Relatório de Microbiologia

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UNIVERSIDADE ESTÁCIO DE SÁ - BARREIROS
CURSO DE GRADUAÇÃO EM NUTRIÇÃO
APRESENTAÇÃO DO RELATÓRIO, MICROBIOLOGIA DO AMBIENTE E TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM.
KETILYN CRISTINA DOS SANTOS
 VANUSA MOURA MENICUCCI
SÃO JOSÉ-SC, 2017
UNIVERSIDADE ESTÁCIO DE SÁ - BARREIROS
CURSO DE GRADUAÇÃO EM NUTRIÇÃO
APRESENTAÇÃO DO RELATÓRIO, MICROBIOLOGIA DO AMBIENTE E TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM.
 
 
Relatório da quinta aula prática apresentado n
a 
disciplina de Microbiologia Básica do curso de nutrição, da área da saúde na Universidade Estácio de Sá na região de Barreiros.
Professor(a): Ana Paula Ramos
SÃO JOSÉ-SC, 2017
Índice
Introdução.................................................................................. 4
1.Objetivos................................................................................. 5
2.Material e métodos................................................................. 6
2.1 Isolamentos de bactérias e obtenção de cultura pura a partir
do ambiente............................................................................... 6
2.2 Técnica de coloração de Gram........................................... 7 
Esfregaço da cultura bacteriana líquida
Adição do corante
Focalização no microscópio....................................................... 8
Manuseio do microscópio
3.Resultados.............................................................................. 9
Conclusão................................................................................. 10
Referências............................................................................... 11
 
Introdução
Os microrganismos são universais e habitam todos os ambientes, possuem estruturas, metabolismo, forma, habitat e locomoção muito distintos entre si. Fazem parte desse grupo os vírus, fungos, protozoários, cianobactérias e bactérias. A microbiologia estuda, classifica e compreende como eles interagem com o meio ao seu redor.
Os microorganismos, são passíveis de entrar no organismo do indivíduo cada vez que se respira. Felizmente, na sua maioria, eles são benéficos. São poucos que causam prejuízo ao homem. Tanto a vida animal como a vegetal dependem das alterações realizadas pelos organismos no ambiente, os microorganismos são essenciais no processo de reciclagem de substâncias na natureza, num processo conhecido como biodegradação.
Para facilitar a classificação de microorganismos utiliza-se a Coloração de Gram, essa técnica foi desenvolvida em 1884 pelo médico dinamarquês Christian Gram, que separa a maioria das bactérias em dois grupos: as bactérias Gram-positivas, que se coram em roxo, e as bactérias Gram-negativas, que se coram de vermelho. A coloração pelo Gram começa com uma aplicação de um corante básico, o cristal violeta. A seguir, aplica-se uma solução de iodo; todas as bactérias coram-se em azul nessa etapa do processo. A seguir as células são tratadas com álcool-acetona. As células Gram-positivas retêm o complexo cristal violeta-iodo, permanecendo azuis. As células Gram-negativa são totalmente descoradas pelo álcool. Como etapa final, aplica-se um contracorante, de modo que as células Gram-negativas descoradas adquirem a cor vermelha; nessa etapa as Gram-positivas exibem uma cor púrpura. A base da reação diferencial de Gram é a estrutura da parede celular.
1.Objetivos
1.1 O objetivo é ensinar os acadêmicos a desenvolver habilidades para executar as técnicas de cultura, preparação de esfregaços e o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das mesmas. Desenvolver a habilidade para utilizar o microscópio óptico, observando as bactérias após a coloração de Gram.
1.2 Verificar a existência de microorganismos em diferentes superfícies e ambientes.
1.3 Inocular microorganismos em meio de cultura líquido
1.4 Observar o crescimento bacteriano no meio de cultura o qual foi isolado.
1.4 Realizar a técnica das estrias descontínuas para o isolamento das colônias bacterianas.
2.Material e Métodos
Em aula prática no laboratório de microbiologia, alguns procedimentos foram importantes na hora da preparação de cada meio de cultura, objetivando obter melhores resultados.
2.1 Isolamentos de bactérias e obtenção de cultura pura a partir do ambiente
No laboratório foi coletado material do celular com um swab e semeado a amostra desta coleta em meio de cultivo bacteriano.
Material necessário:
Celular
Swab estereis
Tubo com caldo de Brain Heart Infusio (BHI)
Tubo com água destilada estéril
Alças bacteriológicas para inoculação
Bico de Bunsen
Estufa bacteriológica á 37°c
Placa de Petri com Agar nutritivo ,para cultura pura posterior
Métodos
Identificar o tubo com caldo BHI com a origem do material.
O Swab deve ser aberto e umedecido na água estéril,perto da chama do Bico de Bunsen.
Fazer a coleta do celular com o swab o mais rápido possivel para não haver contaminação. De volta a área asséptica da chama,descarregar o conteúdo do swab no tubo com caldo BHI e incubar a 37°C por 18 -24 horas.
Assépticamente, abrir o tubo com a cultura mista ,carregar a alça bacteriológica e descarrega-la em uma área da placa por estrias descontínuas.
As próximas estrias devem ser feitas com a alça de inoculação flambada e resfriada.
A ultima estria a ser feita ,não deve encostar nas outras estrias da placa.
Encubar a placa em estufa a 37°C por 12-24 horas.
Após a obtenção das colônias de microrganismos, deve-se efetuar a anotação das características morfológicas microscópicas da colônia selecionada.
Escolher uma das colônias e proceder o realização do esfregaço coloração de Gram e observação ao microscópio.
2.2 Técnica de coloração de Gram
Material
Bico de Bunsen
Tubo com água destilada esterilizada
Lâminas de microscopia
Alça bacteriológica
Estufa bacteriológica a 37°C
Bateria de coloração de Gram, cristal violeta, lugol, alcool-acetona e fucsina
Esfregaço da cultura bacteriana líquida:
Flambar uma alça, esfriar na água destilada esterilizada, mantendo perto da chama.
Colocar uma pequena gota de água no centro da lâmina de microscopia.
Retirar uma pequena amostra da colônia escolhida com alça e depositar no centro da lâmina.
Espalhar o material com a alça em movimento circular,obtendo um esfregaço de forma oval,uniforme e fino, esperar secar.
Fixar o esfregaço passando a lâmina na chama do bico de Bunsen,como se estivesse cortando a chama, repetindo esse procedimento três vezes, para que o material fique bem aderido.
Adição do corante
Colocar a lâmina com o esfregaço sobre um suporte.
Cobrir a lâmina com cristal violeta e deixar agir por um minuto.
Lavar a lâmina com jato fraco de água corrente,do lado contrário ao esfregaço.
Cobrir a lâmina com lugol e deixar agir por um minuto e depois lavar novamente a lâmina.
Cobrir a lâmina com solução álcool acetona, verificar a descoloração que deve ocorrer cerca de dez segundos.
Cobrir a lâmina com fucsina ,deixar agir por trinta segundos e novamente lavar a lâmina.
Secar inicialmente o lado da lâmina oposto ao esfregaço com papel toalha, e a seguir secar o restante da lâmina levemente e sem esfregar com papel toalha.
Levar a lâmina ao microscópio e observar em objetiva de imersão colocando uma gota de óleo imersão sobre o esfregaço.
Focalização no microscópio
Material:
Microscópio óptico composto
Lâmina com o esfregaço
Óleo de imersão
Manuseio do microscópio
Verificar se a mesa está toda baixa e se a objetiva vermelha está no local de trabalho.
Ligar a fonte do luz do aparelho.
Fixar a lamina na mesa com a pinça.
Centralizar o material com o charriot.
Subir toda a mesa com o parafuso macrométrico olhando na mesa para se certificar que a lâmina está fixa.
Focalizar o material descendo a mesa com omacrométrico olhando nas oculares.
Antes de trocar para a objetiva de imersão,colocar uma gota de óleo de imersão para evitar o desvio do feixe luminoso.
Colocar a objetiva de imersão em foco usando o micrométrico .
Visualizar se as bactérias da cultura são Gram positiva (roxas) ou Gram negativas(vermelhas).
Classificar as bactérias de acordo com a sua morfologia.
3. Resultados
Após o procedimento pelo método de coloração de Gram nas bactérias a coloração final obtida foi roxa, em seguida pela análise microscópica foi possível visualizar que as mesmas possuem formato cocos.
A coloração final roxa obtida permite a classificação da bactéria como Gram positivas, as quais contém uma espessa parede celular de peptidoglicano dando às bactérias a capacidade de reter a cor arroxeada.
 
Conclusão
Conclui-se que o objetivo foi alcançado,a técnica da coloração de Gram mostrou-se muito eficiente, pois foi possível chegar a uma conclusão sobre a forma e o arranjo das bactérias. As bactérias que têm a parede celular composta por peptídeoglicano durante o processo de descoloração com álcool etílico, retém o corante.
Referências
Livro Microbiologia Médica 
Autor: Jawetz,Melnick e Adelberg 
http://www.engquimicasantossp.com.br/metodo-de-gram.html
http://www.portalsaofrancisco.com.br/biologia/coloracao-de-gram
Apostila de aulas práticas de Microbiologia