BMF354 RotPrat1 fermento

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Programa de Graduação de Farmacologia - ICB/UFRJ
 FARMACOLOGIA BÁSICA E APLICADA - 2011/2º sem.
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS - MODALIDADE MÉDICA
PRÁTICA 1 - Efeito do pH sobre a absorção de fármacos. (Prof. Newton G. de Castro)
1. Descrição
A experiência consiste em adicionar o corante vermelho neutro a suspensões de S. cerevisiae em meios de
pH ácido, neutro e alcalino, verificando se há absorção do corante após centrifugação, comparando-se o meio
acom o precipitado. O vermelho neutro é um indicador de pH de caráter básico (pK de 6,7), que é amarelo na
forma neutra e vermelho na forma ionizada. 
2. Material
. 1 suporte com 3 tubos de ensaio para cada grupo, mais 9 tubos para padrões de pH.
. 1 tablete de fermento biológico tipo Fleischmann
. solução de corante vermelho neutro (0,1% p/v.)
. soluções-tampão de pH 5, 7 e 9 (p. ex., acetato, Tris-acetato e Tris, aprox. 0,1 M)
. frasco pequeno com solvente apolar (l-hexanol, aprox. 0,5 ml)
. papel indicador ou medidor potenciométrico de pH
2. centrífuga de bancada, água quente (aprox. 65EC), N líquido, pipetas, marcador de vidraria. 
3. Procedimento
. Marcar 3 tubos-controle de pH 5, 7 e 9; adic. 7 ml da sol. tampão corresp. e 175 ìl da sol. de corante.
Transferir 3 ml para outro tubo, adic. 3 ml de tampão; transferir 2 ml deste para outro tubo, adic. 2 ml de
tampão.
. No frasco com solvente apolar (“POA”), adicionar 2 ml de sol. tampão pH 7 cuidadosamente, para não
misturar, e 100 ìl de sol. de corante, agitar. Observar o comportamento do corante. Agitar e observar
novamente.
. Agitar os 3 tubos e deixar em repouso, anotando a distribuição do corante nas duas fases do frasco POA. 
. Marcar os 3 tubos de 1 a 3, dividir o fermento em amostras de aprox. 0,1 g e seguir as etapas do quadro
abaixo: 
tubo 1 tubo 2 tubo 3
1 sol. tampão pH 5: 4 ml sol. tampão pH 7: 4 ml sol. tampão pH 9: 4 ml
2 verm. neutro: 100 ìl verm. neutro: 100 ìl verm. neutro: 100 ìl 
3 agitar e anotar a cor agitar e anotar a cor agitar e anotar a cor
4 fermento: 0,1 g fermento: 0,1 g fermento: 0,1 g
5 agitar, descansar 10 min e anotar a cor (tonalidade e intensidade)
6 centrifugar por 5 min, aprox. 1200 rpm
7 anotar a cor do precipitado e do sobrenadante
8 (OPCIONAL) ressuspender as células e destruir por choque térmico (feito pelo Instrutor)
9 (OPCIONAL) centrifugar por 5 min, aprox. 1200 rpm, anotar mudanças de cor.
OBS: Julgar a intensidade da cor do sobrenadante relativamente às dos tubos-controle de mesmo pH.