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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS DE MICROBIOLOGIA DOS ALIMENTOS Vidrarias Introdução Vidrarias são equipamentos disponíveis em laboratórios, utilizados para estudos, análises e preparações de substancias químicas. Geralmente são materiais de vidros, cristais e porcelana, e também possui aqueles que são de metal para que serve de manuseio para as vidrarias. Objetivo Conhecer as vidrarias do laboratório de microbiologia. Materiais Béquer Erlenmeyer Provetas Tubos de ensaio Placas de Petri Pipetas volumétricas Pipetas graduadas Balão volumétrico Bastão de vidro Bureta Lâminas Métodos Foi apresentado algumas principais vidrarias, e explicado para que serve cada uma delas. Béquer: é um recipiente simples, utilizado principalmente para despejar líquidos. Erlenmeyer: fraco em forma de balão, utilizado para misturar soluções. Provetas: é um material utilizado para medição de líquidos. Tubos de ensaio: é utilizado para reações químicas com poucos reagentes. Placas de Petri: é um recipiente utilizado para cultivar microrganismos através de meio de cultura. Pipetas volumétricas: são instrumentos que permitem a medição e transferência rigorosa de líquidos. Pipetas graduadas: são instrumentos que apresentam transferência variadas de líquidos. Balão volumétrico: são utilizados para a diluição e preparação de soluções com grandes volumes. Bastão de vidro: utilizado para agitação de solução. Bureta: parece uma torneira que tem como função dispensar volumes de líquidos. Lâminas: são utilizadas para depositar o material biológico para estudo no microscópio. Resultados Foi observado as utilidades de cada vidraria, e o procedimento correto para usar cada uma delas. Anexos Referências: http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/vidrarias-de-laboratorio-2/ Acesso em: 28 nov 2017 Meio de Cultura Introdução Meio de cultura é uma preparação química desenvolvida em laboratório afim de cultivar microrganismos para seu crescimento e assim desenvolver estudos sobre ele. Na preparação de meios de cultura são utilizados nutrientes para determinados tipos de organismos, afim de criar um meio próprio e adequado para o crescimento de tal microrganismo. Nesta prática foi utilizado o agar nutriente, utilizado para a análise de água, alimentos e etc. Objetivo Aprender a preparar meios de cultura, para a análises microbiológicas. Materiais Erlenmeyer 250 ml Béquer 250 ml Agua destilada 250 ml Bastão de vidro Balança analítica Autoclave Manta aquecedora Placas de petri Agar nutriente Tubo de ensaio Proveta 50 ml /100 ml Métodos Foi pesado 7g de agar nutriente em pó na balança analítica, de acordo com seu rótulo, 28g/1L. Para descobrir a quantidade em gramas do agar, foi feita a seguinte cálculo: 28g -1000mL X -250mL X= 7g Com isso, vimos que a quantidade de agar nutriente em 250 ml de água é de 7g. Depois, foi adicionado 250ml de água destilada em um erlenmeyer junto ao agar nutriente e em seguida foi mexido com um bastão de vidro até diluir. Logo após, foi levado para a manta aquecedora por 2 minutos. A preparação foi lacrada com gazes, fita sinalizadora e papel madeira e logo após levada para a auto clave por 15 minutos a 121ºC. Após a retirada da auto clave, a preparação foi resfriada e logo após colocadas nas placas de petri. Logo depois a preparação do meio de cultura as placas foram depositadas na autoclave. Resultados Foi preparado o meio de cultura, afim de, espalhar um material a ser analisado, e esperar o total de 48 horas para olhar o seu crescimento microbiano. Anexos Referências: http://www.biomedicinabrasil.com/2010/09/meios-de-cultura.html Acesso em: 28 nov 2017 https://www.portaleducacao.com.br/conteudo/artigos/idiomas/meio-de-cultura-microbiologia-clinica/59094 Acesso em: 28 nov 2017 Isolamentos de microrganismos nas mãos e unhas Introdução O isolamento de microrganismo é uma técnica utilizada em laboratório que permite isolar microrganismos de ambientes como, ar, solo, água dentre outros, em meio de cultura para seu crescimento. É utilizado técnicas de isolamento de colônia, pelo método de espalhamento de placa. Objetivo Isolar em meios de cultura microrganismos das mãos e unhas dos alunos. Materiais Meio de Cultura Placas de Petri Swabs Papel toalha Métodos Foi despejado o meio de cultura já preparado nas placas de petri, logo após os alunos voluntários utilizaram o swab para retirar microrganismos das mãos e unhas, e depois esfregaram levemente no meio de cultura. Resultados Após a amostra ser depositada no meio de cultura, foi observado que houve em algumas placas de petri, grande crescimento microbiano. Anexos Referências https://pt.scribd.com/doc/95012959/Isolamento-e-cultivo-de-microrganismos-Basico Acesso em: 28, nov, 2017. Coloração de gram Introdução A coloração de gram é um método feito em laboratório para identificar bactérias em gram-positiva e gram-negativa, através da sua cor, sendo tonalidades avermelhada para a gram-negativa e tonalidades violeta para gram-positiva, utilizando matérias para sua preparação junto a uma lâmina com a amostra da bactéria. Objetivo Preparar a lâmina com a amostra da bactéria e colorir para a detecção em gram positiva ou negativa. Materiais 1 Lâmina 1 Pipeta de Pausteur 1 Alça de Platina Bico de Bunsen Placas de Petri Água para Injeção Pregador Papel toalha Luvas Água Destilada Cristal Violeta Lugol Álcool Acetona Fuscina Métodos Primeiramente, foi feito o esfregaço, utilizando uma lâmina, placas de petri contendo bactérias, água para injeção, levado ao bico de Bunsen até secar. Após o esfregaço já seco, a coloração de gram seguiu 4 etapas: 1º etapa: pingou gotas de cristal violeta, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; 2º etapa: pingou gotas de lugol, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; 3º etapa: pingou gostas de álcool cetona para descorar por 30 segundos e retirado com água corrente; 4º etapa: pingou gotas de fucsina, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; Logo após, foi secado a lamina com papel toalha e levado para ser analisada no microscópio. Resultados A lâmina observada apresentou coloração em tons de violeta, sendo assim uma bactéria gram-positiva. Anexos Referências https://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/ Acesso em 28, nov, 2017. Preparo de amostras e diluições Introdução Todo material a ser analisado, para determinar seu resultado, deve ser diluído. Este pode ser sólido ou líquido. Passando pela diluição, ele vai determinar os microrganismos existente na amostra. Objetivo Aprender as técnicas utilizadas para a preparação e diluição do leite em pó. Materiais Pipeta 900 µl + Ponteira azul Pipeta 100 µl + Ponteira amarela Becker Leite em pó Água destilada Tubos de ensaio Métodos Primeiramente foi feita a homogeneização do leite em pó em 25 ml de água destilada. Logo após, foi determinado a quantidade de ml em cada tudo de ensaio, de acordo com as pipetas utilizadas. Água destilada : 900µl equivale a 9ml Leite: 100µl equivale a 1ml Em seguida foi determinado 3 tubos de ensaio numerados em 10⁻¹, 10⁻², 10⁻³. Após, foi colocado 900µl de água destilada em todos os tubos. Depois, foi colocado 100µl de leite no tubo 1. Depois da diluição no leite na água no tubo 1, foi sugado 900µl da amostra e colocado no tubo 2, depois da diluição da amostra no tubo 2, foi sugado 900µl e colocado no tubo 3. Resultados Observou-se que o tubo 1 mostrou mais concentração apesar da diluição, o tubo 2 teve sua concentração mediana, e o tubo 3 teve uma concentração mais leve. De acordo com as técnicas, a amostra do tubo 3 está mais apta para pesquisa. Anexos Técnica de Plaqueamento Introdução Existem duastécnicas de plaquemento. A de plaqueamento de profundidade, que se dá em homogeneizar a amostra diluída no meio de cultura em placas de petri, e a técnica de plaqueamento de semeadura, onde a amostra só é adicionada no meio de cultura já preparado em placa de petri. Objetivo Introduzir amostras diluídas em placas de petri com meio de cultura, afim de observar a colonização de bactérias, e observar se o alimento está contaminado por microrganismos. Materiais Placas de Petri Meio de Cultura Tubos de ensaio com amostra diluída Chapa aquecedora Métodos Foi utilizado amostras do leite diluído na prática de “preparações de amostras e diluições”. Primeiramente, o meio de cultura foi aquecido na chapa aquecedora, pois estava gelificado, até atingir uma temperatura adequada. Logo após, foi adicionado 1 ml da amostra do tubo 1 à placa de petri e depois adicionado o meio de cultura, logo foi feita a homogeneização fazendo movimentos circulares com a placa. Foi utilizado está técnica em todos os 3 tubos. Resultados A amostra que estiver mais concentrada, vai apresentar na placa de petri maior concentração de bactéria, no caso, será a amostra do tubo 1. Anexos Coloração de gram do leite Introdução Após a técnica de plaqueamento, foi analisado a coloração de gram da amostra do leite diluído adicionado à placa de petri. Objetivo Analisar a amostra do leite adicionado à placa de petri, e identificar a presença de bactérias gram positiva e gram negativa. Materiais Placas de Petri + amostra Luvas Bico de Bunsen Lâminas Água para injeção Alça de Platina Pregadores Cristal Violeta Lugol Álcool Acetona Fuscina Água Destilada Métodos Primeiramente, foi feito o esfregaço, utilizando uma lâmina, água para injeção e uma amostra da colônia desenvolvida na placa de petri, foi levado ao bico de Bunsen até secar. Após o esfregaço já seco, foi efetuado as quatro etapas da coloração de gram. 1º etapa: pingou gotas de cristal violeta, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; 2º etapa: pingou gotas de lugol, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; 3º etapa: pingou gostas de álcool cetona para descorar por 30 segundos e retirado com água corrente; 4º etapa: pingou gotas de fucsina, esperou 1 minuto e 30 segundos, e retirou com água corrente; Logo após, foi secado a lamina com papel toalha e levado para ser analisada no microscópio. Resultados Não foi possível obter um resultado, devido algum erro cometido durante a aplicação da técnica. Anexos
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