RELATORIO BIOQ. CINETICA ENZIMATICA 1 MARCELO PRONTO

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Data: 25/05/2016
Bioquímica Fundamental e Experimental 21106NI_1
ALUNAS: Drielli Bubniak, Jéssica Muchinski, Maria Carolina e Michele Lau.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
1. OBJETIVO
Representar graficamente os valores de Km e Vm para a reação enzimática da
enzima glicose oxidase.
2. METODOLOGIA
Cinética enzimática é a abordagem mais antiga para a compreensão dos
mecanismos enzimáticos e continua sendo muito importante até hoje.
 As reações químicas conduzidas pelos organismos vivos são, na sua maioria,
catalisadas por enzimas, tornando a velocidade das mesmas compatíveis com as
exigências metabólicas.
Podemos determinar a afinidade de determinada enzima pelo substrato da reação
catalisada através de seu Km (concentração de substrato necessária para atingir metade
da velocidade máxima da reação catalisada pela enzima em questão).
A união da enzima com o substrato forma o complexo enzima-substrato, reação
reversível, podendo voltar a liberar a enzima e o substrato ou liberando a enzima na
mesma proporção em que foi utilizada mais o produto.
Michaelis e Menten desenvolveu então a expressão:
Onde [S] é a concentração de substrato e Vmáx é a velocidade máxima da reação,
em mol (de produto formado) por unidade de tempo.
Assim, a levedura por intermédio da “invertase” hidrolisa a sacarose, resultando
numa mistura equimolecular de glicose e frutose, açúcares esses que são absorvidos pela
célula. A membrana plasmática é impermeável à sacarose, e a levedura acaba excretando
a invertase para a hidrólise ocorrer fora da célula da levedura.
Para isso, se colocará a enzima frente a diferentes concentrações de substrato
(sacarose), resultando em diferentes velocidades de reação enzimática, permitindo
determinar graficamente os valores de Km e Vm para a reação enzimática da levedura.
3. MATERIAIS E MÉTODOS
3.1 Materiais e reagentes:
Pipetas automáticas;
Glicose;
H2O destilada;
Antipirilquinonimina;
3.2 Método:
Foi necessário calcular o volume da solução e o volume de água necessário, para
os seguintes requisitos (tabela1):
Ensaio Conc. final de
Glicose
Volume solução
estoque
Volume H2O
destilada
Volume final
A1 250nm ? ? 1000nm
B1 200nm ? ? 1000nm
C1 150nm ? ? 1000nm
D1 100nm ? ? 1000nm
E1 75nm ? ? 1000nm
F1 50nm ? ? 1000nm
G1 25nm ? ? 1000nm
H1 0nm ? 1 mL
(Tabela 1).
4. RESULTADOS
Para a realização dos cálculos de volume utilizou-se a fórmula 
Cinicial . Vinicial = Cfinal. Vfinal
Ensaio Conc. final de
Glicose
Volume solução
estoque 500 nm
Volume H2O
destilada
Volume final
A1 250nm 0,50 mL 0,50 mL 1000nm
B1 200nm 0,40 mL 0,60 mL 1000nm
C1 150nm 0,30 mL 0,70 mL 1000nm
D1 100nm 0,20 mL 0,80 mL 1000nm
E1 75nm 0,15 mL 0,85 mL 1000nm
F1 50nm 0,10 mL 0,90 mL 1000nm
G1 25nm 0,05 mL 0,95 mL 1000nm
H1 0nm 0 mL 1 mL 1 mL
A1- C.V=C’.V’ B1- C.V=C’.V’
200 . 1000 = 500 . V’ 250. 1000 = 500 . V’
V’= 500 nm → 0,50 mL V’ = 400 nm → 0,40 mL
C1 – C.V=C’.V’ D1 – C.V=C’.V’
150 . 1000 = 500 . V’ 100 . 1000 = 500 . V’
V’ = 300 nm → 0,30 mL V’ = 200 nm → 0,20 mL
E1 – C.V=C’.V’ F1 – C.V=C’.V’
75 . 1000 = 500 V’ 50 . 1000 = 500 . V’
V’ = 150 nm → 0,15 mL V’ = 100 nm → 0,10 mL
G1 – C.V=C’.V’
27 . 1000 = 500 . V’
V’ = 50 nm → 0,05 mL
5. DISCUSSÃO
Sabendo-se que não houve resultados para montar a gráfico Vmáx e Km da reação
enzimática da enzima glicose oxidase, logo os resultados apresentados são somente
experimentais.
6.CONCLUSÃO
Como não encontramos os valores de absorbância da glicose, não pudemos
calcular sua atividade enzimática. Possivelmente o reagente estava sob condições
inadequadas, onde sofreu desnaturação. Quando uma enzima perde sua forma, seu sítio
ativo tem mudança na sua formação, para que o substrato não possa caber no sítio ativo,
então a enzima perde sua função, e a enzima é inútil.