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Introdução As bactérias podem ser observadas de duas maneiras: com e sem coloração. 1- Sem coloração: os microrganismos são observados vivos, podendo ser evidenciada a motilidade. 2- Com coloração: os microrganismos são corados após serem mortos. Apesar de quimicamente distintas do meio que as rodeiam, as bactérias são quase incolores não apresentando contraste suficiente com o meio em que se encontram, o que dificulta sua visualização. A diferença química entre as bactérias e o meio é que nos permite distingui-las por meio de coloração, pois o corante não reage com o meio externo, tornando-as quando coradas, mais visíveis ao microscópio. Desta maneira poderemos observar suas formas fundamentais, dimensões e arranjos. A coloração apresenta ainda outras vantagens, pois com a utilização da objetiva de imersão teremos uma maior amplificação da imagem, além de nos permitir o estudo de estruturas da célula bacteriana como: parede celular, endosporos, flagelos e cápsula. As bactérias coram-se com os derivados de anilina (azul de metileno, fucsina,cristal, violeta, etc..) que são corantes básicos ( íon colorido = cátion ) e que possuem afinidade pelo citoplasma destas células. Esta afinidade se deve ao fato do citoplasma bacteriano apresentar carga elétrica negativa, derivada, principalmente, dos radicais fosfatos dos ácidos nucléicos que aí se encontram. São dois os processos que nos permitem corar as bactérias: COLORAÇÃO SIMPLES: Nesta coloração utilizamos apenas um corante e ela baseia-se na diferença química existente entre as bactérias e o meio. Uma vez coradas, apresentam contraste, podendo ser melhor visualizadas. COLORAÇÃO DIFERENCIAL: Nesta coloração utilizamos geralmente 2 corantes, além do mordente e do diferenciador. Baseia-se na diferença química existente entre as bactérias e consequentemente na reação diferente que as bactérias podem apresentar frente a um determinado corante. É utilizada para distinguir diferentes tipos de bactérias. Os métodos de Gram (1884) e de Ziehl-Neelsen (1882) são exemplos de coloração diferencial. A coloração de Gram é o método de coloração mais empregado em bacteriologia. Importância do método: separa as bactérias em dois grandes grupos: GRAM POSITIVAS (G+/GP) e GRAM NEGATIVAS (G- /GN); taxonomia ( identificação, classificação e nomenclatura, sendo o primeiro passo no processo de identificação); possibilita o diagnóstico presuntivo (preliminar), principalmente em casos de infecções graves e de evolução fatal quando o médico necessita introduzir uma terapêutica, antes mesmo da identificação do microrganismo causador da infecção ; permite evidenciarmos a contaminação a partir de diferentes materiais. Objetivo Fazer a coloração de Gram em laminas com esfregaço de micro organismos, para vê-los no microscópio, observando se são Gram-Positivas ou Gram-Negativas. Materiais usados Lamina de microscopia Alça bacteriológica Placa de Petri Bico de Bunsen Beker Óleo de imersão microscópico Metodologia 1° - Esfregaço: foi feita a colocação das células na laminas; 2°- Fixação: foi feita a fixação dos micro organismos com a chama do bico de Bunsen; 3° - Coloração: Cristal Violeta – 1 minuto, após foi lavado com agua Lugol – 1 minuto, após foi lavado com agua Álcool-acetona – 1 minuto, após foi lavado com agua Saframina – 1 minuto, após foi lavado com agua 4° - Depois da coloração colocou o óleo de imersão na lamina e foi feita observação no microscópio. Resultados Foram observadas no microscópio bactérias Gram-Positiva e Gram-Negativa, leveduras e fungos. Conclusão Foi observado que as bactérias Gram-Positivas ficaram coloridas de roxo e as Gram-Negativas de vermelho. E além das bactérias, foram corados alguns fungos que ao microscópio tinha aparência de algodão e também leveduras, que em comparação às bactérias são bem maiores.
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