Preparação de tecidos para avaliação microscópica

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Preparação de tecidos para avaliação microscópica
1) Fixação - Formol
2) Desidratação - Álcool
3) Diafanização ou clarificação - Xilol
4) Infiltração ou Impregnação - Parafina
5) Inclusão
6) Microtomia
7) Pescagem em Banho-Maria
8) Coloração
9) Montagem das lâminas
Órgão (fragmento ou inteiro) é colocado em solução
fixadora.
1) Fixação
Os fixadores evitam a decomposição do tecido por autólise (digestão do tecido por enzimas da própria célula) ou por enzimas de micro-organismos (bactérias, fungos).
Preserva a estrutura e composição molecular dos tecidos.
Exemplos: Formol 10%, Bouin.
O volume do fixador deve ser entre10 a 20 vezes maior que o volume do tecido.
Tempo de fixação varia com o fixador.
Realizada em álcool.
2) Desidratação
Objetivo: Remover a água do tecido.
Concentrações crescentes de álcool para evitar retração do tecido (1 hora em cada):
Álcool 70% ® 80% ® 90% ®Absoluto I ®Absoluto II ®Absoluto III
Realizada em Xilol ou Tolueno.
3) Diafanização ou Clarificação
Objetivo: remover o álcool do tecido.
Solúvel em parafina.
A peça fica transparente.
1 hora em cada xilol:
Xilol I ® Xilol II ® Xilol III
Realizada em Parafina à 60oC.
4) Infiltração ou Impregnação
Objetivo: Entrada de parafina no tecido para torná-lo rígido.
1 hora em cada Parafina:
Parafina I ® Parafina II ® Parafina III
5) Inclusão
A peça é colocada no centro de um molde com parafina à 60oC, onde endurece para ser cortada no micrótomo.
6) Microtomia
O bloco de Parafina contendo a peça é levado ao micrótomo e fatiado em tiras finas (cortes) de 4 – 10 m de espessura.
7) Pescagem em Banho-Maria
Os cortes são estirados em água quente (36oC) e colocados em lâminas de vidro.
8) Coloração
Corantes básicos coram componentes basófilos, ou seja, aqueles que contêm ácidos, como os ácidos nucléicos (núcleo da célula).
Ex.: Hematoxilina, Azul de Toluidina
Corantes ácidos coram componentes acidófilos (contêm bases), como o citoplasma.
 Ex.: Eosina, Fucsina
9) Montagem das lâminas
Após a coloração, coloca-se Bálsamo do Canadá para aderir uma lamínula de vidro à lâmina.