Aula 4 Provas direta e indireta de Coombs

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Provas de Coombs 
Direta 
Indireta 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Antiglobulina humana (soro de Coombs) 
soro humano Antiglobulina humana 
Anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA 
Anti-C3b, anti-C3c, anti-C3d 
Y Y Y 
Soro de Coombs 
1. Soros poli-específicos: 
 
 anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti-C3b, anti-C3c, anti-C3d. 
 
2. Soros mono-específicos: 
 anti-IgG 
 anti-IgM 
 anti-IgA 
 anti-C3b 
 Anti-C3c 
 anti-C3d 
Prova direta da antiglobulina 
Coombs direto: 
1. Princípio: 
 Detecção de eritrócitos sensibilizados “in vivo” por anticorpos ou por 
frações do complemento. 
 
2. Aplicações: 
 Doença hemolítica perinatal 
 Anemias hemolíticas auto-imunes 
 Anemias hemolíticas induzidas por drogas 
 Reações hemolíticas pós-transfusionais 
Prova direta da antiglobulina 
Y 
Y 
Y 
Y 
Eritrócitos 
sensibilizados “in vivo” 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Eritrócitos aglutinados 
Centrifugação 
Eritrócitos não 
sensibilizados “in vivo” 
Y 
Y 
Eritrócitos não aglutinados 
Centrifugação 
Coombs direto negativo 
Coombs direto positivo 
Y 
Prova indireta da antiglobulina 
Coombs Indireto ou Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI): 
 
 O P.A.I. tem como objetivo pesquisar no soro do paciente a presença 
de aloanticorpos irregulares voltados contra antígenos clinicamente 
significantes de importância transfusional e/ou gestacional. 
 Os anticorpos clinicamente significantes são os anticorpos contra 
antígenos eritrocitários (principalmente contra os sistemas Rh, Kell, 
Duffy, Kidd, Lewis, MNSs), estando eles associados à diminuição da 
sobrevida de hemácias transfundidas e à reações transfusionais. 
 A PAI pode impedir que um receptor com um anticorpo clinicamente 
significante seja transfundido com hemácias que apresentam o 
antígeno correspondente. Esta técnica deve ser feita no soro de todos 
os pacientes antes de qualquer transfusão. 
Prova indireta da antiglobulina 
Coombs Indireto ou Pesquisa de Anticorpos Irregulares 
(PAI): 
 
 As técnicas de rotina normalmente utilizadas podem ser realizadas 
em tubo ou gel e em diferentes meios como LISS, PEG e 
ENZIMAS, os quais têm por finalidade aumentar a sensibilidade do 
teste. 
 Geralmente, a detecção de anticorpos é realizada testando o soro 
do paciente contra 2 e/ou 3 células de hemácias de reagentes de 
doadores fenotipados para a maioria dos antígenos comuns, 
preparadas comercialmente. 
Prova indireta da antiglobulina 
Coombs Indireto ou Pesquisa de Anticorpos Irregulares 
(PAI): 
 
Prova indireta da antiglobulina 
Soro com anticorpos 
irregulares 
Y 
Y 
Y 
Y 
Eritrócitos sensibilizados 
“in vitro” 
Hemácias I e II 
Primeira fase: sensibilização dos eritrócitos “in vitro” 
Y 
Soro sem anticorpos 
irregulares 
Eritrócitos não 
sensibilizados “in vitro” 
Hemácias I e II 
+ 
+ 
Incubação 
Incubação 
Y 
Prova indireta da antiglobulina 
Y 
Y 
Y 
Y 
Eritrócitos sensibilizados 
“in vitro” 
Segunda fase: detecção dos eritrócitos sensibilizados. 
Eritrócitos não 
sensibilizados “in vitro” 
Centrifugação 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Eritrócitos sensibilizados 
“in vitro” aglutinados 
Y 
Eritrócitos não sensibilizados 
“in vitro” não aglutinados 
Coombs indireto 
positivo 
Y 
Y 
Coombs indireto 
negativo 
Centrifugação 
Y 
Prova indireta da antiglobulina 
Coombs indireto: 
 
1. Princípio: 
 Detecção de anticorpos anti-eritrocitários através da sensibilização de 
hemácias “in vitro”. 
 
2. Aplicações: 
 Pesquisa de anticorpos irregulares no soro 
de pacientes poli-transfundidos, gestantes, doadores, etc... 
 Identificação das especificidades de anticorpos irregulares em painel 
de hemácias 
 Investigação das reações hemolíticas pós-transfusionais 
 Identificação de antígenos eritrocitários (fenotipagem) 
Prova indireta da antiglobulina 
A prova de Coombs indireta pode ser realizada: 
 
 Em meio salino 
 Em meio albuminoso 
 Em solução de baixa força iônica 
 Com hemácias tratadas com enzimas (bromelina, papaína, ficina 
 Com uso de poli-etileno-glicol (PEG) 
 Em tubos 
 Em micro-placas 
 Em gel-card 
 Em fase sólida 
 Automatizadas 
 
Bio PEG® (polietilenoglicol) é uma 
macromolécula que retira a água do 
meio de suspensão das hemácias 
permitindo uma maior concentração 
dos anticorpos ao redor das 
hemácias em suspensão, 
favorecendo a aglutinação. 
Controle de Coombs 
Eritrócitos não aglutinados 
Y 
Eritrócitos não aglutinados 
Centrifugação 
Reações de Coombs com resultados negativos. 
Y Y 
Y 
Y 
Y 
Hemácias sensibilizadas 
(controle de Coombs) 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Hemácias sensibilizadas 
aglutinadas 
Prova de Compatibilidade (Prova Cruzada) 
A prova de compatibilidade consiste na mistura do 
soro do receptor com as hemácias do doador, com a 
finalidade de investigar no soro ou plasma do 
receptor, a presença de anticorpos contra os 
antígenos de grupos sangüíneos presentes nas 
hemácias do doador. 
Qual a importância da realização da Prova 
Cruzada na rotina pré-transfusional? 
Prova de Compatibilidade (Prova Cruzada) 
A Prova Cruzada é importante porque é através dela 
que se pode detectar: 
 
-Erros nas tipagens ABO do doador e do receptor; 
 
-Anticorpos irregulares clinicamente significantes 
não detectados na PAI do receptor; 
 
- Anticorpos contra antígenos de baixa freqüência 
presentes nas hemácias do doador. 
Os testes imunhematológicos pré- transfusionais, tem por finalidade 
assegurar os melhores resultados possíveis de uma transfusão 
sanguínea, propiciando a máxima segurança ao paciente e prevenção 
de reações transfusionais hemolíticas. 
 
Quais os testes imunohematológicos obrigatórios na rotina 
transfusional? 
 
O serviço de hemoterapia deve realizar os testes 
imunohematológicos pré-transfusionais, segundo os critérios 
estabelecidos pelo Ministério da Saúde, sendo obrigatórios: 
 
-Tipagem ABO / Rh; 
-Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI); 
-Prova de compatibilidade; 
- Reclassificação ABO/Rhdo doador e receptor. 
TESTES IMUNOHEMATOLÓGICOS PRÉ- TRANSFUSIONAIS