes 
 
1) Indivíduos que vivem em grandes altitudes terão aumento no valor de Hb, 
assim como nos valores de Ht 
2) Hb é elevada em lactantes 
3) A ingestão excessiva de líquidos causa uma diminuição de Hb 
4) Algumas drogas podem provocar o aumento ou a diminuição da Hb 
5) Exercício físico extremo causa aumento de Hb 
6) A Hb normalmente está reduzida na gravidez, em conseqüência de aumento 
no volume do plasma 
 
6.5 Cuidados especiais 
 
1 - Somente para uso diagnóstico in vitro; 
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obtenção de resultados 
exatos; 
3 - A água utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de 
agentes contaminantes; 
4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam água alcalina, íons diversos e 
agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os 
resultados; 
5 - No preparo do Reagente de Trabalho, pode ocorrer formação de bolhas, o 
que é normal. No entanto, deve-se evitar o máximo, pois dificulta o correto 
acerto do menisco; 
6 - É muito importante que o frasco empregado para armazenar o reagente de 
trabalho não contenha ácidos, bases ou solventes orgânicos do tipo 
detergentes. 
7 - O Reagente de Trabalho e os resíduos das reações nunca devem ser 
desprezados em presença de reagentes ácidos, pois levam a formação de 
gases tóxicos. 
8 - O sangue total quando coletado em oxalato ou suas misturas requer um 
intervalo de tempo maior, para que a leitura seja realizada; 
9 - A amostra de sangue deve ser adequadamente homogeneizada antes de 
ser pipetada; 
26 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
10 - As ponteiras das pipetas automáticas devem estar limpas, secas e em 
condições físicas de uso; 
11 - O Reagente de Cor não deve ser utilizado se apresentar mudança de 
coloração; 
12 - O descarte do material utilizado deverá ser feito obedecendo-se os 
critérios de biossegurança de acordo com a legislação vigente. 
 
 
6.6 Valores de referência, interpretação e valores críticos 
 
Os valores de referência em g/dL, para o presente método, foram 
obtidos através da determinação da Hemoglobina em populações sadias do 
sexo masculino e feminino. 
 
 Homens...........12,5 a 17,5 g/dL 
 Mulheres..........11,5 a 15,5 g/dL 
 
Para converter os valores de g/dL em mmol/L, multiplicar por 1,61. Estes 
valores devem ser usados como orientação, sendo que cada laboratório deverá 
criar sua faixa de valores de referência, de acordo com a população atendida. 
A interpretação isolada da determinação da Hemoglobina é na práticadesprovida de significância. É necessário outros dados, tais como a 
determinação do Hematócrito ou a contagem de Eritrócitos. 
 
6.7 Valores críticos 
 
Valores inferiores à 8 g/dL. 
Valores superiores à 18 g/dL. 
 
 
 
 
27 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
7. INDICES HEMATIMÉTRICOS 
 
Os índices hematimétricos são cálculos que fornecem a informação 
relativa ao tamanho e conteúdo de hemoglobina das células vermelhas no 
sangue, são também chamados de valores corpusculares médios. Os três 
índices são: volume corpuscular médio (VCM), a hemoglobina corpuscular 
media (HCM) e a concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM). 
Sinonímia: 
Volume corpuscular médio (VCM): Diâmetro Globular Médio (DGM), Espessura 
Globular Média (EGM), Superfície Globular Média (SGM). 
Hemoglobina corpuscular média (HCM): Peso Específico Globular Médio 
(PEGM), Massa Globular Média (MGM), Água Globular Média (AGM). 
Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM): Número Médio de 
Moléculas de Hemoglobina/Glóbulo (NMMH/G). 
 
7.1 Cálculos dos índices 
 
Volume corpuscular médio (VCM) 
 
 O VCM é calculado usando o hematócrito percentual e a contagem de 
eritrócitos, o resultado é o volume médio de uma célula vermelha e dado em 
femtolitros (fL) que equivale a 10-15L. A seguir a fórmula para VCM é: 
 
 
VCM = Hematócrito x 10 (fL) 
 Número total de hemácias 
 
 Este índice determina o volume médio dos eritrócitos. Se estiver 
aumentado, normal ou diminuído, indica se as células estão macrocíticas, 
normocíticas ou microcíticas. 
28 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
 
Hemoglobina corpuscular média (HCM) 
 
 O HCM é calculado entre a relação de hemoglobina e o número de 
hemácias, o resultado é uma estimativa do peso médio de hemoglobina em 
uma célula vermelha, e dado em picogramas (pg) que equivale a 10-12 gramas. 
A seguir a fórmula para HCM é: 
 
HCM = Hemoglobina x 10 (pg) 
Número total de eritrócitos 
 
 Índice hematimétrico pode estar elevado na presença de macrocitose 
e diminuído na presença de hemácias microcíticas. 
 
Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) 
 
 O CHCM é a relação entre hemoglobina e o hematócrito que 
expressa a concentração de hemoglobina nas hemácias em relação ao seu 
tamanho, o resultado é dado em porcentagem ou g/dL. A seguir a fórmula 
para CHCM: 
 
CHCM = Hemoglobina x 100 (%) 
 Hematócrito 
 
 É uma medida da concentração de hemoglobina nas hemácias. 
Expressa a taxa de peso da hemoglobina em relação a um dL de eritrócitos, e 
não a um dL de sangue total. Se está normal ou diminuído, define 
morfologicamente se o eritrócito é normocrômico ou hipocrômico. 
 
 
 
 
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Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
8. CONTAGEM DE RETICULÓCITOS 
 
 
Análise quantitativa dos reticulócitos do sangue periférico. 
 Materiais: 
Lâmina 
Lâmina extensora 
Cronômetro 
Microscópio 
Banho Maria 
Tubos de ensaio P 
Corante azul de crezil brilhante 
 Método: 
Microscopia de esfregaços com corantes supra vitais e resultado expresso em 
porcentagem. 
 Processamento da Amostra: 
1. No tubo de ensaio colocar duas a 3 gotas da solução corante (supra vital). 
Em seguida colocar duas a 3 gotas da do sangue colhido por punção venosa 
com anticoagulante. 
2. Misturar e colocar em banho Maria durante 20 minutos. 
3. Retirar do banho Maria. Misturar novamente e fazer esfregaços da maneira 
usual. 
4. Secar e examinar ao microscópio sob imersão. 
5. Cotar mil hemácias, em vários campos microscópicos, anotando o número 
de reticulócitos encontrados. 
É imprescindível o controle de qualidade interno, com revisão de no mínimo 
10% das lâminas alteradas e 15% das normais, por outro microscopista mais 
experiente do serviço. 
Não usar amostras com fortes sinais de hemólise e nem com presença de 
coágulos. As lâminas para confecção dos esfregaços devem estar limpas e 
isentas de gordura; 
A gota de sangue utilizada para a confecção do esfregaço não deve ser muito 
grande, pois quanto maior a gota mais espessa o esfregaço. 
30 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
Os reticulócitos são os precursores os eritrócitos. Contêm no seu interior, 
restos de material reticular que não apresenta afinidade por um corante 
comum, sendo que a sua visualização somente é possível com corantes supra 
vitais como é o caso do azul de crezil brilhante. 
 Morfologia no laudo: 
Morfologia Eritrocitaria: 
Examinas as laminas com os valores dos índices, idade, sexo e dados clínicos. 
-MACROCITOSE: facilmente notada se o VCM> 110; alcoolismo é causa 
comum. Atencao especial na gravidez e idosos, procurar por hipersegmentaçao 
de neutrófilos (déficit de ac. Fólico ou vitamina B12). É causada por 
hiperregeneraçao medular, ou síntese alterada do DNA. 
-MICROCITOSE E HIPOCROMIA: deficiência na sistese de hemogrobina 
(deficiência de ferro, talassemias). A hipocromia poderá ser mais aparente do 
que real. 
-ANISOCITOSE: presença de macro e microcitose ao mesmo tempo, sem 
predominância, seu significado é incerto. 
-POIQUILOCITOSE: alteração da forma. Em caso de anemia grave, o excesso 
de plasma causa deformações ao se fazer o esfragaço; refazê-lo reajustando o 
Ht em 40-50% por retirada do plasma sobrenadante em tudo centrifulgado, 
após as dosagens hematimétricas. 
-ESFERÓCITOS: defeito de membrana por alteração genética da espectrina 
(Esferocitose Hereditária) ou agressão por anticorpos (anemia hemolítica 
imune, após tranfusões). 
-OVALÓCITOS: defeito hereditário da membrana (Eliptocitose Hereditária), ou 
adquirido (anemias hipocrônicas, megaloblásticas e síndromes 
mieloproliferativas.) 
ESTOMACITOSE: feralmente artefato; raramente tem significado clinico (uso 
de asparaginase doenças hepáticas, recém nascido, hereditária, Rh) 
-DREPANÓCITOS: geralmente homozigoto da HbS; confirmar pelo teste de 
falcizaçao e eletroforese de hemoglobina. Sua contagem carece de valor 
clínico. 
-EQUINÓCITOS: são hemácias crenadas, artefato produzido por substâncias 
alcalinas nas lâminas afetando principalmente eritórcitos de RN; raramente são 
31 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
diagnósticos na uremia (‘’burrcells’’), nas hepatopatias, uso de heparina venosa 
e no hipotiroidismo (óvalo-equinócitos). 
-ACANTÓCITOS: abetalipoproteinemia, deficiência de tocoferol no RN, 
hepatopatias (‘’spurrcells’’) e esplenectomizados. 
-LEPTÓCITOS: eritrócitos delfados e hipocrômicos, podem adquirir forma de 
sino (codócitos) ou alvos 
-DACRIÓCITOS: forama de lagrimas são produzidos no baço na mielofibrose e 
anemias megaloblásticas. 
 
 Conclusão do Método: 
Uma contagem indica a quantidade dessas células em um microlitro (milímetro 
cúbico) de sangue total. As contagens de leucócitos podem variar até em 
2.000, em qualquer dia em particular, em função de exercício desgastante, 
tensão ou digestão. A contagem de leucócitos pode aumentar ou diminuir 
significativamente em determinadas doenças, porém é diagnosticamente útil 
somente quando o diferencial de glóbulos brancos e o estado clínico do 
paciente são levados em consideração 
 
 
4.6 Velocidade de Hemossedimentação 
A velocidade de hemossedimentação (VHS) mede o grau de sedimentação de 
glóbulos vermelhos emuma amostra de sangue durante um período específico. 
O VHS é um teste muito sensível, porém não específico, que é freqüentemente 
o primeiro indicador de doença quando outros sinais químicos e físicos estão 
normais. O VHS comumente aumenta significativamente em doenças 
inflamatórias disseminadas: as elevações podem ser prolongadas em 
inflamação localizada e câncer. 
 Objetivo: 
•Monitorar doença inflamatória ou maligna. 
•Auxiliar na determinação e diagnóstico de doenças ocultas tais como 
tuberculose, necrose tecidual ou doença do tecido conectivo. 
Preparo do paciente 
Jejum de 4 horas. 
Valores de referência 
32 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
Método: Westergreen, sistema automatizado 
 Procedimento: 
Homogenizar o sangue por 10 minutos antes de ser utilizado. Preencher a 
pipeta até o marco zero, colocar com cuidado no suporte, na posição vertical. 
Fazer leitura após 1 a 2 horas 
Ler na escala descendente da pipeta, o espaço em milímetros do plasma 
sobrenadante, desde o marco zero até o nível dos eritrócitos. O resultado é 
dado em mm/hr 
O VHS normal varia de 0 a 10 mm/hora em homens e de 0 a 15 mm/hora em 
mulheres. 
Achados anormais 
O VHS aumenta na gravidez, anemia, inflamação aguda ou crônica, 
tuberculose, paraproteinemias (especialmente mieloma múltiplo e 
macroglobulinemia de Waldeströn), febre reumática, artrite reumatóide e 
algumas malignidades. 
A policitemia, anemia falciforme, hiperviscosidade e baixos níveis de 
fibrinogênio plasmático ou de globulina, tendem a deprimir o VHS. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
33 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
ANEXOS 
 
1. Leucócitos 
 
 
 
 
34 
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2. Neutrófilos 
 
 
 
 
 
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3. Eosinófilos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Linfócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Monócitos 
 
 
 
 
 
 
 
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Basófilo 
 
 
 
 
 
39 
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Eritroblastos 
 
 
 
1. Eritroblasto basófilo. 
2.E. basófilo I 
3.E.basófilo II 
4.E. policromático. 
5.E. ortocromático 
6.Expulsão do núcleo. 
 
40 
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41 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
Valores de referência do hemograma 
Recém nascido: 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4 - 5.6 
 Hemoglobina (g/100ml): 13.5 - 19.6 
 Hematócrito (%): 44 - 62 
Criança - 3 meses: 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4.5 - 4.7 
 Hemoglobina (g/100ml): 9.5 - 12.5 
 Hematócrito (%): 32 - 44 
 VCM: Volume corpuscular médio (µ
3
): 83 - 110 
 HbCM: Hemoglobina corpuscular média (pg): 24 - 34 
 CHbCM: Hemoglobina corpuscular (%): 27 - 34 
Criança - 1 ano: 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4 - 4.7 
 Hemoglobina (g/100ml): 11 - 13 
 Hematócrito (%): 36 - 44 
 VCM: Volume corpuscular médio (µ
3
): 77 - 101 
 HbCM: Hemoglobina corpuscular média (pg): 23 - 31 
 CHbCM: Hemoglobina corpuscular (%): 28 - 33 
Criança 10 a 12 anos: 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4.5 - 4.7 
 Hemoglobina (g/100ml): 11.5 - 14.8 
 Hematócrito (%): 37 - 44 
 VCM: Volume corpuscular médio (µ
3
): 77 - 95 
 HbCM: Hemoglobina corpuscular média (pg): 24 - 30 
 CHbCM: Hemoglobina corpuscular (%): 30 - 33 
Gestantes 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 3.9 - 5.6 
 Hemoglobina (g/100ml): 11.5 - 16 
 Hematócrito (%): 34 - 47 
Mulheres 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4 - 5.6 
 Hemoglobina (g/100ml): 12 - 16.5 
 Hematócrito (%): 35 - 47 
 VCM: Volume corpuscular médio (µ
3
): 81 - 101 
 HbCM: Hemoglobina corpuscular média (pg): 27 - 34 
 CHbCM: Hemoglobina corpuscular (%): 31.5 - 36 
Homens 
 Eritrócitos (x 10
6
/mm
3
): 4.5 - 6.5 
 Hemoglobina (g/100ml): 13.5 - 18 
 Hematócrito (%): 40 - 54 
 VCM: Volume corpuscular médio (µ
3
): 82 - 101 
 HbCM: Hemoglobina corpuscular média (pg): 27 - 34 
 CHbCM: Hemoglobina corpuscular (%): 31.5 - 36 
42 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
43 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
Paciente: Data: 
Idade: Sexo: 
 
 
HEMOGRAMA 
 Unidade Resultados Valores de referência 
 
Eritrócitos(milhões/ mm3) 
Hemoglobina ( g/dl) 
Hematócritos (%) 
V.C.M (μ3) 
C.H.C.M. (%) 
H.C.M. (μμg) 
Eritroblastos Até 1/ 100 leucócitos 
Plaquetas (mil/ mm3) 200 – 500 
Obs: 
 
 
Unidade Resultados 
Leucócitos totais 
 
 Relat.(%) Abs.(/ mm
3) Relat.(%) Abs.(/ mm3) 
Bastonetes 
Segmentados 
Eosinófilos 
Basófilos 
Linfócitos 
Linf. atípicos 
Monócitos 
Metamielócitos 
 
Responsável pelo exame:________________________________________________ 
Interpretação:__________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________ 
 
44 
Procedimentos em Hematologia - Biomédica. Jessyka Campos 
 
Aluno: 
Data: 
Análises Clínicas - Profa Jessyka Campos 
 
RELATÓRIO DE HEMATOLOGIA 
 
 
Exame e Significado Clínico: 
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________ 
______________________________________________________________________ 
 
Amostra Biológica:_____________________________________________________ 
 
Procedimento:___________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________ 
 
Resultados______________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________ 
______________________________________________________________________ 
 
Conclusão: 
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________