ABSORBÂNCIA x CONCENTRAÇÃO

Prévia do material em texto

ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
CURSO DE BIOMEDICINA 
DISCIPLINA DE ANÁLISES CLÍNICAS I 
Profª Monique Gabriela 
LABORATÓRIO MULTIFUNCIONAL 
 
DETERMINAÇÃO DA RELAÇÃO ABSORBÂNCIA x CONCENTRAÇÃO DO ANALITO 
 
PRINCÍPIO 
 A espectrofotometria é um procedimento analítico que utiliza a capacidade da 
matéria em absorver luz em determinados comprimentos de onda, de forma que é 
realizada a medida da intensidade da luz absorvida em comprimentos de onda 
selecionado. O comprimento de onda descreve uma posição dentro do espectro. 
 O espectro de luz visível compreende dos comprimentos de onda entre 380 e 
750 nm. De acordo com a lei de Lambert-Beer, a concentração de uma substância é 
diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida. Enquanto que a concentração 
de uma substância é inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida pela 
solução que contém este analito. 
 
 
MATERIAIS 
 Solução de azul de metileno a 100 µg/1000 µL. 
 Água destilada. 
 Tubos médios. 
 Estante para tubo. 
 Pipeta graduada de 5 mL. 
 Pipeta automática de 10 -100 µL. 
 Pipeta automática de 100 – 1000 µL. 
 Espectrofotômetro. 
 
PROCEDIMENTO 
1. Identificar os tubos com a numeração 1, 2, 3, 4, 5, 6. 
2. Prepare a partir da solução estoque de acordo com a tabela abaixo: 
TUBO Corante (µL) Água (µL) Corante 
(concentração 
µg/1000 µL) 
Absorbância 
1 0 5000 0 µg/1000 µL 
2 100 4900 2 µg/1000 µL 
3 500 4500 10 µg/1000 µL 
4 2500 2500 50 µg/1000 µL 
5 5000 - 100 µg/1000 µL 
6 Solução de 
concentração 
desconhecida 
- 
*Concentração do corante azul de metileno: 100 µg/1000 µL. 
 
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
CURSO DE BIOMEDICINA 
DISCIPLINA DE ANÁLISES CLÍNICAS I 
Profª Monique Gabriela 
LABORATÓRIO MULTIFUNCIONAL 
3. Determinar a absorbância no comprimento de onda de 660 nm. 
4. Inserir os valores de absorbância e concentração no papel milimetrado. 
 
 
 
 
QUESTÃO PROBLEMA 
Um tubo identificado como 6, contém uma solução azul de metileno de concentração 
desconhecida. 
1. Seria possível determinar a absorbância deste tubo? 
2. Seria possível determinar a concentração de azul metileno nesta solução 6? 
Explique. 
 
CÁLCULO DE CONCENTRAÇÃO 
1. Inserir os resultados de absorbância e concentração no excel. 
2. Inserir equação da reta. 
3. Substituir o y pelo valor da absorbância. 
4. Encontrar o valor de x (concentração).