Contagem de colônias

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Contagem de colônia 
o que e contagem de colônia? 
Conjunto de bactérias que se forma por multiplicação, a partir de uma bactéria mãe, num meio de cultura, e reconhecível pelo seu aspecto, consistência e cor. 
Interpretação do crescimento bacteriano
O crescimento de grande parte dos micro-organismos nos meios de cultura só é possível quando o mínimo de nutrientes é fornecido para o seu desenvolvimento. Devido à grande variabilidade de meios e bactérias existentes, são observados diferentes aspectos de colônias, cores e formas. Essas características são chamadas de morfologia e são usadas para uma identificação prévia do micro-organismo.
Conforme as bactérias consomem os nutrientes do meio de cultura, elas crescem e se multiplicam. Depois de algum tempo, suas células começam a se acumular, ficando visíveis a olho nu. Os conjuntos dessas células são chamados de colônias bacterianas.
Morfologia da colônia bacteriana
Cada espécie de bactéria produz uma colônia diferente das colônias produzidas por outras espécies. A morfologia das colônias é um dos primeiros passos na caracterização e identificação de uma cultura bacteriana.
Hemólise - A colônia produz algum tipo de hemólise?
Algumas bactérias produzem enzimas que lisam as hemácias presentes no meio de cultura Ágar Sangue, formando três tipos de hemólise. A beta-hemólise ocorre quando há lise completa das hemácias, apresentando uma zona clara em torno do crescimento bacteriano. A alfa-hemólise ocorre quando há lise parcial das hemácias, deixando uma cor esverdeada próxima às colônias. A cor esverdeada é causada pela presença de biliverdina, que é um sub-produto da degradação da hemoglobina.
Pigmentação - A colônia possui cor?
Algumas bactérias possuem pigmentos quando crescem nos meios de cultura. Este pode ser observado ao tocar uma colônia com a ponta de um swab, adquirindo  a cor do pigmento bacteriano. Os exemplos mais comuns são Staphylococcus aureus (cor amarela) e Serratia spp. (cor vermelha).
Tamanho - Qual é o tamanho da colônia?
O tamanho de uma colônia bacteriana pode variar muito, mas geralmente se considera grande uma colônia maior que 1mm de diâmetro.
Forma, Elevação e Margem
Essas três características têm importância fundamental na interpretação do crescimento bacteriano. A colônia das bactérias pode apresentar-se com aspecto circular, irregular, puntiforme, ondulado, achatado, umbilicado, convexo, elevado, em domo, com centro elevado, entre outros.
Consistência - Qual é o aspecto da colônia?
A consistência bacteriana pode ser observada ao tocarmos uma colônia com uma alça bacteriológica. Dentre os tipos mais comuns, estão as amanteigadas, pegajosas, secas, mucoides e quebradiças.
Superfície - Como é a superfície da colônia?
A superfície da colônia de uma espécie bacteriana pode ser muito diferente de outras, apresentando aspecto rugoso, granular, embaçado, cremoso ou brilhante.
O método consiste em fazer uma diluição seriada e plaquear uma alíquota de cada diluição pelo método de espalhamento em placa.
OBJETIVO
Determinar o número de microrganismos presente na suspensão através dos métodos de contagem em placa.(colônia)
MATERIAIS, REAGENTES E EQUIPAMENTOS
 Alça de inoculação; . Micropipeta calibrada; 
 Algodão; . Placas de Petri com meios de cultura;
 Balança analítica; . Ponteiras calibradas;
 Bico de Bunsen; . Solução salina
 Caldo caseína-soja; . Talco em quantidade suficiente para duplicata
 Espátula;  . Solução tampão fosfato;
 Estante; . Tubos de diluição;
 Estufa; . Vidro de relógio.
 Fita crepe; . contador de colonias
 Marcador permanente;
Observação:
 Realizar testes de esterilidade nos equipamentos e materiais antes de iniciar a amostragem.
 Calibrar os equipamentos.
Preparo da amostra:
1. Pesou-se 1g de talco na balança analítica, com o auxílio de espátula e vidro de relógio
2. Mediu-se 9ml de solução tampão;
3. Colocou-se no Becker a solução tampão e o talco e homogeneizou.
Etapas do ensaio
4. Colocou-se 4 tubos identificados na estante, com 9ml de caldo caseína-soja cada.
5. Com o auxílio da micropipeta e ponteira:
 Retirou-se 1ml da solução inicial contida no Becker e colocou-se no 1º tubo.
 Retirou-se 1ml do 1º tubo e colocou-se no 2º tubo.
 Retirou-se 1ml do 2º tubo e colocou-se no 3º tubo.
 Retirou-se 1ml do 3º tubo e colocou-se no 4º tubo.
6. Tamparam-se todos os tubos com algodão.
7. Identificou-se as tampas da placa de petri, 2 placas para cada tubo: 1.1, 1.2, 2.1, 2.2, 3.1, 3.2, 4.1, 4.2;
8. Com o bico de Bunsem ligado:
 Colocou-se a ponteira na micropipeta;
 Retirou-se 1ml do 1º tubo e impregnou-se a placa 1.1.
.
Flambou-se a boca do recipiente o terminar a inoculação e tampou-se
- Flambou-se a alça de inoculação (a) e fez-se a semeadura por esgotamento(b);
 Tampou-se a placa.
9. Procedeu-se da mesma forma com todos os tubos e placas.
10. Reuniram-se todas as placas de petri, envolveu-se com fita crepe e levou-se à estufa por 7 dias.
Após 7 dias na estufa, retirou-se as placas de petri semeadas e colocaram-se na bancada por ordem de semeadura.
Colocar a placa no contador de colônia