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GUIA DOS MÉTODOS DE REFERÊNCIA MICROBIOLOGIA PARA ALIMENTOS *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. SUMÁRIO: Bacillus cereus presuntivo Contagem Página 4 Bacillus cereus Pesquisa e Contagem Página 5-6 (suspeito em pequena quantidade) Campylobacter spp. Pesquisa e Contagem – Parte 1 Página 7 Campylobacter spp. Pesquisa e Contagem – Parte 3 Página 8 Clostridium perfringens Contagem Página 9 Coliformes (Contagem de colônias) Contagem Página 10 Coliformes Pesquisa e Contagem Página 11 (suspeito em pequena quantidade) Coliformes presuntivo Contagem Página 11 Coliformes termorresistentes Contagem Página 12 Enterobacteriaceae Pesquisa e Contagem – Parte 1 Página 13 (com pré-enriquecimento) Enterobacteriaceae Pesquisa e Contagem – Parte 2 Página 14 Enterobacteriaceae presuntivo Contagem Página 14 Escherichia coli β-glicuronidase + Contagem – Parte 1 Pagina 15 “BIOKAR Diagnóstico coloca o seu conhecimento à sua disposição para fornecer soluções simples e rápidas para atender suas necessidades. Os laboratórios de microbiologia devem obedecer os critérios regulamentares que estão em constante evolução, e é por isso que nós oferecemos este guia de métodos de referência para ajudá-lo diariamente na aplicação das normas às suas atividades.” B: C: E: Escherichia coli β-glicuronidase + Contagem – Parte 2 Pagina 15 Escherichia coli β-glicuronidase + Contagem – Parte 3 Pagina 16 Escherichia coli O157 Pesquisa Pagina 17 Escherichia coli presuntivo Contagem Pagina 18 Leveduras e fungos Contagem Página 19 Leveduras e fungos Contagem Página 20 (produtos com atividade de água superior à 0,95) Leveduras e fungos Contagem Página 21 (produtos com atividade de água inferior à 0,95) Listeria monocytogenes Pesquisa – Emenda 1 Página 22-24 Listeria monocytogenes Contagem – Emenda 1 Página 25-26 Salmonella spp. Pesquisa – Emenda 1 Página 27-28 Shigella spp. Pesquisa Página 29-30 Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 1 – Emenda 1 Página 31 Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 2 – Emenda 1 Página 32 (ágar com fibrinogênio plasma de coelho) Staphylococcus coagulase + Contagem – Parte 2 Página 33-34 (carga bacteriana baixa) Vibrio parahaemolyticus e cholerae Pesquisa – Parte 1 Página 35 Vibrio spp. Pesquisa – Parte 2 Página 36 (outras espécies que não parahaemolyticus e cholerae) Yersinia enterolitica patogênica presuntiva Pesquisa Página 37-38 L: S: V: Y: NORMAS GERAIS: Contagem das bactérias anaeróbicas sulfito-redutoras Página 39 Contagem das bactérias mesófilas láticas Página 39 Contagem das bactérias sulfito-redutoras Página 40 Contagem dos microrganismos Página 40 Contagem dos microrganismos (método espiral) Página 41 Contagem dos microrganismos psicrotróficos Página 41 Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 1: regras gerais para a preparação da diluição mãe e das diluições decimais Página 42 Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 2: regras específicas para a preparação de produtos de carne e derivados. Página 42 Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 3: regras específicas para a preparação de produtos de peixe. Página 43 Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 4: regras específicas para a preparação de produtos que não sejam derivados de leite, carne e peixe. Página 43 Preparação das amostras, da suspensão mãe e das diluições decimais em razão das análises microbiológicas – Parte 5: regras específicas para a preparação de produtos de leite e derivados. Página 44 MÉTODOS DE ROTINA: Métodos de rotina para a contagem de Staphylococcus coagulase positiva (+) para a contagem de colônias à 37ºC – Parte 1: técnica com confirmação das colônias. Página 45 Enumeração de fungos e leveduras por contagem de colônias à 25ºC Página 46 ANEXOS: Anexo A: outras normas de referência em microbiologia de alimentos Página 47 Anexo B: métodos alternativos rápidos em microbiologia de alimentos Página 48-51 Para maiores informações entre em contato com a gente. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em superfície. - Incubação em anaerobiose à 30ºC por 18 à 48 horas. - Confirmação pelos ensaios específicos. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meios ágar Meio base Solução de polimixina B Emulsão de gema de ovo Meio completo (ágar-ágar MYP) Ágar seletivo para B. Cereus (base segundo MOSSEL) BK116HA – frasco 500g Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B BS05508 – 10 flaconetes 50 mL Ágar seletivo para B. Cereus (base segundo MOSSEL) BM03808 – 20 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total Meios de confirmação Meio base: base sangue nº2 Sangue de carneiro desfibrinado Ágar Triptona-Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g - Equivalente - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 7932 V08-023 Método horizontal para a contagem de Bacillus cereus presuntivo Técnica por contagem de colônias à 30ºC (Julho 2005) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo dos meios simples para dupla concentração à 30ºC por 48 horas para o método de contagem. - Enriquecimento seletivo à 30ºC por 48 horas para o método de pesquisa. - Isolamento seletivo em meio PEMBA à 37ºC por 18 à 48 horas. - Confirmação das colônias suspeitas por teste de hemólise ou por exame microscópico. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio enriqueci- mento seletivo Meio base – Caldo de triptona, soja e polimixina (TSPB) Solução de polimixina B Caldo Triptona-Caseína de soja BK046HA – frasco 500g BK046GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes Total (1) Total Meio seletivo sólido Meio de base PEMBA Solução de Polimixina B Emulsãode gema de ovo - Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes Emulsão estéril de gema de ovo BS06608 – 10 flaconetes 50 mL Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B BS05508 – 10 flaconetes 50 mL - Total Total Total Outros meios seletivos sólidos Meio de base MYP Solução de Polimixina B Emulsão de gema de ovo Meio completo (ágar MYP) Ágar seletivo para B. Cereus (base segundo MOSSEL) BK116HA – frasco 500g Suplemento Seletivo Polimixina B BS00708 – 10 flaconetes Emulsão estéril de gema de ovo BS06608 – 10 flaconetes 50 mL Emulsão estéril de gema de ovo com polimixina B BS05508 – 10 flaconetes 50 mL Ágar seletivo para B. Cereus (base segundo MOSSEL) BM03808 – 20 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total Total Reagentes para a identificação em microscópico Solução oxalato verde malaquita Solução preto Sudan B Xileno Solução de Safranina - - - - - - - - NF EN ISO 21871 V08 - 063 Métodos horizontais para a contagem de Bacillus cereus presuntivo com baixa carga bacteriana Técnica do número mais provável e método de pesquisa (Julho 2006) Meio de confirmação Meio base: base sangue nº2 Sangue de carneiro desfibrinado estéril Ágar Triptona-Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g - Equivalente - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo em atmosfera microaerófila à 37ºC por 4 à 6 horas, em seguida 41,5ºC por 44 ± 4 horas. - Isolamento seletivo em dois meios em atmosfera microaerófila por 41,5ºC por 44 ± 4 horas. - Confirmação por repique em meio não seletivo, em seguida exames microscópicos e ensaios bioquímicos e de crescimento apropriado. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enriqueci- mento Caldo de Bolton - - Primeiro meio de isolamento Ágar modificado cefoperazona, com carbono e desoxicloreto (mCCD) - - Segundo meio de isolamento A escolha pode ser feita pelo laboratório de análise. Meios e reagentes para confirmação e identificação Meio base – Ágar Columbia com sangue Sangue de carneiro desfibrinado estéril Caldo Brucella Reagente para a pesquisa de oxidase Solução de peróxido de hidrogênio à 3% Reagentes para a pesquisa da hidrólise de hipurato Meio de base – Ágar Mueller Hinton com sangue Sangue de carneiro desfibrinado estéril Discos impregnados de ácido nalidixico (30 μg), cefalotina (30 μg) e acetato de indoxila Ágar Columbia (base) BK019HA – frasco 500g - - - - - Ágar MULLER-HINTON BK048HA – frasco 500g - - Parcial (1) - - - - - Parcial (2) - - (1) Presença de polipeptona (17g), de peptona pancreática de coração (3g) e de extrato autolítico de levedura (3g) em vez de extrato enzimático de tecidos animais (23g). (2) Presença de infusão de carne (2g) ao invés de extrato enzimático de tecidos animais (6g) e de amido solúvel (1,5g). NF EN ISO 10272-1 V08 - 026-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Campylobacter spp. Parte 1: Método de pesquisa. (Janeiro 2006) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo em atmosfera microaerófila à 37ºC por 4 à 6 horas, em seguida 41,5ºC por 44 ± 4 horas. - Isolamento seletivo em dois meios em atmosfera microaerófila por 41,5ºC por 44 ± 4 horas. - Confirmação por repique em meio não seletivo, em seguida exames microscópicos e ensaios bioquímicos e de crescimento apropriado. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enriqueci- mento líquido Caldo de Bolton - - Primeiro meio de isolamento Ágar modificado cefoperazona, com carbono e desoxicloreto (mCCD) - - Meios e reagentes para confirmação e identificação Meio base – Ágar Columbia com sangue Sangue de carneiro desfibrinado estéril Caldo Brucella Reagente para a pesquisa de oxidase Solução de peróxido de hidrogênio à 3% Reagentes para a pesquisa da hidrólise de hipurato Meio de base – Ágar Mueller Hinton com sangue Sangue de carneiro desfibrinado estéril Discos impregnados de ácido nalidixico (30 μg), cefalotina (30 μg) e acetato de indoxila Ágar Columbia (base) BK019HA – frasco 500g - - - - - Ágar MULLER-HINTON BK048HA – frasco 500g - - Parcial (1) - - - - - Parcial (2) - - (1) Presença de polipeptona (17g), de peptona pancreática de coração (3g) e de extrato autolítico de levedura (3g) em vez de extrato enzimático de tecidos animais (23g). (2) Presença de infusão de carne (2g) ao invés de extrato enzimático de tecidos animais (6g) e de amido solúvel (1,5g). *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 10272-3 V08 - 026-3 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Campylobacter spp. Parte 3: Método de semi-quantitativo. (Junho 2010) Princípios: - Semeadura da massa em uma camada dupla. - Incubação por 20 ± 2 horas à 37ºC. - Confirmação pela adição de um meio Lactose Sulfito (A); ou pela adição de um meio nitrato motilidade e de um meio lactose à gelatina (B). Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Meio de base – Ágar triptona-sulfito com cicloserina (SC) Solução de D-cicloserina Ágar TSC (base) BK031HA – frasco 500g BK031GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo D- cicloserina 200mg BS00608 – 10 flaconetes qsp 500mg Total (1) Total Reagente de confirmação (A) Meio tioglicolato líquido Caldo tioglicolato com resazurina BK017HA – frasco 500g BK017GC – embalagem 5 Kg BM08208 – 50 tubos 10 mL Total (1) Meio lactose sulfito Solução de bissulfito dissódico anidro Solução de citrato de ferro III amoniacal Sangue desfibrinado de cavalo ou de ovelha Caldo Lactose-Sulfito BK140HA – frasco 500g - - - Total (1) - - - Reagente de confirmação (B) Meio nitrato motilidade - - Reagente para a pesquisa de nitrito Solução de ácido 5-amino-2- naftaleno-sulfônico (5-2-ANSA) Solução de ácido sulfanílico Zinco pulverizado Meio lactose à gelatina - - - - - - - - - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 7937 V 08 - 019 Método horizontal para a contagem de Clostridium perfringens Técnica por contagem de colônias (Fevereiro 2005) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Incubação à 30 ou 37ºC por 24 horas. - Confirmação se necessário do número de colônias por fermentação da lactose à 30 ou 37ºC por 24 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio seletivo sólido Ágar lactose bile com cristal violeta e vermelho neutro (VRBL) Ágar Bile Vermelho Violeta (VRBL) BK152HA – frasco 500g BK152GC – embalagem 5 Kg BM03408 – 10 flaconetes 100 mL BM03508 – 10 flaconetes 200 mL Total Meio de confirmação Caldo lactose bile verde brilhante Caldo lactose bile verde brilhante (BLBVB) BK002HA – frasco 500g BM01108 – 50 tubos 10 mL com cloro Total (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF ISO 4834/FIL 73B T 08-015 Método horizontal para a contagem de coliformes Método por contagem de colônias (Julho 2006) *Disponíveis noBrasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo à 30 ou 37ºC por 24 à 48 horas. - Semeadura de um meio de confirmação a partir da cultura com desordem e/ou uma produção de gás seguida de incubação à 30 ou 37ºC por 24 à 48 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de enrique- cimento Caldo com triptose e lauril sulfato Caldo Laurilsulfato-Triptose BK010HA – frasco 500g com cloro BM09708 – 50 tubos 10 mL com cloro (concentração simples) BM09808 - 50 tubos 10 mL com cloro (concentração dupla) Total (1) Meio de confirmação Caldo lactose bile verde brilhante Caldo lactose bile verde brilhante (BLBVB) BK002HA – frasco 500g BM01108 – 50 tubos 10 mL com cloro Total (2) (1) Presença de uma Triptona ao invés de digestão enzimática de leite e proteínas animais. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 30ºC por 24 ± 2 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Ágar lactose bile com cristal violeta e vermelho neutro (VRBL) Ágar Bile Vermelho Violeta (VRBL) BK152HA – frasco 500g BK152GC – embalagem 5 Kg BM03408 – 10 flaconetes 100 mL BM03508 – 10 flaconetes 200 mL Total NF ISO 4831/FIL 73B V 08-016 Método horizontal para a pesquisa e a contagem de coliformes Técnica do número mais provável (Outubro 2006) NF V 08 - 050 V 08 - 050 Contagem de coliformes presuntivos por contagem de colônias obtidas à 30ºC (Abril 2009) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 30ºC por 24 ± 2 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Ágar lactose bile com cristal violeta e vermelho neutro (VRBL) Ágar Bile Vermelho Violeta (VRBL) BK152HA – frasco 500g BK152GC – embalagem 5 Kg BM03408 – 10 flaconetes 100 mL BM03508 – 10 flaconetes 200 mL Total NF V 08 - 060 V 08 - 060 Enumeração dos coliformes termorresistentes por contagem de colônias obtidas à 44ºC (Abril 2009) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Pré-enriquecimento em meio não seletivo líquido à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas. - Enriquecimento seletivo líquido à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas. - Isolamento seletivo à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas. - Confirmação por repique em meio não seletivo, testando a fermentação de glicose e pesquisa de oxidase. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Solução de água peptonada tamponada EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L Total Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio líquido de enrique- cimento seletivo Caldo tamponado bile, verde brilhante com glicose (meio EE) Caldo de enriquecimento para Enterobactérias (EE segundo MOSSEL) BK127HA – frasco 500g Parcial (4) Meio seletivo sólido Ágar bile, cristal violeta e glicose Ágar VRBG BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 Kg BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total Meios e reagentes de confirmação Ágar Nutriente Dicloridrato de N, N, N',N- tetrametil-p-fenileno diamina Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL - Equivalente - Meio de confirmação Ágar glicose Ágar Glicose BM09908 – 50 tubos 10 mL Total (5) (1) A temperatura de 30ºC pode ser escolhida quando a contagem das enterobactérias é realizada num contexto de um procedimento tecnológico e compreende as enterobactérias psicotróficas. (2) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (3) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96). (4) Fórmula contém 10 g/L de peptona pancreática de carne ao invés de digestão enzimática de tecidos animais descritos e 15 mg/L de Verde Brilhante ao invés de 0,0135 g/L descrito. (5) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF ISO 21528-1 V 08 - 039-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Enterobacteriaceae Parte 1: pesquisa e contagem através da técnica NPP com pré- enriquecimento. (Dezembro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Isolamento seletivo à 37 ou 30ºC (1) por 18 ± 2 horas. - Confirmação por repique em meio não seletivo, testando a fermentação de glicose e pesquisa de oxidase. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio seletivo sólido Ágar bile, cristal violeta e glicose Ágar VRBG BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 Kg BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total Meios e reagentes de confirmação Ágar Nutriente Dicloridrato de N, N, N',N- tetrametil-p-fenileno diamina Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL - Equivalente - Meio de confirmação Ágar Glicose Ágar Glicose BM09908 – 50 tubos 10 mL Total (5) (1) A temperatura de 30ºC pode ser escolhida quando a contagem das enterobactérias é realizada num contexto de um procedimento tecnológico e compreende as enterobactérias psicotróficas. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 30 ou 37ºC por 24 ± 2 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Ágar bile com cristal violeta e glicose (VRBG) Ágar VRBG BK011HA – frasco 500g BK011GC – embalagem 5 K BM07508 – 10 flaconetes 200 mL Total NF V 08 - 054 Pesquisa e Contagem dos esporos de microrganismos V 08 - 054 anaeróbicos sulfito- redutase (Clostridia) Parte 1: Método através de filtração por membrana (Abril 2009) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF ISO 21528-1 V 08 - 039-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Enterobacteriaceae Parte 2: método para contagem de colônias. (Dezembro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em membrana de celulose posto sobre o meio MMGA e incubação por 4 horas à 37ºC. - Isolamento por transferência da membrana sobre meio TBX, e incubação por 18 à 24 horas à 44ºC. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Meio com glutamato modificado - - Meio seletivo Meio triptona-bile-glicuronato (TBX) Ágar TBX BK146HA – frasco 500g BK146HM – frasco 100g BM06908 – 10 flaconetes 100 mL BM17108 – 10 flaconetes 200 mL Total (1) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 44ºC por18 à 24 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio seletivo Meio triptona-bile-glicuronato (TBX) Ágar TBX BK146HA – frasco 500g BK146HM – frasco 100g BM06908 – 10 flaconetes 100 mL BM17108 – 10 flaconetes 200 mL Total (1) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF ISO 16649-1 V 08 - 031-1 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase + Parte 1: técnica da contagem de colônias à 44ºC através de membranas e de 5 bromo-4-cloro-3-indolil β-D-glicuronato (Agosto 2001) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF ISO 16649-2 V 08 - 031-2 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase + Parte 2: técnica da contagem de colônias à 44ºC através de 5 bromo-4-cloro- 3-indolil β-D-glicuronato (Julho 2001) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37 por 24 ± 2 horas. - Para cada tubo que apresentar uma produção ácida, colocar em sub-cultura à 44ºC por 20 à 24 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Meio com glutamato modificado Caldo de glutamato BK186HA – frasco 500g Total Meio seletivo Meio triptona-bile-glicuronato (TBX) Ágar TBX BK146HA – frasco 500g BK146HM – frasco 100g BM06908 – 10 flaconetes 100 mL BM17108 – 10 flaconetes 200 mL Total (1) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF ISO 16649-3 V 08 - 031-3 Método horizontal para a contagem de Escherichia coli β-glicuronidase + Parte 3: técnica do número mais provável utilizando 5 bromo-4-cloro-3- indolil β-D-glicuronato (Dezembro 2005) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento à 41,5 ± 1ºC por 6 horas seguido por repetição de 12 à 18 horas. - Separação e concentração dos microrganismos através de anticorpos bile imunomagnéticos revestidos por anti-E. Coli O157. - Isolamento por cultura secundária de bile imunomagnéticos com captura de bactérias em ágar MacConkey com sorbitol-cefixime telurito (CT-SMAC) e, a escolha do laboratório, um segundo ágar de isolamento seletivo. - Confirmação das colônias sorbitol negativas isoladas por CT-SMAC e das colônias características de E. coli O157 isoladas no segundo meio de isolamento, para a pesquisa de produção de indol e de aglutinação em soro anti-E. coli O157. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento Caldo Triptona de soja modificado (mTSB) Solução de Novobiocina Caldo Triptona de Soja modificado (mTSB base) BK150HA – frasco 500g BK031GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes Total (1) Total Separação imuno- magnética (IMS) Bile imunomagnético anti-E. coli O157 Tampão fosfato modificado 0,01 ml/L pH 7,2 - - - - Primeiro meio de isolamento seletivo Meio de base Solução de bissulfito dissódico anidrotelurito de potássio Solução de cefixima Ágar MacConkey Sorbitol (CT- SMAC base) BK147HA – frasco 500g (1) Suplemento cefixima-telurito para ágar CT-SMAC BS03708 – 10 flaconetes qsp 500 mL Total (1) - Segundo meio À escolha do laboratório Meio de sub- cultura Ágar nutriente Ágar Nutriente à 2% BK18508 – frasco 500g BM11808 – 50 tubos 18 mL Total (1) Confirmação Meio triptona/triptofano Caldo com Triptofano BK163HA – frasco 500g BM07608 – 50 tubos 3 mL Total Confirmação Reagente de Kovacs para pesquisa de indol - - Identificação sorológica Solução salina Soro anti-E. coli O157 - - - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 16654 V 08 - 032 Método horizontal para a pesquisa de Escherichia coli O157 (Julho 2001) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37 por 48 horas para o método de pesquisa. - Enriquecimento seletivo dos meios simples e dupla concentração para o método de contagem. - Para cada tubo que apresentar um aspecto turvo, opaco ou degeneração gasosa, fazer uma sub-cultura em meio seletivo líquido à 44ºC por 48 horas. - Se uma degeneração de gás for observada, realizar uma sub-cultura com água peptonada livre de indol à 44ºC por 48 horas. - Exame da produção de indol resultante da degradação do triptofano dos constituintes das peptonas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de enrique- cimento seletivo Caldo lauril sulfato Caldo Laurilsulfato-Triptose BK010HA – frasco 500g BM09708 – 50 tubos 10 mL com cloro (concentração simples) BM09808 - 50 tubos 10 mL com cloro (concentração dupla) Total (1) Meio seletivo Caldo EC Caldo EC BK162HA – frasco 500g Total (1) Exame para a produção de indol Água peptonada sem indol Água Peptonada sem indol BK084HA – frasco 500g Total (1) Exame para a produção de indol Reagente de Kovacs para pesquisa de indol - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF ISO 7251 V 08 - 020 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Escherichia coli presuntiva Técnica do número mais provável (Julho 2005) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 25ºC por 5 dias. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) Meio de cultura Meio dicloran à 18% com glicerina (DG) Meio Dicloran-Glicerina (DG 18) (base) BK170HA – frasco 500g BM10908 – 10 flaconetes 100 mL Total (2) (3) (1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos. (2) A forma desidratada necessita da adição de 220 g de glicerina por litro de ágar base. (3) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF V08-036 V 08 - 036 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos que se desenvolvem em produtos com baixa atividade de água (Maio 2003) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em superfície. - Incubação à 25 ± 1ºC por 5 dias em anaerobiose. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) (2) Água peptonada 0,1% Água Peptonada BM16408 – 2 embalagens 5 L Total (3) Meio de cultura Meio dicloran-rosa bengala- cloranfenicol Adição facultativa de cloridrato de clortetraciclina (4) Adição facultativa de elementos traço (5) Adição facultativa de Tergitol (6) Ágar Dicloran-Rosa Bengala- Cloranfenicol BK198HA – frasco 500g BM14208 – 10 flaconetes 200 mL (7) - - - Total - - - (1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos. (2) Exceto em casos de uma preparação específica de amostra para o ensaio, é recomendado a utilização de água peptonada à 0,1% (concentração em massa) como diluente. (3) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (4) Quando a proliferação bacteriana pode representar um problema, é recomendada a utilização de cloranfenicol (50 mg/L) e clortetraciclina (50mg/L). (5) Para que os fungos apresentem toda a sua morfologia, 1 mL de uma solução de elementos traço (ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og; qsp 100 mL H2O) pode ser adicionada à 1L de meio. (6) Afim de evitar a proliferação de certos microrganismos (Mucoraceae) é recomendada a adição de Tergitol (1 mL/L) ao meio de cultura. (7) A fórmula completa inclui 50 mg/L de cloranfenicol, 50 mg/L de cloridrato de clortetraciclina, 1 mg/L de ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og e 1mL/L de tergitol. NF ISO 21527-1 V 08 - 040-1 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos Parte 1: Técnica para contagem de colônias em produtos com atividade de água superior à 0,95 (Novembro 2008) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em superfície. - Incubação à 25 ± 1ºC por 5 à 7 dias em anaerobiose. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) (2) (3) Água peptonada 0,1% Água Peptonada BM16408 – 2 embalagens 5 L Total (4) Meio de cultura Meio dicloran à 18% com glicerina (DG) Adição facultativa de cloridrato de clortetraciclina (6) Adição facultativa de elementos traço (7) Meio Dicloran-Glicerina (DG 18) (base) BK170HA – frasco 500g BM10908 – 10 flaconetes 100 mL - - Total (4) (5) - - (1) A adição de Tween 80 ao meio líquido de diluição escolhido, a uma concentração de 0,033 g/L, pode facilitar a enumeração dos fungos. (2) A utilização de um diluente que comporte uma quantidade suficiente de soluto (20 à 30% de glicerina ou de D-glicose) é recomendada para reduzir o choque osmótico dos fungos xerófilos e das leveduras osmófilas quando as diluições em série são realisadas. (3) Exceto em casos de uma preparação específica de amostra para o ensaio, é recomendado a utilização de água peptonada à 0,1% (concentração em massa) como diluente. (4) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (5) A apresentação comercial desidratada necessita da adição de 220 g de glicerina por litro de ágar abse. (6) Quando a proliferação bacteriana pode representar um problema, é recomendada a utilização de cloranfenicol (50 mg/L) e clortetraciclina (50 mg/L). (7) Para que os fungos apresentem toda a sua morfologia, 1 mL de uma solução de elementos traço (ZnSO4.7H2Og; CuSO4.5H2Og; qsp 100 mL H2O) pode ser adicionada à 1L de meio. NF ISO 21527-2 V 08 - 040-2 Método horizontal para a contagem de leveduras e fungos Parte 2: Técnica para contagem de colônias em produtos com atividade de água inferior à 0,95 (Novembro 2008) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento primário em meio seletivo com concentração reduzida de agentes seletivos à 30ºC por 24 horas. - Enriquecimento secundário em meio seletivo líquido com concentração completa de agentes seletivos à 35 ou 37ºC por 48 horas. - Isolamento seletivo à 30, 35 ou 37ºC e exame após 24 horas e, se necessário, após 48 horas. - Confirmação por meio de ensaios bioquímicos, fisiológicos e morfológicos apropriados. v Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento seletivo primário Caldo Demi-Fraser (meio de base) Solução de cloreto de lítio Solução de sal de sódio de ácido nalidíxico Solução de cloridrato de acriflavina Solução de citrato de ferro III amoniacal Meio completo Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal) BK173HA – frasco 500g BK173GC – embalagem 5 Kg Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina) BK133HA – frasco 500g BK133GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo para Caldo Demi-Fraser BS03008 – 10 flaconetes qp 500 mL BS03208 – 8 flaconetes qsp 2,25L Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5% BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL Caldo Demi-Fraser (pronto para uso) BM01608 – 10 flaconetes 225 mL BM13308 – 3 embalagens 3 L BM13408 – 2 embalagens 5 L Total (1) Total Total Total (1) Meio de enrique- cimento seletivo secundário Caldo Fraser (meio de base) Solução de cloreto de lítio Solução de sal de sódio de ácido nalidíxico Solução de cloridrato de acriflavina Caldo Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal) BK115HA – frasco 500g Caldo Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina) BK133HA – frasco 500g BK133GC – embalagem 5 Kg Suplemento Seletivo para Caldo Fraser BS03108 – 10 flaconetes qp 500 mL Total (1) Total NF EN ISO 11290-1 V 08 - 028-1 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Listeria monocytogenes Parte 1: Método de pesquisa. (Fevereiro 1997) Solução de citrato de ferro III amoniacal Meio completo Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5% BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL Caldo Fraser (pronto para uso) BM01308 – 50 tubos 10 mL Total Total (1) Meio de isolamento seletivo Primeiro meio: Ágar Oxford Suplemento para Ágar Oxford Segundo meio: Ágar PALCAM Solução de sulfato de polimixina B Solução de cloridrato de acriflavina Solução de ceftazidima de sódio pentaidratada Meio completo Ágar OXFORD (base) BK110HA – frasco 500g Suplemento Seletivo para Ágar OXFORD (CCCFA) BS00308 – 10 flaconetes qsp 500 mL Ágar PALCAM (base) BK145HA – frasco 500g Suplemento Seletivo para Ágar PALCAM BS00408 – 10 flaconetes qsp 500 mL BS04908 – 8 flaconetes qsp 2,25 L Ágar PALMAN (pronto para uso) BM02008 – 20 placas Ø 90 mm Total (2) Total Total (2) Total Total (2) Confirmação Ágar triptona de soja – extrato de levedura (TSYEA) Caldo triptona de soja – extrato de levedura (TSYEB) - - - - Ágar sangue de ovelha Meio de base Sangue desfibrinado de ovelha Triptona Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g - Equivalente - Caldo para a utilização de carboidratos Meio de base Solução de carboidratos - - - - Ágar motilidade - - Meio e cultura de CAMP Meio de base Meio com sangue de ovelha Triptona Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g - Equivalente - Solução de peróxido de hidrogênio - - Tampão PBS - - *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de isolamento seletivo Primeiro meio: Ágar Listeria segundo Ottaviani e Agosti. Segundo meio: segundo o laboratório. COMPASS® Listeria Ágar BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm BT00808 – 6 flaconetes 200 mL + suplementos - Total (3) - (1) A fórmula inclui 9,60 g/L de fosfato dissódico anidro ao invés de 12 g/L de L d'hidrogenofosfato dissódico diidratado descrito. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (3) ALOA é um exemplo de meio apropriado disponível no mercado. Esta informação é dada com a intenção de utilização da ISO 11290 e não significa que os meios não recomendados pela ISO que não foram citados acima não devem ser utilizados. NF EN ISO 11290-1/A1 V 08 – 028-1/A1 NF EN ISO 11290-1 – Parte 1 – EMENDA 1: Modificação dos meios de isolamento, para a pesquisa de hemólise e introdução de dados sobre a precisão (Fevereiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Revivificação por 1 hora à 20ºC. - Semeadura em meio sólido e incubação à 35 ou 37 ºC e avaliação em 24 e 48 horas. - Confirmação das colônias presuntivas de L. monocytogenes. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de enrique- cimento seletivo Solução de água peptonada tamponada Caldo Demi-Fraser (meio de base) Solução de citrato de ferro III amoniacal EPT (20g/L) (1) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (2) BK018HA– frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal) BK173HA – frasco 500g BK173GC – embalagem 5 Kg Caldo Demi-Fraser (base sem citrato de ferro III amoniacal, nem ácido nalidíxico, nem acriflavina) BK133HA – frasco 500g BK133GC – embalagem 5 Kg Solução estéril de Citrato férrico amoniacal à 5% BS05908 – 10 flaconetes 90 mL BS06208 – 7 tubos 10 mL Total (1) Total (2) Total Meio de isolamento seletivo Segundo meio: Ágar PALCAM Solução de sulfato de polimixina B Solução de cloridrato de acriflavina Solução de ceftazidima de sódio pentaidratada Meio completo Ágar PALCAM (base) BK145HA – frasco 500g Suplemento Seletivo para Ágar PALCAM BS00408 – 10 flaconetes qsp 500 mL BS04908 – 8 flaconetes qsp 2,25 L Ágar PALMAN (pronto para uso) BM02008 – 20 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total (1) Confirmação Ágar triptona de soja – extrato de levedura (TSYEA) Caldo triptona de soja – extrato de levedura (TSYEB) - - - - Ágar sangue de ovelha Meio de base Triptona Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g Equivalente NF EN ISO 11290-2 V 08 - 028-2 Método horizontal para a pesquisa e contagem de Listeria monocytogenes Parte 2: Método de contagem. (Agosto 1998) Sangue desfibrinado de ovelha - - Caldo para a utilização de carboidratos Meio de base Solução de carboidratos - - - - Ágar motilidade - - Meio e cultura de CAMP Meio de base Meio com sangue de ovelha Triptona Soja (base para ágar sangue) BK028HA – frasco 500g - Equivalente - Solução de peróxido de hidrogênio - - Tampão PBS - - Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de isolamento seletivo Primeiro meio: Ágar Listeria segundo Ottaviani e Agosti. COMPASS® Listeria Ágar BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm BT00808 – 6 flaconetes 200 mL + suplementos Total (3) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) A fórmula inclui 9,60 g/L de fosfato dissódico anidro ao invés de 12 g/L de L d'hidrogenofosfato dissódico diidratado descrito. (3) ALOA é um exemplo de meio apropriado disponível no mercado. Esta informação é dada com a intenção de utilização da ISO 11290 e não significa que os meios não recomendados pela ISO que não foram citados acima não devem ser utilizados. NF EN ISO 11290-1/A1 V 08 – 028-1/A1 NF EN ISO 11290-1 – Parte 2 – EMENDA 1: Modificação do meio de isolamento (Fevereiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Pré-enriquecimento em meio não seletivo líquido à 37 ± 1ºC por 18 ± 2 horas. - Enriquecimento em meio seletivo líquido à 41,5 ± 1ºC e 37 ± 1ºC por 24 ± 3 horas. - Semeadura em dois meios sólidos, XLD e um outro meio sólido apropriado, em complemento do XLD. - Incubação do primeiro meio à 37 ± 1ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio seletivo segundo as recomendações do fabricante. - Confirmação por meio de ensaios bioquímicos e sorológicos apropriados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de pré- enriquecimen to não seletivo Solução de água peptonada tamponada EPT (20g/L) (1) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (2) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 2 L Total Primeiro meio de enriquecimen to seletivo Caldo Rappaport-Vassiliadis Soja (Caldo RVS) Caldo Rappaport-Vassiliadis Soja (Caldo RVS) BK148HA – frasco 500g BM07408 – 50 tubos 10 mL Total (3) Primeiro meio de enriquecimen to seletivo Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (MKTTn) (base) Solução de iodo-iodeto Solução de Novobiocina Meio completo Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo, sem novobiocina) BK169HA – frasco 500g Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (base MKTTn sem iodo) BK028HA – frasco 500g - Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes qsp 250 mL Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes qsp 1L Caldo Muller-Kauffmann com tetrationato novobiocina (pronto para uso) BM07808 – 50 tubos 10 mL Total (4) - Total Total NF EN ISO 6579 V 08 - 013 Método horizontal para a pesquisa de Salmonella spp. (Dezembro 2002) Meio de isolamento Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD) Ágar XLD (ISO 6579) BK168HA – frasco 500g BM08708 – 20 placas Ø 90 mm Total O segundo meio é a escolha do laboratório. Meio de sub- cultura Reagente de confirmação Ágar Nutriente Ágar citrato de ferro com 3 açúcares (Ágar TSI) Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g Bm11808 – 50 tubos 18 mL Ágar TSI BK059HA – frasco 500g Total (4) Total (4) (6) Ágar Uréia (Christensen) (base) Solução de uréia - - - - Meio para descarboxilação de β galactosidase - - Solução tampão Solução d'ONPG - - - - Meio de Voges-Proskauer (VP) Solução de creatina Solução de 1-naftol em etanol Solução de hidróxido de potássio - - - - - - - - Meio triptona-triptofano Reagente de Kovacs Caldo Triptofano BK163HA – frasco 500g BM07608 – 50 tubos 3 mL - Total (4) Ágar nutriente semi-sólido - - Solução salina fisiológica - - (1) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (2) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96). (3) Fórmula inclui cloreto de magnésio anidro ao invés da forma hexaidratada descrita. (4) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (5) Sua qualidade intrínseca deve ser complementada por aquelas do ágar XLD e permitir a detecção de Salmonella lactose + (incluindo typhi e paratyphi). (6) Triptose 14 g/L ao invés de 20 g/L de peptona descrito. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de isolamento seletivo Meio semi-sólido de Rappaport- Vassiliadis modificado (MRSV) Ágar MRSV (ISO 6579) BK191HA – frasco 500g BM12708 – 10 flaconetes 200 mL Total *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 6579/A1 V 08 – 013/A1 NF EN ISO 6579 – EMENDA 1 – Anexo D: Pesquisa de Salmonella spp. em fezes de animais e em amostras ambientais em estado de produção primária (Outubro 2007) Princípios: - Enriquecimento seletivo em anaerobiose à 41,5 ± 1ºC por 16 à 20 horas. - Isolamento em 3 meios de cultura diferentes à 37 ± 1ºC por 20 à 24 horas. - Confirmação por ensaios bioquímicos e sorológicos apropriados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento Caldo Shigella Solução de Novobiocina - Suplemento Seletivo Novobiocina (10 mg) BS03308 – 10 flaconetes qsp 250 mL Suplemento Seletivo Novobiocina (40 mg) BS05608 – 8 flaconetes qsp 1L - Total Meio de isolamento Ágar MacConkey Ágar Xilose Desoxicolato (XLD) Ágar Entérico Hektoen (HE) Ágar MacConkey BK050HA – frasco 500g Ágar XLD (ISO 6579) BK168HA – frasco 500g Ágar Hektoen BK067HA – frasco 500g Total (1) Total Parcial Reagentes de confirmação (ensaios bioquímicos) Ágar Nutriente Ágar Triplo Açúcar-Ferro (TSI) Ágar Nutriente semi-sólido Ágar Uréia (base) Solução de Uréia Meio de descarboxilação de L- lisina Meio de descarboxilação de L- ornitina Reagente para ensaio de indol Meio triptona/DL-triptofano Reagente indol de Kovacs Reagente β galactosidase Solução tampão Solução salina Caldo roxo de bromocresol Ágar Nutriente à 2% BK185HA – frasco 500g Ágar TSI BK059HA – frasco 500g - - - - - - - - - - - - Total (1) Parcial (1)(3) - - - - - - - - - - - - *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 21567 V 08 - 411 Método horizontalpara a pesquisa de Shigella spp. (Março 2005) Ágar acetato de sódio Ágar Citrato Christensen Caldo Mucato Caldo de ensaio Caldo controle - - - - - - - - - - Anti-soro de Shigella spp. - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Taxa de fucsina ácida à 40 mg/L, ao invés de 0,1g/L descrito. (3) Taxa de triptona à 14 g/L ao invés de 20 g/L da peptona descrita. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em superfície. - Incubação à 35 ou 37ºC (1) e leitura dos resultados em 24 e 48 horas. - Confirmação por pesquisa de coagulase. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Ágar Ágar Baird-Parker – meio base Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Solução de sulfametazina (sulfametazina, sulfadimidina) (3) Meio completo Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Emulsão de gema de ovo com telurito de potássio BS06008 – 10 flaconetes 50 mL Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL Meio completo BAIRD-PARKER gema de ovo telurito BM01808 – 20 placas Ø 90 mm BM09108 – 120 placas Ø 90 mm Total (2) Total Total Total Reagente de confirmação Caldo cérebro-coração Plasma de coelho Caldo Cérebro-Coração BK015HA – frasco 500g Plasma de coelho liofilizado BR00208 – 10 frascos / 20 reações Parcial (4) Total (1) A temperatura está sujeita a um acordo entre as partes interessadas e é indicada no relatório de ensaio. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (3) Aditivo facultativo, justificado pela suspeita de presença de Proteus. (4) Presença de peptona pancreática de gelatina ao invés de tecido animal digerido enzimaticamente. NF EN ISO 6888-1 V 08 - 014-1 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase + (Staphylococcus aureus e outras espécies) Parte 1: técnica utilizando ágar Baird-Parker (Fevereiro 1999) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação à 35 ou 37ºC (1) e leitura por 18 à 24 horas e, se necessário, prolongamento por mais 24 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Ágar Meio de base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e inibidor de tripsina Meio completo Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Suplemento Plasma de Coelho Fibrinogênio BS03408 – 8 flaconetes qsp 100 mL BS03808 – 1 flaconetes qsp 500 mL Meio completo BAIRD-PARKER BT00508 – kit 6 frascos 90 mL + 6 suplementos qsp 100 mL BT01008 - kit 6 frascos 190 mL + 6 suplementos qsp 200 mL BM06708 – 20 placas Ø 90 mm BM15908 – 20 placas Ø 55 mm Total (2) Total Total (2) (1) A temperatura está sujeita a um acordo entre as partes interessadas e é indicada no relatório de ensaio. (2) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 6888-2 V 08 - 014-2 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase + (Staphylococcus aureus e outras espécies) Parte 1: técnica utilizando ágar com plasma de coelho e fibrinogênio E (Outubro 1999) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo em anaerobiose à 37ºC por 24 à 48 horas. - Semeadura para meio seletivo depois de 24 horas a partir dos tubos que apresentaram redução de telurito e depois de 48 horas para os outros. - Incubação à 37ºC por 24 à 48 horas. - Confirmação por uma reação de coagulase. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de enrique- cimento Caldo de Giolitti e Cantoni modificado – base concentração simples Caldo de Giolitti e Cantoni modificado – base concentração dupla Solução de telurito de potássio Caldo GIOLITTI e CANTONI com Tween 80 BK159HA – frasco 500g Caldo GIOLITTI e CANTONI com Tween 80 BK159HA – frasco 500g - Total (1) Total (1) - Ágar Solução Ágar Solução (20 g/L) Ágar bacteriológico tipo A A1010HA – frasco 500g A1010GC – embalagem 5 Kg Ágar bacteriológico tipo E A1012HA – frasco 500g A1012GC – embalagem 5 Kg Total Total Ágar Ágar Baird-Parker – meio base Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Solução de sulfametazina (sulfametazina, sulfadimidina) (3) Meio completo Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Emulsão de gema de ovo com telurito de potássio BS06008 – 10 flaconetes 50 mL Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL Meio completo BAIRD-PARKER gema de ovo telurito BM01808 – 20 placas Ø 90 mm BM09108 – 120 placas Ø 90 mm Total (1) Total Total Total (1) Reagente de confirmação Meio de base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e inibidor de tripsina Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Suplemento Plasma de Coelho Fibrinogênio BS03408 – 8 flaconetes qsp 100 mL BS03808 – 1 flaconetes qsp 500 mL Total (1) Total NF EN ISO 6888-3 V 08 - 014-3 Método horizontal para a contagem de estafilococos coagulase + (Staphylococcus aureus e outras espécies) Parte 3: pesquisa pelo método NPP para carga bacteriana baixa (Junho 2003) Meio completo Meio completo BAIRD-PARKER BT00508 – kit 6 frascos 90 mL + 6 suplementos qsp 100 mL BT01008 - kit 6 frascos 190 mL + 6 suplementos qsp 200 mL BM06708 – 20 placas Ø 90 mm BM15908 – 20 placas Ø 55 mm Total (1) Reagente de confirmação Caldo cérebro-coração Caldo Cérebro-Coração BK015HA – frasco 500g Total (3) Reagente de confirmação Plasma de coelho Plasma de coelho liofilizado BR00208 – 10 frascos / 20 reações Total (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Aditivo facultativo, justificado pela suspeita de presença de Proteus. (3) Presença de peptona pancreática de gelatina ao invés de tecido animal digerido enzimaticamente. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37ºC por 6 ± 1 horas para produtos congelados ou 41,5ºC para produtos frescos. - Enriquecimento seletivo secundário à 41,5ºC por 18 ± 1 horas (1). - Semeadura em dois meios sólidos, TCBS e um outro meio sólido apropriado, em complemento do TCBS. - Incubação do primeiro meio à 37ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio seletivo segundo as recomendações do fabricante. - Confirmação por meio de ensaios bioquímicos apropriados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento Água salina peptonada alcalina (EPAS) - - Primeiro meio de isolamento Ágar com tiossulfato, citrato, bile e sacarose (TCBS) Ágar TCBS BK040HA – frasco 500g Total (2) Meio de sub- cultura Ágar salino nutritivo (GNS) - - Reagente para identificação presuntiva Reagente para a pesquisa de oxidase - - Reagente de confirmação Ágar salino com ferro e três açúcares Ágar TSI BK059HA – frasco 500g Total Meio salino para a detecção de ornitina descarboxilase (ODC) - - Meio salino para a detecção de L- lisina descarboxilase (LDC) - - Meio salino para a detecção de arginina diidrolase (ADH) - - Solução de ONPG Solução tampão - - Meio salino com triptofano Reagente de Kovacs - - Água peptona salina - - Solução de cloreto de sódio - - (1) A segunda etapade enriquecimento é necessária para os produtos congelados, secos ou salinos. (2) Os 8 g/L de bile de carne são decompostos da seguinte maneira: 5g/L de bile de carne bacteriológica e 3 g/L de cloreto de sódio. NF ISO/TS 21872-1 V 08 - 064-1 Método horizontal para a pesquisa de Vibrio spp potencialmente enteropatogênicos Parte 3: pesquisa de Vibrio parahaemolyticus e Vibrio cholerae (Junho 2007) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo à 37ºC por 6 ± 1 horas para produtos congelados ou 41,5ºC para produtos frescos. - Enriquecimento seletivo secundário à 41,5ºC por 18 ± 1 horas (1). - Semeadura em dois meios sólidos, TCBS e um outro meio sólido apropriado, em complemento do TCBS. - Incubação do primeiro meio à 37ºC por 24 ± 3 horas e do segundo meio seletivo segundo as recomendações do fabricante. - Confirmação por meio de ensaios bioquímicos apropriados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento Água salina peptonada alcalina (EPAS) - - Primeiro meio de isolamento Ágar com tiossulfato, citrato, bile e sacarose (TCBS) Ágar TCBS BK040HA – frasco 500g Total (2) Meio de sub- cultura Ágar salino nutritivo (GNS) - - Reagente para identificação presuntiva Reagente para a pesquisa de oxidase - - Reagente de confirmação Ágar salino com ferro e três açúcares Ágar TSI BK059HA – frasco 500g Total Meio salino para a detecção de ornitina descarboxilase (ODC) - - Meio salino para a detecção de L- lisina descarboxilase (LDC) - - Meio salino para a detecção de arginina diidrolase (ADH) - - Solução de ONPG Solução tampão - - Meio salino com triptofano Reagente de Kovacs - - Água peptona salina - - Solução de cloreto de sódio - - (1) A segunda etapa de enriquecimento é necessária para os produtos congelados, secos ou salinos. (2) Os 8 g/L de bile de carne são decompostos da seguinte maneira: 5g/L de bile de carne bacteriológica e 3 g/L de cloreto de sódio. NF ISO/TS 21872-2 V 08 - 064-2 Método horizontal para a pesquisa de Vibrio spp potencialmente enteropatogênicos Parte 2: pesquisa de outras espécies que não Vibrio parahaemolyticus e Vibrio cholerae (Junho 2007) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Enriquecimento seletivo em dois meios: caldo PBS à 25ºC por 3 à 5 dias e caldo ITC à 25ºC por 48 horas. - Incubação dos dois meios à 30ºC, e análise depois de 24 e 48 horas. - Confirmação por meio de ensaios bioquímicos, biotipagem, visando a pesquisa de critérios de patogenicidade e de eventuais ensaios sorológicos apropriados. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Meio de enrique- cimento Caldo peptona, sorbitol e sais biliares Caldo l'IrgasanTM, ticarcilina e cloreto de potássio (ITC) – meio base Solução de ticarcilina (1 mg/mL) Solução etanólica de l'IrgasanTM Solução de cloreto de potássio (100 mg/mL) - - - - - - - - - - Meio de isolamento Ágar cefsulodina, l'IrgasanTM, novobiocina (CIN) – meio base Solução etanólica de l'IrgasanTM Solução de cefsulodina (15 mg/mL) Solução de novobiocina (2,5 mg/mL) Ágar Salmonella/Shigella com desoxicolato de sódio e cloreto de cálcio (SSDC) Ágar Nutriente - - - - - Ágar Nutriente 2% BK185HA – frasco 500g - - - - - Total (1) Meio e reagentes de identificação Meio uréia-indol Reagente de Kovacs Ágar Kligler Reagente para a pesquisa de oxidase Meio de descarboxilação de oxidase Meio para descarboxilação de lisina Meio para descarboxilação de ornitina - - Ágar de KLIGLER BK034HA – frasco 500g - - - - - - Parcial (1)(2) - - - - NF EN ISO 10273 V 08 - 027 Método horizontal para a pesquisa de Yersinia enterocolitica presumivelmente patogênica (Dezembro 2003) Meio de fermentação dos açúcares (ramnose, sacarose, trealose ou xilose) à 100 mg/mL Meio Citrato de Simmons Meio utilizado para os ensaios Tween-estearase Ágar triptona-caseína-soja Ágar triptona-caseína-soja para a pesquisa de pirazinamidase Solução de sulfato de ferro III amoniacal para a revelação da pirazinamidase Ágar triptona-caseína-soja com magnésio e oxalato – meio base Solução de cloreto de magnésio Solução de oxalato de sódio Solução de glicose - - - Ágar tripto-caseína de soja (TSA) BK047HA – frasco 500g - - Ágar tripto-caseína de soja (TSA) BK047HA – frasco 500g - - - - - - Total (1) - - Total (1) - - - Outros reagentes Solução de cloreto de sódio - - Outros reagentes Solução de hidróxido de potássio e solução de cloreto de sódio - - Outros reagentes Caldo infusão de pele de bezerro - - Outros reagentes Glicerina estéril - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Presença de citrato férrico amoniacal (0,5 g/L) ao invés de sulfato de ferro (III) (0,2 g/L) preconizado; taxa de tiossulfato de sódio à 0,5 g/L ao invés de 0,3 g/L preconizado. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura das massas em placa ou tubos. - Incubação em anaerobiose à 37 ± 1ºC por 24 e 48 horas (leitura final 48h). Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Solução peptona-salina Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g Total (1) Ágar Ágar Sulfito de Ferro Ágar TSC (base) BK031HA – frasco 500g Total (1) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Se forem utilizados tubos, a incubação em jarra de anaerobiose não é necessária. Princípios: - Semeadura em profundidade (eventualmente em superfície). - Incubação em anaerobiose à 30ºC por 72 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio e cultura Meio MRS (de Man, Rogosa e Sharpe) pH 5,7 Ágar MRS BK089HA – frasco 500g Parcial (1) (2) (1) De Man, J.C., Rogosa, M., and Sharpe, M.E. 1960. A medium for the cultivation of lactobacilli. J. App. Bacteriol., 23, (1): 130-135. (2) Presença de polipetona (10 g/L) ao invés de caseína digerida enzimaticamente (10 g/L) preconizada e taxa de extrato (autolítico) de levedura à 5 g/L ao invés de 4 g/L preconizada. NF EN ISO 15213 V 08 - 029 Método horizontal para a contagem de bactérias sultito-redutoras que se desenvolvem em condições anaeróbicas (Setembro 2003) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 15214 V 08 - 030 Método horizontal para a contagem de bactérias mesófilas láticas Técnica por contagem de colônias à 30ºC (Setembro 1998) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em profundidade (placa ou tubos). - Incubação em anaerobiose à 46ºC por 20 ± 2 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio e cultura Meio de base – Ágar triptona-sulfito sem gema de ovo Solução de D-cicloserina Ágar TSC (base) BK031HA – frasco 500g Suplemento Seletivo D- cicloserina 200 mg BS00608 – 10 flaconetes qsp 500 mL Total (1) - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. Princípios: - Semeadura em profundidade. - Incubação em anaerobiose à 30ºC por 72 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Ágar Ágar contagem de placa (PCA) Ágar Contagem de Placa (PCA) BK144HA – frasco 500g Ágar Contagem em leite desnatado (PCA) BK161HA – frasco 500g Total (1) Total (1) (2) Meio de revestimentoduplo Meio de revestimento duplo (3) Ágar bacteriológico tipo A A1010HA – frasco 500g A1010GC – embalagem 5 kg Ágar bacteriológico tipo E A1012HA – frasco 500g A1012GC – embalagem 5 kg Total (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Em caso de análise de produtos láticos. (3) Se necessário (no caso de microrganismos que invadem a superfície do ágar para contagem). NF V 08-061 V 08 - 061 Contagem de bactérias anaeróbicas sulfito- redutoras Técnica por contagem de colônias à 46ºC (Dezembro 2009) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 4833 V 08 - 011 Método horizontal para a contagem de microrganismos Técnica por contagem de colônias à 30ºC (Maio 2003) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura automática. - Incubação em anaerobiose à 30ºC por 48 horas. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Ágar Ágar contagem de placa (PCA) Ágar Contagem de Placa (PCA) BK144HA – frasco 500g Ágar Contagem em leite desnatado (PCA) BK161HA – frasco 500g Total (1) Total (1) (2) Ágar não nutritivo “dito ágar branco” Meio de revestimento duplo (3) Ágar bacteriológico tipo A A1010HA – frasco 500g A1010GC – embalagem 5 kg Ágar bacteriológico tipo E A1012HA – frasco 500g A1012GC – embalagem 5 kg Total (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Em caso de análise de produtos láticos. (3) Se necessário (no caso de microrganismos que invadem a superfície do ágar para contagem). Princípios: - Semeadura em superfície. - Incubação em anaerobiose à 6,5ºC por 10 dias. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de contagem Ágar contagem de placa (PCA) Ágar Contagem de Placa (PCA) BK144HA – frasco 500g Ágar Contagem em leite desnatado (PCA) BK161HA – frasco 500g Total (1) Total (1) (2) (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Em caso de análise de produtos láticos. XP NF V 08-034 XP V 08 - 034 Enumeração de microrganismos por contagem de colônias obtidas à 30ºC depois de semeadas pelo método espiral (Setembro 2010) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF ISO 17410 V 08 - 033 Método horizontal para a contagem de microrganismos psicotróficos (Novembro 2001) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Preparação da suspensão mãe. - Preparação, se necessário, das diluições decimais. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluentes de uso geral Solução peptona-salina Solução de água peptonada tamponada Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 5 L Total Total (1) Diluentes para as necessidades particulares Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (3) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96). Princípios: - Preparação da suspensão mãe. - Preparação de uma suspensão de pré-enriquecimento ou enriquecimento. - Preparação, se necessário, das diluições decimais. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluentes de uso geral Solução peptona-salina Água peptonada tamponada Se refere à NF EN ISO 6887- 1:1999, 5.2. pg 56 - Diluentes para as necessidades particulares Solução peptona-salina Suplemento roxo de bromocresol Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g - Total (1) - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 6887-1 V 08 - 010-1 Preparação da amostra, da suspensão mãe e das diluições decimais para a análise de microrganismos – Parte 1: regras gerais para a preparação da suspensão mãe e das diluições decimais. (Setembro 1999) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. NF EN ISO 6887-2 V 08 - 010-2 Preparação da amostra, da suspensão mãe e das diluições decimais para a análise de microrganismos – Parte 2: regras específicas para a preparação de carnes e derivados. (Janeiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Preparação da suspensão mãe. - Preparação de uma suspensão de pré-enriquecimento ou enriquecimento. - Preparação, se necessário, das diluições decimais. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluentes de uso geral Solução peptona-salina Água peptonada tamponada Se refere à NF EN ISO 6887- 1:1999, 5.2. pg 56 - Diluentes para as necessidades particulares Solução peptona-salina com roxo de bromocresol – meio base Suplemento roxo de bromocresol Solução de peptona Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g - Água Peptonada BM16408 – 3 frascos 3 L Total (1) - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. Princípios: - Preparação da suspensão mãe. - Preparação de uma suspensão de pré-enriquecimento ou enriquecimento. - Preparação, se necessário, das diluições decimais. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluentes de uso geral Solução peptona-salina Água peptonada tamponada Se refere à NF EN ISO 6887- 1:1999, 5.2. pg 56 - Diluentes para as necessidades particulares Solução peptona-salina com roxo de bromocresol – meio base Suplemento roxo de bromocresol Solução de peptona Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g - Água Peptonada BM16408 – 3 frascos 3 L Total (1) - - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. NF EN ISO 6887-3 V 08 - 010-3 Preparação da amostra, da suspensão mãe e das diluições decimais para a análise de microrganismos – Parte 3: regras específicas para a preparação de peixe. (Janeiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados.NF EN ISO 6887-3 V 08 - 010-3 Preparação da amostra, da suspensão mãe e das diluições decimais para a análise de microrganismos – Parte 4: regras específicas para outros produtos que não leite, carne, peixe e derivados. (Janeiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Preparação da suspensão mãe. - Preparação, se necessário, das diluições decimais. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluentes de uso geral Solução peptona-salina Solução de Ringer diluída à ¼ Solução de peptona-salina Solução tampão fosfato Água peptonada tamponada Caldo Triptona-Sal BK014HA – frasco 500g Solução de Ringer à ¼ BR00108 – 100 comprimidos Água Peptonada BM16408 – 3 frascos 3 L - EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 5 L Total (1) Total Total (1) - Total Diluentes para as necessidades particulares Solução de citrato de sódio Solução de hidrogênio fosfato dipotássico Solução de hidrogênio fosfato dipotássico com agente antiespumante Solução de tripolifosfato Diluente de uso geral com solução de α amilase Água peptonada tamponadacom roxo de bromocresol – meio base Suplemento roxo de bromocresol - - - - - EPT (20g/L) (2) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) (3) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 5 L - Total (1) - - - - Total - (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Fórmula inclui 9,0 g/L de fosfato dissódico dodecaidratado (massa molar 358,14). (3) Fórmula inclui 3,56 g/L de fosfato dissódico anidro (massa molar 141,96). NF EN ISO 6887-5 V 08 - 010-5 Preparação da amostra, da suspensão mãe e das diluições decimais para a análise de microrganismos – Parte 5: regras específicas para a preparação de leite e derivados. (Outubro 2010) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em superfície de um meio seletivo. - Incubação à 37ºC em anaerobiose por 24 à 48 horas. - Confirmação por ensaio de coagulase. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Ágar Ágar Baird-Parker – meio base Solução de telurito de potássio Emulsão de gema de ovo Solução de sulfametazina (sulfametazina, sulfadimidina) (3) Meio completo Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Emulsão de gema de ovo com telurito de potássio BS06008 – 10 flaconetes 50 mL Suplemento Seletivo Sulfametazina 25 mg BS02808 – 10 flaconetes qsp 500 mL Meio completo BAIRD-PARKER gema de ovo telurito BM01808 – 20 placas Ø 90 mm BM09108 – 120 placas Ø 90 mm Total (1) Total (1) Total Total (1) Meios e Reagentes de confirmação Meio de base – Ágar com plasma de coelho e fibrinogênio Solução de telurito de potássio Solução de fibrinogênio bovino Solução de plasma de coelho e inibidor de tripsina Meio completo Ágar BAIRD-PARKER (base) BK055HA – frasco 500g BK055GC – embalagem 5 Kg Suplemento Plasma de Coelho Fibrinogênio BS03408 – 8 flaconetes qsp 100 mL BS03808 – 1 flaconetes qsp 500 mL Meio completo BAIRD-PARKER BT00508 – kit 6 frascos 90 mL + 6 suplementos qsp 100 mL BT01008 - kit 6 frascos 190 mL + 6 suplementos qsp 200 mL BM06708 – 20 placas Ø 90 mm BM15908 – 20 placas Ø 55 mm Total (1) Total Total (1) Reagente de confirmação Caldo cérebro-coração Caldo Cérebro-Coração BK015HA – frasco 500g Total (3) Reagente de confirmação Plasma de coelho Plasma de coelho liofilizado BR00208 – 10 frascos / 20 reações Total (1) A triptona é uma peptona obtida por digestão pancreática da caseína. (2) Aditivo facultativo, justificado pela suspeita de presença de Proteus. (3) Presença de peptona pancreática de gelatina ao invés de tecido animal digerido enzimaticamente. NF V08-057-1 V 08 - 057-1 Método de rotina para a enumeração de estafilococos coagulase + por contagem de colônias à 37ºC Parte 1: técnica com confirmação de colônias. (Janeiro 2004) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Princípios: - Semeadura em profundidade de um meio de cultura. - Incubação à 25ºC em anaerobiose por 5 dias. Meio de Cultura BIOKAR Diagnóstico Conformidade Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio de cultura Ágar glicose com Cloranfenicol Ágar glicose com oxitetraciclina (1) Solução de gentamicina (2) Ágar Glicose com Cloranfenicol (YGC) BK007HA – frasco 500g Ágar Glicose com Oxitetraciclina (base OGA) BK053HA – frasco 500g Suplemento Seletivo Gentamicina 25 mg BS00908 – 10 flaconetes Total Total Total (1) O cloranfenicol pode ser substituído por oxitetraciclina. (2) Adição facultativa, justificada pela suspeita da presença de contaminação por bactérias gram positivas. NF V08-059 V 08 - 059 Método de rotina para a enumeração de fungos e leveduras por contagem de colônias à 25ºC (Novembro 2002) *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. ANEXO A: outras normas de referência em microbiologia de alimentos Técnica de amostragem de superfícies, através de placas de contato e swabs NF ISO 18593 T 08-035 Dezembro 2004 Determinação da atividade da água NF ISO 21807 T 08-038 Janeiro 2005 Exigências gerais e recomendações NF EN ISO 7218 T 08-002 Outubro 2007 Diretrizes para a preparação e produção de meios de cultura. Parte 1: diretrizes gerais que garantem a qualidade através da preparação de meios de cultura em laboratórios XP CEN ISO/TS 11133-1 T 08-104-1 Março 2009 Guia para a preparação e produção de meios de cultura. Parte 2: guia geral para os ensaios de desempenho dos meios de cultura XP CEN ISO/TS 11133-2 T 08-104-2 Janeiro 2004 Emenda 1: microrganismos por análise recomendada e meios de cultura mais usados XP CEN ISO/TS 11133-2 (A1) T 08-104-2 (A1) Fevereiro 2011 ANEXO B: Métodos alternativos rápidos em microbiologia de alimentos Método de referência: NF EN ISO 7932, pg 6. Método de contagem de Bacillus cereus presuntivo sem confirmação em produtos de alimentação humana e animal. Princípios: semeadura em superfície ou profundidade de COMPASS® Bacillus cereus Ágar à 30 ± 1ºC por 24 à 27 horas. Diluente Se refere à parte da norma NF EN ISO 6887 correspondente ao produto à ser analisado. Meio seletivo COMPASS® Bacillus cereus Ágar – BM 13008 – 10 flaconetes 100 mL Suplemento Seletivo para COMPASS® Bacillus cereus Ágar – BS06908 – 10 flaconetes qsp 100 mL COMPASS® Bacillus cereus Ágar – BM12608 - 20 placas Ø 90 mm Método COMPASS® Bacillus cereus Ágar BKR 23/06 – 02/10 Métodos alternativos de análise para produtos agroalimentares. www.afnor-validation.org *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Método de referência: NF EN ISO 11290-1/A1, pg 26 - 27. Método de pesquisa de Listeria monocytogenes em produtos de alimentação humana e amostras de meio ambiente. Princípios: - enriquecimento em caldo Demi-FRASER 24 ± 2 h à 30 ± 1ºC. - semeadura em COMPASS® Listeria Ágar e incubação à 37 ± 1ºC por 24 ± 2 horas. - confirmação de uma colônia característica. Método COMPASS® Listeria Ágar (pesquisa) BKR 23/02 – 11/02 Métodos alternativos de análise para produtos agroalimentares. www.afnor-validation.org Caldo Demi-FRASER BK173HA – frasco 500g BK173GC – frasco 5 Kg BM01608 – 10 frascos 225 mL BM13308 – 3 frascos 3L BM13408 – 2 frascos 5 L Suplemento Seletivo Demi-FRASER BS03008 – 10 frascos qsp 500 mL BS03208 – 8 frascos qsp 2,25L COMPASS® Listeria Ágar BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm Kit COMPASS® Listeria Ágar BT00808 – 6 frascos 200 mL (R1), 6 frascos suplemento seletivo qsp 200 mL (R2), frascos suplemento seletivo qsp 200 mL (R3) CONFIRM' L. mono Caldo BM16208 – 18 frascos Ágar BM13908 - 10 placas Ø 90 mm Ágar PALCAM BK145HA – frasco 500g BS00408 – 10 frascos qsp 500 mL BS04908 – 8 frascos qsp 2,5 L BM02008 – 20 placas Ø 90 mm *Disponíveis no Brasil os meios desidratados. Método de referência: NF EN ISO 11290-1/A1, pg 28 - 29. Método de contagem de Listeria monocytogenes em produtos de alimentação humana e amostras de meio ambiente. Princípios: - suspensão em água peptonada tamponada. - semeadura em COMPASS® Listeria Ágar e incubação à 37 ± 1ºC e leitura depois de 48 ± 3 horas. - confirmação de uma colônia característica por repique. Método COMPASS® Listeria Ágar (contagem) BKR 23/05 – 12/07 Métodos alternativos de análise para produtos agroalimentares. www.afnor-validation.org EPT (20g/L) BK131HA – frasco 500g BK131GC – embalagem 5 Kg EPT (25g/L) BK018HA – frasco 500g BK018GC – embalagem 5 Kg BM01008 – 10 flaconetes 225 mL BM05608 – 50 tubos 9 mL BM05708 – 10 flaconetes 90 mL BM13108 – 3 embalagens 3 L BM13208 – 2 embalagens 5 L COMPASS® Listeria Ágar BM12308 – 20 placas Ø 90 mm BM12408 – 120 placas Ø 90 mm Kit COMPASS® Listeria Ágar BT00808
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