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Meios de Cultura Prof. Edmar das Mercês Penha ∗ Meio de cultura ou meio de cultivo é um meio 1. Definição ∗ Meio de cultura ou meio de cultivo é um meio balanceado qualitativa e quantitativamente, com os nutrientes necessários ao bom crescimento de um determinado microrganismo. ∗ a) Líquido - para crescimento de células; 2. Classificação dos meios de cultivo quanto à apresentação células; ∗ b) Sólido - para isolamento e conservação dos microrganismos. ∗ a) Naturais - substâncias de origem biológica (sangue, pedaços de vegetais, extratos de carne); 3. Classificação dos meios de cultivo quanto à origem dos constituintes ∗ b) Sintéticos - substâncias isoladas que entram na composição do meio em quantidade conhecida. ∗ a) Minerais; ∗ b) Orgânicos; ∗ c) Mistos - fonte de C orgânico e demais compostos 4. Classificação dos meios de cultivo quanto à natureza dos constituintes ∗ c) Mistos - fonte de C orgânico e demais compostos minerais; ∗ d) Completos - fontes de C, N e S e fatores de crescimento. ∗ a) Meios de cultivo - para promover o crescimento; ∗ b) Meios de enriquecimento - para melhorar o 5. Classificação dos meios de cultivo quanto à finalidade de uso ∗ b) Meios de enriquecimento - para melhorar o crescimento de determinada espécie num cultivo misto. ∗ Ex: adição de fator de crescimento ou antibiótico para que determinada espécie prevaleça. ∗ c) Meios diferenciais - para modificar, por adição de reagentes, o aspecto do meio de cultura num cultivo misto. 6.1. Classificação dos meios de cultivo quanto à finalidade de uso cultura num cultivo misto. ∗ Ex: inoculando-se uma mistura de bactérias num meio de agar-sangue, algumas das bactérias podem hemolisar(destruir) as células vermelhas e outras não. Pode-se estabelecer a distinção entre bactérias ∗ d) Meios especiais - para dosagem de vitaminas, antibióticos, enzimas, etc. (composição definida). 6.2. Classificação dos meios de cultivo quanto à finalidade de uso (composição definida). ∗ e) Meios de estocagem - é o meio requerido para manutenção das características fisiológicas de uma cultura e pode ser diferente do meio recomendado para o seu crescimento ótimo. Crescer rápido pode estar associado com morte rápida. Em geral é utilizado um meio sólido (gelose). ∗ O meio deve conter os elementos necessários 7 - Exigências Nutritivas ∗ O meio deve conter os elementos necessários para crescimento ideal dos microrganismos, como água, sais minerais, fontes de C, N e S, além de outros componentes como extrato de lêvedo, extrato de carne e peptona. ∗ Extrato de lêvedo: preparado com as principais substâncias solúveis de células de leveduras, rico 7.1. Extratos substâncias solúveis de células de leveduras, rico em vitaminas. Necessário aos microrganismos que exigem fatores de crescimento. ∗ Extrato de carne: concentrado com as principais substâncias solúveis da carne, de alto valor nutritivo, porém cuja composição não é completa. ∗ Peptona: produto que resulta da digestão de matérias proteicas como carne, caseína, 7.2. Peptonas de matérias proteicas como carne, caseína, gelatina. ∗ Agar-agar: não é um nutriente. Serve de base para preparação do meio sólido. 7.3. Agentes solidificantes base para preparação do meio sólido. ∗ É um carboidrato complexo, obtido de algas marinhas. ∗ - pH do meio de cultura; 8. Outros Requisitos para Condições Ótimas de Cultivo ∗ - pH do meio de cultura; ∗ - Tensão de oxigênio; ∗ - Grau de esterilidade; ∗ - Temperatura. ∗ Caldo simples (caldo nutritivo) ∗ extrato de carne - 3g 9. Meios para Cultivo e Isolamento de Bactérias (líquido) ∗ peptona - 10g ∗ fosfato dissódico - 1g ∗ cloreto de sódio - 5g ∗ água destilada - 1l ∗ pH = 7,4-7,6 ∗ Gelose simples (agar nutritivo ou agar simples) 10. Meios para Cultivo e Isolamento de Bactérias (sólido) ∗ Gelose simples (agar nutritivo ou agar simples) ∗ caldo simples - 1l ∗ agar-agar em pó - 30g ∗ pH = 7,4-7,6 ∗ Gelose Sabouraud-Dextrose ∗ glicose – 20g 11. Meio para Cultivo de Leveduras ∗ glicose – 20g ∗ peptona - 10g ∗ agar-agar - 30g ∗ água destilada - 1l ∗ Gelose Czapeck - Dox ∗ glicose - 20g ∗ nitrato de sódio - 2g 12. Meios para Cultivo de Bolores (a) ∗ nitrato de sódio - 2g ∗ fosfato dibásico de potássio - 1g ∗ sulfato de magnésio - 0,5g ∗ cloreto de potássio - 0,5g ∗ sulfato ferroso - 0,01g ∗ agar-agar - 20g ∗ água destilada – 1L ∗ Gelose Batata ∗ batata inglesa - 300g 13. Meios para Cultivo de Bolores (b) ∗ batata inglesa - 300g ∗ glicose - 20g ∗ agar-agar - 15g ∗ água destilada – 1L ∗ - Cada ingrediente é dissolvido no volume apropriado de água destilada; ∗ - Determina-se o pH do meio fluido e 14. Preparo dos Meios ∗ - Determina-se o pH do meio fluido e ajusta-se; ∗ - Caso seja um meio sólido, adiciona- se o agar, dissolvendo-o à aproximadamente 90oC. ∗ - Distribui-se em tubos fechados com algodão; ∗ - Esteriliza-se o meio (autoclaves).
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