Fundamentos da Microscopia e Coloração

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15/03/2014 
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BACTERIOLOGIA 
Goiânia 
2014 
Prof. Me. Farm. Rodrigo Caixeta 
Faculdade Unida de Campinas 
Curso de Farmácia 
FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA 
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RESPOSTAS: 
 
1) Oculares 7) Base 
2) Canhão 8) Fonte de Luz 
3) Objetiva 9) M(i/a)crométrico 
4) Mesa 10) Pinça e Charriot 
5) Condensador 11) Plug da Fonte 
6) Diafragma 12) Braço 
 13) Revólver 
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FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA 
F – Ponto Focal 
f – Distância Focal 
Olho 
Humano 
25 cm ou 
10 pol 
Potencial de Amplitude 
FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA 
Ex1. Uma espécime é observada ao microscópio 
de luz (campo claro) em uma lente objetiva de 
40X e a ocular do microscópio é 10X. 
a) Qual é a amplitude da imagem observada? 
 
 
b) Qual é o tamanho real de um microrganismo 
observado, com medida de 0,002 cm? 
A amplitude revela a magnitude da imagem virtual 
Amplitude = Ocular x Objetiva 
Ocular: 10X Temos que: A = 40 x 10 
Objetiva: 40X Então.... A = 400X 
Com a amplitude, é possível revelar o tamanho do microrganismo 
Temos, a partir do item (a) que: A = 400X 
Então a imagem real foi ampliada em 400 vezes. 
Se na imagem virtual a régua mede 0,2 cm, o tamanho real é 400 vezes 
menor, ou seja, 0,002  400 = 0,0005 cm 
0,0005 cm 
 
 5,0 x 10-4 cm 
5 mm 
MICRORGANISMO TAMANHO MÉDIO 
VÍRUS 0,05 mm – 0,9 mm 
BACTÉRIAS 0,3 mm – 2,0 mm 
FUNGOS 2,0 mm – 10 mm 
10-2 
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FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA 
RESOLUÇÃO 
Ernst Abbé 
RESOLUÇÃO 
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FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA 
ÍNDICE DE REFRAÇÃO (n): É a variação da velocidade da luz em diferentes meios. 
Ar 
Água 
1 
2 
nágua > nar 
𝑛 =
𝐶
𝑣
 
ESTRUTURAS BÁSICAS 
a) Membrana Plasmática 
b) Parede Celular 
c) Nucleóide 
d) Citoplasma 
e) Mesossomos 
f) Ribossomos 
g) DNA Cromossomal 
ESTRUTURAS ACESSÓRIAS 
a) Cápsula 
b) Flágelo 
c) Plasmídio 
d) Cílios 
e) Pili sexual .... 
PREPARO DOS ESPÉCIMES 
FIXAÇÃO 
COLETA 
COLORAÇÃO 
- Pele, anexos e mucosas 
- Líquidos corporais e Secreções 
- Ambiente 
a) Por aquecimento e ar seco 
b) Reação química 
a) Exame Direto 
b) Diferencial 
c) Específica 
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FIXAÇÃO 
Pipeta 
Micrométrica 
Tubos para 
cultivo 
Solventes 
Orgânicos 
Placas de Petri e 
Meios de Cultura EPI e EPC 
Fonte de 
Calor 
Papel estraza 
Caneta 
marcadora 
Ponteiras 
FIXAÇÃO 
• Etanol (Álcool 90-95%) 
• Ácido Acético 
• Mercúrio Clorado 
• Formaldeído (Formol 4%) 
• Glutaraldeído 
• Acetona 
COMO PREPARAR UMA SOLUÇÃO? 
1) Determinar soluto e solvente 
2) Estabelecer condições de dissolução 
3) Colocar aos poucos o soluto ao solvente 
4) Agitar levemente até completa dissolução 
UNIDADES DE SOLUÇÃO 
Semelhante 
DISSOLVE 
Semelhante 
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FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO 
1. Corantes Básicos (Catiônicos) 
Possuem grupos positivos e são geralmente 
vendidos na forma de sais de cloreto. 
CORANTES USUAIS 
Azul de Metileno 
Fucsina Básica 
Cristal Violeta 
Safranina 
Verde Malaquita 
FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO 
2. Corantes Ácidos (Aniônicos) 
Possuem grupamentos negativos, como 
carboxilas (-COOH) ou hidroxilas fenol (Ar-OH). 
CORANTES USUAIS 
Eosina 
Rosa Bengala 
Fucsina Ácida 
EFEITO DO pH NOS CORANTES IÔNICOS FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO 
3. Corantes de Solubilização 
Ligam-se covalentemente e podem ser 
lipossolúveis ou hidrossolúveis seletivamente. 
CORANTES USUAIS 
Reagente de Schiff (PAS) 
Sudam III 
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COLORAÇÃO DE GRAM (1884) COLORAÇÃO DE GRAM 
A PAREDE CELULAR - Peptidoglicano 
NAM 
NAG 
Alanina 
Ácido 
Diaminopimélico 
Ácido 
Glutâmico 
A PAREDE CELULAR GRAM+ 
• 20 – 80 nm 
• Homogênea 
Ácido Teicóico 
Ácido Lipoteicóico 
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A PAREDE CELULAR GRAM- 
• 2 – 7 nm 
• Heterogênea 
Lipoproteína de 
Braun 
LPS 
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COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN (1882) 
• Confeccionar o esfregaço seguindo as técnicas atuais 
de biossegurança; 
• Cobrir a lâmina com fucsina fenicada (o mordente é o ácido fénico); 
• Aquecer a lâmina até à emissão de vapores (é importante não 
deixar ferver); 
• Aguardar 5 a 8 minutos; 
• Lavar com água corrente; 
• Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até descorar totalmente o 
esfregaço; 
• Lavar com água corrente; 
• Cobrir a lâmina com azul de metileno durante 1 minuto; 
• Lavar com água corrente; 
• Secar; 
• Observar. 
COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN 
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A PAREDE CELULAR BAAR+ 
Arabinogalactana 
LAM 
Ácidos Micólicos 
MORFOLOGIA BACTERIANA 
1. Formas e Arranjos 
a) Cocos: Esféricas ou arredondada 
- Diplococos, Estreptococos, Estafilococos, Sarcina 
b) Bacilos ou bastão: Alongadas ou extensas 
- Cocobacilos, Bacilos curvos, Bastonetes 
c) Vibrios ou vibriões: Curvados em “vírgula” 
d) Micelares: Filamentoso e longo, multinucleados 
e) Espirilo e Espiroquetas: Espiraladas helicoidais 
f) Pleomórficas: letras chinesas, sem forma 
FIGURA 1 
COCOS - ESTREPTOCOCOS 
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FIGURA 2 
BACILOS - CADEIA 
FIGURA 3 
ESPIRILOS - CÁPSULA 
FIGURA 4 
COCOS - ESTAFILOCOCOS 
FIGURA 5 
VIBRIÕES 
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FIGURA 6 
EM RAQUETE MICELARES 
FIGURA 7 
CÁPSULA 
• São importantes por: 
 - Resistir à fagocitose 
 - Depósito de nutrientes 
 - Eliminação de Substâncias 
 - Protege desidratação 
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FLAGELO FLAGELO 
PLASMÍDIOS 
• Plasmídios Conjuntivos 
• Plasmídios Não-Conjuntivos 
 
• Plasmídeo F 
• Plasmídeo R 
• Degradativos 
• Virulência 
ESPOROS 
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ALGINATO 
• Formação de Biofilmes 
Ácido 
Algínico 
- É uma associação simbiótica 
- Altamente Resistente 
- Comunicação 
- Harmônico 
Pseudomonas aeruginosa