Apostila de Microbiologia

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MORFOLOGIA E MORFOLOGIA E 
ESTRUTURA DA CÉLULA ESTRUTURA DA CÉLULA 
BACTERIANABACTERIANA
FORMA E ARRANJO
• COCOS
• BACILOS • BACILOS 
(cilíndricas)
• ESPIRAL
Cocos Bacilos
Diplobacilos
Espirilos
espiroqueta
Estreptobacilos
Bacilos isolados
Características Gerais das Bactérias
• Morfologia
• Cocos: bactérias ovais ou esféricas
• - diplococos: 2 cocos
• - tétrade: 4 cocos
• - sarcina: 8 cocos (cúbico)• - sarcina: 8 cocos (cúbico)
• - estreptococos: cocos em cadeia
• - estafilococos: cocos agrupados
Características Gerais das Bactérias
• Bacilos: bactérias cilíndricas ou em forma de 
bastão
• - diplobacilos: 2 bacilos
• - estreptobacilos: bacilos em cadeia• - estreptobacilos: bacilos em cadeia
• - cocobacilos
• Espirilos e espiroquetas: bactérias helicoidais
Características Gerais das Bactérias
Campylobacter sp
Helicobacter sp
Leptospira sp
ESTRUTURAS BACTERIANAS
Estrutura da Célula Bacteriana e 
suas Funções
1. Estruturas externas à parede celular:
- cápsula
- flagelo
- filamento axial
- fímbria ou pilus
2. Parede celular
3. Estruturas internas à parede celular
- membrana citoplasmática
- região nuclear
- estruturas citoplasmáticas
Estruturas bacterianas e suas funções
• CÁPSULA
Composição: polissacarídeos ou polipeptídios → Substâncias 
poliméricas extracelulares substância gelatinosa
Funções: 
• Difícil de ser observada ao microscópio;
� Visualizada com tinta nanquim;
� Não é indispensável para o crescimento bacteriano; porém Não é indispensável para o crescimento bacteriano; porém 
importante para a sobrevivência no hospedeiro;
• Adesão celular (biofilme): receptores específicos
• aumento da capacidade invasiva: escapam da fagocitose
• Ex: Streptococcus pneumoniae
• Reservatório de água e nutrientes: proteção ao dessecamento
• Limitam a capacidade de Fagocitose das células de defesa do 
organismo (Neutrófilos)
Estruturas bacterianas e suas funções
• FLAGELOS
� Confere movimento à célula;
� Formado pela proteína flagelina;
� Mais comum em bacilos que em cocos;
� Quimiotaxia� Quimiotaxia
� Localização
Polar (1 flagelo)
Polar (vários flagelos)
Peritríquio (muitos flagelos)
Estruturas bacterianas e suas funções
• FÍMBRIAS, PÊLOS ou “PILI”
� Menores, mais curtos e mais numerosos que os flagelos;
� Visto ao microscópio eletrônico;
� Aderência às células do hospedeiro e outras superfícies;
� Fímbria sexual – condutor de material genético durante a 
conjugação bacteriana
Estruturas bacterianas e suas funções
• CROMOSSOMO
� 1 único cromossomo
� Circular
� Duplo filamento
� Encontrado na região nucleóide;
� Não são necessárias histona para conformação do DNA� Não são necessárias histona para conformação do DNA
Estruturas bacterianas e suas funções
• PLASMÍDIOS
� DNA menores
� Circulares
� Extracromossomais
� Mais encontrados em G-
� Não são essenciais, mas quando presentes, � Não são essenciais, mas quando presentes, 
conferem vantagem seletiva (Ex: resistência aos 
antibióticos)
Estruturas bacterianas e suas 
funções
• RIBOSSOMOS
� Formado pelas subunidades 30S + 50S (70S)
� Diferente do ribossomo 80S dos eucariontes;
� Alvo importante para drogas antibacterianas;
Estruturas bacterianas e suas 
funções
• PAREDE CELULAR
Gram +
Gram -
Funções :
- dar forma à célula
- proteção osmótica
Estruturas bacterianas e suas funções
• Membrana plasmática
• MEMBRANA CELULAR 
• Formada por duas camadas de fosfolipídeos,com proteínas 
inseridas. 
• Diferencia-se da dos seres Eucariotas por não conter
esteróis, sendo uma estrutura fluida, que permite a mobilidade de 
proteínas (permeases, enzimas respiratórias, enzimas hidrolíticas, 
etc.).
• Membrana plasmática
• Funções :
• Permeabilidade seletiva
• Reações de obtenção de energia
• Produção de enzimas celulares
• Contém proteínas transportadoras;
Estruturas bacterianas e suas funções
• Contém proteínas transportadoras;
� Mesossomo – Invaginação da membrana plasmática Onde ocorre a 
divisão da célula pela metade ligar e separar cromossomos das 
células filhas na divisão celular;
• Membrana plasmática
Estruturas bacterianas e suas 
funções
• ESPOROS
� Algumas bactérias G+ (mas nunca as G-) formam esporos;
� Condições adversas- estado vegetativo - estado dormente;
� EX: Clostridium e Bacillus
� Resistência ao Calor e a compostos químicos
� Não são morto pela fervura 100ºC são mortos APENAS a 121ºC
Estruturas bacterianas e suas funções
esporo
Célula vegetativa
Estruturas bacterianas e suas funções
Formação dos Esporos
Esporulação Germinação 
Coloração de Gram
• Hans Christian Gram 
(1884)
• Fundamental para a 
taxonomia e identificação 
das bactérias
• Rotina da Bacteriologia• Rotina da Bacteriologia
• Permite dividir as 
bactérias em dois grupos:
� Gram positivas
� Gram negativas
Coloração de Gram
• A técnica de coloração de Gram consiste em expor as
células bacterianas à seguinte sequência:
• Corante primário – violeta de cristal: cora o citoplasma de
púrpura, independentemente do tipo de célula.
• Mordente – solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta• Mordente – solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta
de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel
dentro da célula.
• Agente descolorante – álcool, acetona ou ambos: solvente
lipídico.
• Contrastante – safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de
vermelho.
Coloração de Gram
DIFERENÇAS ENTRE AS 
MEMBRANAS EXTERNAS
Gram 
Negativas:
contém uma 
membrana 
externa de 
lipídeos e lipídeos e 
peptídeos 
glicanos 
delgados 
perdem o 
corante púrpura 
quando tratadas 
com álcool-
cetona.
Coloração de Gram
• BACTÉRIAS- renovação do protoplasma e execução de 
todas suas atividade
PRECISAM DE:
• FONTES DE ENERGIA
• FONTE DE MATÉRIA-PRIMA
Protoplasma: Parte viva da célula
FONTE DE MATÉRIA-PRIMA
• Para a renovação da matéria viva, os elementos
quantitativamente mais importantes são:
• Carbono
�Hidrogênio�Hidrogênio
�Oxigênio
�Nitrogênio
�Enxofre
�Fósforo
FONTES DE CARBONO
• AUTOTRÓFICAS – única fonte de Carbono é o CO2 ou 
HCO3
As bactérias autotróficas fabricam o seu próprio alimento por meio 
da fotossíntese ou da quimiossíntese. Na fotossíntese, a energia 
utilizada na produção do alimento vem da luz solar. Na 
quimiossíntese, a energia vem de algum composto químico a ser quimiossíntese, a energia vem de algum composto químico a ser 
"queimado". 
HETEROTRÓFICAS (maioria)- exigem fontes orgânicas 
de carbono
• As bactérias heterotróficas, alimentam-se principalmente da 
matéria orgânica que conseguem decompondo organismos mortos. 
São chamadas de decompositores ou saprófitas 
Carboidratos (D-glicose)
Aminoácidos
Lipídeos
Amido
celulose
ÍONS INORGÂNICOS ESSENCIAIS
• MACRONUTRIENTES- necessitam em 
maior quantidade: P , S , K , Mg , Fe
� P – síntese de ácido nucléico e fosfolipídio;� P – síntese de ácido nucléico e fosfolipídio;
� S – cisteína e metionina; vitaminas: tiamina, biotina, coenzima A;
� K – enzimas envolvidas na síntese de proteínas;
� Mg – estabilizador de ribossomos, membranas celulares e ácidos 
nucléicos; 
• MICRONUTRIENTES-
Cu , Co , Zn , Mn , Na
FATORES DE CRESCIMENTO
• Compostos orgânicos indispensáveis a um determinado 
microrganismo, mas que ele não consegue sintetizar.
Ex: vitaminas do complexo B
aminoácidos
nucleotídeosnucleotídeos
ÁGUA
• Não constitui um nutriente, mas é 
absolutamente indispensável para o 
crescimento
o Bactérias se nutrem pela passagem de
substâncias em solução pela m. plasmática;
o Regula a pressãoosmótica;
o A maioria das bactérias morre pela dessecação
(quando não são esporos);
OXIGÊNIO ATMOSFÉRICO
• AERÓBICAS (exigem presença de O2 livre)
• MICROAERÓFILAS (exigem O2 mas não toleram a 
pressão atmosférica)
• ANAERÓBIA ESTRITA (não tolera O2 – morre)
• ANAERÓBIA NÃO-ESTRITA (não utiliza O2, mas 
ele não é tóxico)
• ANAERÓBIA FACULTATIVA (cresce tanto na 
presença quanto na ausência de O2 livre)
a) AERÓBIOS 
ESTRITOS
b) ANAERÓBIOS 
ESTRITOS
C) ANAERÓBIOS 
OXIGÊNIO
C) ANAERÓBIOS 
FACULTATIVOS
d) MICROEAEÓFILOS
e) ANAERÓBIOS
AEROTOLERANTES
Crescimento BacterianoCrescimento Bacteriano
Fatores Extrínsecos
Classificação Quanto a Temperatura
Temperatura de Crescimento dos Microrganismos
Classificação Quanto ao Ph
• Diferentes espécies de microrganismos têm diferentes tolerâncias 
de pH e estes pH específicos refletem a adaptação do organismo 
ao seu ambiente natural. No entanto, há determinadas espécies que 
estão adaptadas para crescer a vários valores da escala de pH
• Acidófilos: desenvolvem-se em baixos valores de pH (1- 5,5)
Crescimento Bacteriano
• Acidófilos: desenvolvem-se em baixos valores de pH (1- 5,5)
• Neutrófilos: desenvolvem-se em pH 5,5-8
• Alcalófilos:desenvolvem-se a valores elevados de pH (8,5-11,5)
Reprodução das bactérias: divisão bináriaReprodução das bactérias: divisão bináriaReprodução das bactérias: divisão bináriaReprodução das bactérias: divisão binária
AssexuadaAssexuadaAssexuadaAssexuada
Duplicação do DNA
Parede celular
Membrana
plasmática
Molécula de DNA
Separação das células
Molécula de DNA
Crescimento de uma cultura Bacteriana
1 única bactéria que sofre divisão binária o aumento da 
população na cultura é :
1����2 ����4 ����8 ����16 ����32...
Crescimento Bacteriano
Crescimento de uma cultura Bacteriana
Esse aumento no numero de células bacterianas pode 
ser expresso por uma progressão geométrica:
1����2¹����2² ����2³ ... 2n
Crescimento Bacteriano
N = ao numero de gerações 
Durante o crescimento ativo de uma cultura de bactérias 
(sem morte), as células crescem exponencialmente, 
aumentando por meio dessa progressão geométrica.
Tempo de Geração:
É o intervalo de tempo requerido para que cada microrganismo se 
divida.
• Cada especie tem seu tempo de geração
Crescimento Bacteriano
• Ex: E.coli O tempo de geração em meio liquido pode ser apenas de 
12,5 min
• Ex Mycobacterium tuberculosis é de 13 a 15 horas
• O tempo de geração são fortemente influenciados pela 
composição nutricional do meio de cultura e pelas condições 
físicas de incubação.
Curva de crescimento de Microrganismos Unicelulares em um Sistema 
Fechado
Crescimento Bacteriano
Curva de crescimento de Microrganismos Unicelulares em um 
Sistema Fechado
Crescimento Bacteriano
Curva de crescimento de Microrganismos Unicelulares em um 
Sistema Fechado
Crescimento Bacteriano
Curva de crescimento de Microrganismos Unicelulares em um 
Sistema Fechado
Crescimento Bacteriano
Curva de crescimento de Microrganismos Unicelulares em um 
Sistema Fechado
Crescimento Bacteriano
Caracterização dos MicrorganismosCaracterização dos Microrganismos
• Uma população microbiana no ambiente natural possui 
diversas espécies não somente de bactérias , mas 
também de leveduras, bolores, algas, protozoários. E 
também vírus.
Caracterização dos Microrganismos
Protozoário
Virus
Fungos
Algas
Bactérias
• Como fazer para identificar quantos e quais são os tipos 
de microrganismo que estão presentes em um ambiente 
particular?
• Qual é a importância dessa identificação?
Caracterização dos Microrganismos
Importância da Caracterização dos microrganismos:
• Verificar a portabilidade da Água – Ausência de E.coli
• Isolar bactérias que causam doenças para dar um 
diagnostico médico preciso
Caracterização dos Microrganismos
diagnostico médico preciso
• Definir as populações de bactérias existentes nos 
ambientes aquático, terrestre ou no ar.
Técnica de Cultura Pura
• Para determinar as características de um 
microrganismo, ele deve estar em Cultura Pura.
• Cultura Pura: Todas as células presentes deverão ser 
Caracterização dos Microrganismos
• Cultura Pura: Todas as células presentes deverão ser 
idênticas morfologicamente e geneticamente. Isso quer 
dizer que essas células partiram de uma mesma célula 
parental.
“Uma cultura que tem apenas um tipo de microrganismo é conhecida por cultura 
pura, uma cultura que tem mais do que um tipo de microrganismo é uma cultura 
mista”
Isolamento e Cultivo de Culturas Puras
Em laboratório os microorganismos são cultivados em 
material nutriente chamado Meio de Cultura.
Caracterização dos Microrganismos
CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS MEIOS DE CULTURA
• Para a cultura de microrganismos é necessário existirem meios de 
cultura apropriados que simulem ou até melhorem as condições 
naturais do ambiente em que se desenvolvem. 
• Um meio de cultura é um substrato nutritivo capaz de permitir a 
nutrição e o crescimento dos microrganismos (bactérias, fungos, 
algas, parasitas) fora do seu ambiente biológico natural, ou seja, é 
uma preparação de nutrientes utilizada para o crescimento de 
Caracterização dos Microrganismos
uma preparação de nutrientes utilizada para o crescimento de 
microrganismos em laboratório.
• A sobrevivência e o crescimento dos microrganismos depende de 
um adequado suprimento de nutrientes e de um ambiente físico 
favorável. No entanto, há uma grande diversidade de necessidades 
nutricionais e ambientais entre os microrganismos e por isso é que 
só compreendendo as suas necessidades que se consegue ter 
sucesso na cultura de microrganismos no laboratório.
Composição dos meios de cultura
• Os meios de cultura devem conter os nutrientes em quantidades e 
proporções corretas para a manutenção e multiplicação dos 
microrganismos. A maior parte dos microrganismos utiliza 
substâncias de baixo peso molecular que são, freqüentemente, 
derivadas da degradação enzimática de nutrientes complexos. Por 
isso, os nutrientes indispensáveis ao organismo em causa devem 
estar sob forma assimilável.
Caracterização dos Microrganismos
estar sob forma assimilável.
• As necessidades nutricionais dos microrganismos são satisfeitas no 
laboratório através da variedade de meios de cultura existentes. Os 
microrganismos têm necessidades nutricionais variáveis de acordo 
com a espécie, no entanto, há determinadas substâncias cuja 
necessidade é comum a todos.
Composição dos meios de cultura
• Constituintes essenciais ou básicos:
» Água
» Fonte de energia
» Fonte de carbono
» Fonte de hidrogénio e de oxigénio
Caracterização dos Microrganismos
» Fonte de hidrogénio e de oxigénio
» Fonte de azoto
» Fonte de enxofre e de fósforo
» Elementos metálicos
» Factores de Crescimento
» Substâncias Inibidoras:
» Indicadores de pH
» Substâncias solidificantes (inertes)
Composição dos meios de cultura
Água
• A água é um componente importante e sempre presente 
em altas quantidades. Todas as células requerem água 
no meio para que os nutrientes de baixo peso molecular 
possam atravessar a membrana celular.
• A água utilizada nos meios de cultura deve ser 
Caracterização dos Microrganismos
• A água utilizada nos meios de cultura deve ser 
destilada, pois a água de consumo contém minerais que 
podem reagir com os constituintes do meio formando 
precipitados, além de substâncias antisépticas (ex. 
cloro) que podem interferir com o crescimento 
microbiano.
Composição dos meios de cultura
Fonte de energia
• As atividades metabólicas das células só podem ocorrer 
se houver energia disponível na célula. 
RELEMBRANDO....
• Os microrganismos podem ser divididosem duas 
categorias de acordo com a sua fonte de energia:
Caracterização dos Microrganismos
categorias de acordo com a sua fonte de energia:
• - Fototróficos: usam a energia radiante como única 
fonte de energia, através da fotossíntese.
• - Quimiotróficos: dependem da oxidação de compostos 
químicos como fonte de energia. Alguns microrganismos 
usam moléculas orgânicas (como a glicose), enquanto 
outros usam compostos inorgânicos (como o H2S e o 
NaNO2).
Composição dos meios de cultura
Fonte de carbono
• O carbono é um elemento essencial necessário ao crescimento 
microbiano.
RELEMBRANDO... Entre os microrganismos há duas categorias de 
acordo com as suas necessidades nutricionais:
• - autotróficos: usam carbono inorgânico na forma de dióxido de 
Caracterização dos Microrganismos
• - autotróficos: usam carbono inorgânico na forma de dióxido de 
carbono como única ou principal fonte de carbono. Estes 
microrganismos podem ser cultivados num meio de cultura só com 
compostos inorgânicos, pois não necessitam de compostos 
orgânicos e podem ser inibidos por eles.
• - heterotróficos: usam compostos orgânicos como principal fonte 
de carbono. Estes microrganismos não podem ser cultivados num 
meio só com compostos inorgânicos, pois eles necessitam de 
nutrientes orgânicos, principalmente glicose.
Composição dos meios de cultura
Fonte de hidrogénio e de oxigénio
• As necessidades de hidrogénio e de oxigénio são, 
geralmente, satisfeitas ao mesmo tempo que as de 
carbono, uma vez que esses elementos fazem parte de 
Caracterização dos Microrganismos
carbono, uma vez que esses elementos fazem parte de 
muitos compostos, usados como fonte de carbono e de 
energia. 
Composição dos meios de cultura
Fonte de azoto
• O azoto é também um elemento essencial para a síntese de muitas 
macromoléculas celulares particularmente proteínas e ácidos 
nucleicos.
• Alguns microrganismos utilizam o azoto atmosférico (N2), outros 
contam com compostos inorgânicos como a amónia e os sais de 
Caracterização dos Microrganismos
contam com compostos inorgânicos como a amónia e os sais de 
nitrato, enquanto outros necessitam de compostos orgânicos que 
contêm azoto como os aminoácidos.
• Uma das principais fontes de azoto de origem comercial são as 
peptonas. Estas são obtidas a partir da hidrólise ácida, alcalina ou 
enzimática de matérias proteicas de origem animal ou vegetal e 
incluem aminoácidos, peptídeos e polipeptídeos. 
• As peptonas são hidrossolúveis e não coaguláveis pelo calor o que 
permite que os meios de cultura sejam esterilizados no autoclave.
Composição dos meios de cultura
Fonte de enxofre e de fósforo
• O enxofre faz parte de alguns aminoácidos e por isso é 
um componente das proteínas. As suas fontes incluem 
compostos orgânicos como os aminoácidos sulfurados, 
compostos inorgânicos como os sulfatos, e ainda o 
Caracterização dos Microrganismos
compostos orgânicos como os aminoácidos sulfurados, 
compostos inorgânicos como os sulfatos, e ainda o 
enxofre elementar.
• O fósforo é necessário para a formação dos ácidos 
nucleicos e para a síntese dos compostos orgânicos de 
alta energia - adenosina trifosfato (ATP). O fósforo é 
fornecido na forma de sais de fosfato para ser usado por 
todas as células microbianas.
Composição dos meios de cultura
Elementos metálicos
• A maior parte das células necessita de alguns iões 
metálicos como cálcio, potássio, magnésio, ferro, 
manganésio, zinco, cobre, molibdénio, níquel, cobalto e 
Caracterização dos Microrganismos
manganésio, zinco, cobre, molibdénio, níquel, cobalto e 
sódio para as suas várias actividades celulares. Estes 
iões são necessários em quantidades ínfimas 
(micronutrientes), sendo usados como cofactores e 
activadores de enzimas. 
Composição dos meios de cultura
Factores de Crescimento:
• São substâncias essenciais para o metabolismo bacteriano, pois 
são componentes celulares ou precursores desses componentes 
que não podem ser sintetizados pelos microrganismos 
(aminoácidos, purinas, pirimidinas e vitaminas). Os microrganismos 
que não conseguem sintetizar esses componentes dentro da célula 
Caracterização dos Microrganismos
que não conseguem sintetizar esses componentes dentro da célula 
necessitam de uma fonte externa.
• As vitaminas são substâncias orgânicas que contribuem para o 
crescimento celular e são essenciais, em pequenas concentrações, 
para as atividades celulares. São também fontes de coenzimas que 
são necessárias para a formação de sistemas enzimáticos ativos.
• São factores de crescimento o sangue (factores x e v e soro), 
aminoácidos, extrato de leveduras, líquido ascítico, etc. A ação de 
algumas destas substâncias reside na sua capacidade de adsorver 
substâncias tóxicas do meio exterior.
Composição dos meios de cultura
Substâncias Inibidoras
Incluem corantes, antibacterianos, sais biliares, NaCl, 
alteração do pH, etc.
Indicadores de pH
Caracterização dos Microrganismos
• Indicam se o microrganismo é ou não capaz de utilizar o 
substrato alterando o pH e originando mudanças de cor 
do meio de cultura.
Substâncias solidificantes (inertes)
• São aquelas que conferem consistência ao meio. 
Utilizam-se o Agar ou gelose, a gelatina e o gel de sílica.
Condições de incubação dos meios de cultura
• Para que haja crescimento microbiano é necessário que 
um meio de cultura forneça nutrientes, mas também é 
preciso que forneça um ambiente físico adequado a cada 
microrganismo.
Caracterização dos Microrganismos
microrganismo.
• A temperatura, o pH e a atmosfera gasosa são três dos 
mais importantes fatores físicos que influenciam o 
crescimento e sobrevivência dos microrganismos.
Composição Química do Meio de Cultura
• Quimicamente definidos ou sintéticos
• São constituídos por quantidades conhecidas de substâncias 
orgânicas e/ou inorgânicas quimicamente puras e bem definidas, ou 
seja, a sua composição química é conhecida.
• Estes meios são, geralmente, usados na cultura de microrganismos 
Caracterização dos Microrganismos
• Estes meios são, geralmente, usados na cultura de microrganismos 
autotróficos, como as algas, ou de microrganismos heterotróficos 
pouco exigentes. 
• Podem ser usados para determinar as necessidades nutricionais 
precisas de um microrganismo. Adicionando ou retirando um 
constituinte a este tipo de meios permite verificar se esse 
constituinte é essencial ou não para o crescimento de um 
determinado microrganismo.
Composição Química do Meio de Cultura
Quimicamente complexos ou artificiais
• Resultam da adição de substâncias naturais de composição química mal 
definida a um meio sintético, ou seja, a composição química exata não se 
conhece.
Caracterização dos Microrganismos
• São usados para simular e até melhorar o ambiente natural dos 
microrganismos a ser estudados. São usados por rotina na cultura de 
microrganismos
• São compostos por um número limitado de substâncias complexas, extrato 
de plantas ou animais, cujas composições químicas exatas não são 
conhecidas: extratos de carne, peptonas (proteínas parcialmente 
degradadas por enzimas como os hidrolisados de caseína do leite e os 
hidrolisados de proteínas de soja), extrato de leveduras, sangue, soro, leite, 
extrato de solo, etc. 
• Todos estes produtos adicionados ao meio de cultura estimulam a 
crescimento da maior parte dos microrganismos heterotróficos.
Estado Físico do Meio de Cultura
• Líquidos ou caldos
• São aqueles que não têm agente solidificante. Não permitem 
distinguir os diferentes tipos de microrganismos pelo aspecto 
morfológico porque não há formação de colônias organizadas.
Caracterização dos Microrganismos
morfológico porque não há formação de colônias organizadas.
• São usados para o estudoda morfologia bacteriana, para aumentar 
o número de microrganismos e para várias provas bioquímicas (ex. 
provas fermentativas).
Estado Físico do Meio de Cultura
• Sólidos
• Obtêm-se a partir dos meios de cultura líquidos após adição de uma substância 
solidificante em determinada quantidade.
• Os meios sólidos têm a vantagem de apresentar uma superfície endurecida onde os 
microrganismos podem crescer, formando colónias. Cada colónia é um aglomerado 
de células visível macroscopicamente que teve origem a partir da multiplicação de 
Caracterização dos Microrganismos
de células visível macroscopicamente que teve origem a partir da multiplicação de 
uma só célula e que representa o crescimento de uma só estirpe de microrganismos. 
• Estes meios permitem observar a morfologia das colónias, isolar culturas puras, 
conservar e armazenar estirpes bacterianas e observar reacções bioquímicas 
específicas.
• Um meio completamente sólido requer uma concentração de agar entre 1,5 e 2%, 
enquanto para se obter um meio semi-sólido são necessárias concentrações entre 
0,2 e 0,5%.
Estado Físico do Meio de Cultura
• Semi-sólidos
• Obtêm-se também a partir de meios de cultura líquidos após 
adição de um agente solidificante em menor proporção que 
nos meios sólidos.
Caracterização dos Microrganismos
• Estes meios de cultura são usados no estudo da mobilidade 
activa dos microrganismos. Podem também ser usados em 
estudos fermentativos e na promoção de crescimento 
anaeróbio.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Simples ou básicos
• São os meios que apenas possuem os nutrientes básicos ou 
essenciais, por isso só crescem microrganismos pouco exigentes 
que tenham grande capacidade de síntese.
Caracterização dos Microrganismos
• Como são meios pobres em nutrientes são insuficientes para 
suportar o crescimento de microrganismos mais exigentes.
– Exemplos:
» Água Peptonada: contém água, peptonas e cloreto de 
sódio.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Ricos ou enriquecidos
• A partir dos meios básicos, por adição de outros nutrientes, produzem-se todo 
o tipo de meios complexos e ricos. Estes meios são usados para a cultura de 
microrganismos exigentes que têm necessidades nutricionais altamente elaboradas 
e específicas. Estes microrganismos não crescem ou crescem com dificuldade em 
meios básicos e por isso requerem a adição de fatores de crescimento (são 
Caracterização dos Microrganismos
meios básicos e por isso requerem a adição de fatores de crescimento (são 
substâncias essenciais para o seu metabolismo, mas que eles não são capazes de 
sintetizar). Nestes meios pode haver também capacidade de adsorção de 
substâncias tóxicas.
• Estes meios permitem o crescimento generalizado de todos os 
microrganismos da amostra. Assim, utilizam-se quando se quer quantificar os 
microrganismos de uma amostra ou se pretende fazer crescer todos os 
microrganismos que existam num produto que em princípio deveria estar estéril (ex. 
sangue), já que qualquer crescimento é sinal de patogenicidade.
• Um meio rico contém uma grande variedade de substâncias orgânicas como: 
extratos de carne, extrato de levedura, sangue, soro, líquido ascítico, infusão de 
coração e cérebro, etc.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Ricos ou enriquecidos
• Exemplos:
• Agar Sangue: é composto por 5 a 10% de sangue desfibrinado, animal 
ou humano, o que vai enriquecer o meio em nutrientes. O sangue só é 
adicionado ao meio liquefeito quando a temperatura se encontra entre 
45-48º C, para que os glóbulos vermelhos fiquem intactos.
Caracterização dos Microrganismos
45-48º C, para que os glóbulos vermelhos fiquem intactos.
• Agar Chocolate: é também composto por sangue, mas este é 
adicionado ao meio quando a sua temperatura é de 80º C. É utilizado 
para o crescimento de microrganismos exigentes como os do género 
Neisseria.
• Brain-Heart infusion: é um meio muito rico que contém infusão de 
cérebro e coração de vitela. É utilizado para microrganismos exigentes 
como os do género Streptococcus e Neisseria. 
Caracterização dos Microrganismos
Agar Sangue Agar Chocolate Agar Brain-Heart infusion
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento (líquidos)
• Além dos nutrientes necessários para o crescimento de 
todos os microrganismos, estes meios específicos 
contêm um ou mais compostos químicos que são 
essenciais devido à sua especificidade funcional.
Caracterização dos Microrganismos
• Estes meios são usados para isolar grupos específicos 
de microrganismos, pois selecionam um determinado 
microrganismo de um produto polimicrobiano 
(expectoração, fezes, saliva, etc.).
• No entanto, é preciso ter em conta que não há meios de 
cultura 100% seletivo, podendo crescer eventualmente 
outros microrganismos. 
Caracterização dos Microrganismos
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento (líquidos)
• São meios que permitem o crescimento de um tipo de microrganismos em 
detrimento de outro ou de outros, pois são formulados para suprimir o 
crescimento dos microrganismos que não interessam ao fim em vista, 
permitindo o crescimento dos microrganismos que se desejam isolar.
• Assim, o favorecimento de um tipo de microrganismo pode dever-se a uma 
ação inibidora sobre os restantes (condiciona o crescimento de uns) ou à ação 
estimuladora do microrganismo pretendido (mais raro) ou ambas, ou seja, 
inibe o crescimento de um tipo de microrganismos enquanto aumenta o inibe o crescimento de um tipo de microrganismos enquanto aumenta o 
crescimento de outro.
• Os meios líquidos com inibidores do crescimento microbiano não permitem 
uma seleção tão precisa como nos meios sólidos, há é um enriquecimento do 
conteúdo microbiano do meio. Estes caldos estimulam o crescimento de um 
microrganismo específico, que se torna assim a espécie dominante porque se 
sobrepõe aos seus competidores. Permitem aumentar a concentração de 
microrganismos que estão em minoria no ambiente.
• Os agentes de seleção podem ser produtos químicos, corantes (eosina, verde 
de malaquita, azul de metileno, violeta cristal, verde brilhante, etc.), 
antimicrobianos, sais minerais (tetrationato de sódio, nitrato de potássio, 
telurito de potássio, cloreto de sódio, etc.), sais biliares, asparagina (promove 
o crescimento), etc.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
• Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento 
(líquidos)
• Exemplos:
• Agar Sabouraud: favorece o crescimento dos fungos, pois tem um pH baixo 
(5,6) e uma alta concentração de glicose, além disso o crescimento 
bacteriano está inibido devido à presença de um antibacteriano no meio.
Caracterização dos Microrganismos
bacteriano está inibido devido à presença de um antibacteriano no meio.
• Caldo Verde Brilhante: condiciona o crescimento de cocos Gram positivo e 
favorece o crescimento de bacilos Gram negativo, principalmente da família 
Enterobacteriaceae devido à presença de sais biliares e do corante verde 
brilhante.
• Caldo de Tetrationato e Caldo de Selenito: o tetrationato e o selenito de 
sódio são substâncias inibidoras de bactérias intestinais e de muitos cocos 
Gram positivo. Estes meios são utilizados no isolamento de Salmonella e 
de Shigella a partir de produtos (água, alimentos, fezes, urina, etc.) onde a 
concentração destes patogénicos é baixa em relação ao resto da 
população normal. 
Caracterização dos Microrganismos
Agar Sabouraud
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento (líquidos)
Diferenciais
• Estes meios permitem separar grupos de microrganismos através da 
sua aparência no meio (características morfológicas ou bioquímicas).
• Têm incorporado substâncias químicas (indicadores)que, após a 
inoculação e a incubação, assinalam alterações características na 
aparência do crescimento microbiano (colônias) e/ou no meio que 
Caracterização dos Microrganismos
inoculação e a incubação, assinalam alterações características na 
aparência do crescimento microbiano (colônias) e/ou no meio que 
rodeia as colônias (geralmente por mudança de cor do meio onde 
existe a colônia) o que permite a sua diferenciação e identificação. 
Dão informação acerca do comportamento e do metabolismo dos 
microrganismos, permitindo a visualização de atividades metabólicas.
• Um meio com um hidrato de carbono e um indicador de pH permite 
detectar se o açúcar foi ou não metabolizado, pois este quando 
fermentado origina como produtos terminais ácidos orgânicos que 
fazem diminuir o pH e por isso mudam a cor do meio assinalando as 
características fermentativas do microrganismo em estudo.
• Exemplos:
• Meio de Simmons: o citrato é neste meio a única fonte de carbono, assim 
se houver crescimento microbiano significa que o citrato está a ser 
metabolizado. Isto origina uma variação de pH (aumento de pH) que é 
detectada pelo azul de bromotimol que passa de verde a azul.
• Agar Sangue: este meio com glóbulos vermelhos intactos fornece 
informação acerca da capacidade hemolítica dos microrganismos. 
Caracterização dos Microrganismos
informação acerca da capacidade hemolítica dos microrganismos. 
Distingue as bactérias não hemolíticas (gama-hemólise) das bactérias alfa-
hemolíticas (hemólise parcial) e das bactérias beta-hemolíticas (hemólise 
total).
• Agar Cled (Cystine Lactose Electrolyte Deficient Media): é um meio 
diferencial, pois como contém lactose e um indicador de pH (azul de 
bromotimol) permite detectar se o açúcar foi ou não metabolizado. É usado 
para cocos Gram positivo e para bacilos Gram negativo, e permite travar o 
crescimento em toalha dos Proteus.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento (líquidos)
• Simultaneamente seletivos e diferenciais
• Exemplos:
• Agar SS: a presença de sais biliares e do corante verde brilhante tornam-no um meio 
seletivo, pois inibem muitas bactérias Gram positivo. É bom para o isolamento de 
Salmonella e Shigella. É um meio diferencial devido à presença de lactose e de um 
indicador de pH (vermelho neutro) que permite distinguir os microrganismos 
fermentadores da lactose (colônias rosa) dos não fermentadores (colônias da cor do 
Caracterização dos Microrganismos
fermentadores da lactose (colônias rosa) dos não fermentadores (colônias da cor do 
meio).
• Agar EMB (Eosine Methylene Blue) ou Meio de Levine: é um meio seletivo, pois é 
parcialmente inibidor para microrganismos Gram positivo devido ao azul de metileno, 
e por conseguinte o crescimento dos Gram negativo é mais abundante. 
• É um meio diferencial, pois a presença de lactose e do corante eosina permite 
diferenciar as bactérias fermentadoras das não fermentadoras da lactose. 
• Os microrganismos fermentadores da lactose levam à baixa de pH, de modo que as 
colônias aparecem com aspecto verde metalizado. Os que não fermentam a lactose 
produzem colônias incolores, mas devido à sua transparência aparecem com a cor 
do meio, ou seja, púrpura. Este meio permite identificar os Gram negativo 
patogênicos através da caracterização visual, porque eles raramente fermentam a 
lactose.
Objetivos Funcionais dos Meio de Cultura
Seletivos (sólidos) ou de enriquecimento (líquidos)
• Simultaneamente selectivos e diferenciais
• Exemplos:
• Agar MacConkey: é um meio seletivo, pois contém sais biliares e o corante violeta de 
cristal para inibir o crescimento de bactérias Gram positivo permitindo que as Gram 
negativo cresçam. Por outro lado, é um meio diferencial, pois como contém lactose e 
um indicador de pH (vermelho neutro) permite distinguir entre as bactérias Gram 
Caracterização dos Microrganismos
um indicador de pH (vermelho neutro) permite distinguir entre as bactérias Gram 
negativo que fermentam (ex. E.coli) e as que não fermentam (ex. Salmonella e 
Shigella) esse hidrato de carbono. 
• As colônias das bactérias fermentadoras de lactose aparecem rosadas enquanto as 
outras ficam incolores e até transparentes.
• Agar Manitol Sal: é um meio seletivo pois, como tem uma grande concentração 
salina (7,5% NaCl) inibe a maior parte dos microrganismos permitindo o crescimento 
das bactérias da família Micrococcaceae (cocos Gram positivo). É um meio 
diferencial, pois tem presente o álcool manitol e um indicador de pH (vermelho de 
fenol) que passa de vermelho a amarelo se o microrganismo fermentar o manitol.
Meios de transporte
• São meios estáveis que não permitem que os microrganismos se 
desenvolvam, mas mantendo a viabilidade de todos os 
microrganismos da amostra sem alterarem as suas concentrações. 
• São usados para armazenamento temporário de amostras para 
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serem transportadas para o laboratório, nas mesmas condições em 
que se encontravam no momento da colheita.
Meios de manutenção
• Permitem manter as culturas durante algum tempo, pois os 
microrganismos vão crescendo, mas lentamente.
CULTURA DE MICRORGANISMOS
• Conhecer procedimentos para a cultura de microrganismos.
• Compreender a importância das técnicas assépticas na cultura de 
microrganismos.
• Conhecer princípios e procedimentos das diversas técnicas de 
Caracterização dos Microrganismos
• Conhecer princípios e procedimentos das diversas técnicas de 
semeadura em placa.
• Executar semeaduras em diferentes meios de cultura em placa para 
isolamento de colônias a partir de produtos polimicrobianos. 
• Semear :é a designação microbiológica para a introdução, de um 
inoculo de origem biológica ou cultural num meio de cultura 
adequado.
• Os instrumentos usados para a execução da semeadura 
(inoculação)são: 
- alças simples ou calibradas.
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- alças simples ou calibradas.
- fio reto
- pipeta Pasteur
- Alça de Drigalsky
- zaragatoa
- outros
• Os meios de cultura sólidos podem ser distribuídos de forma variada de acordo com 
o que se pretende: em balões tipo Erlermeyer ou outros, tubos em rampa, em 
cilindro e em placas de Petri.
• Os meios de cultura líquidos (caldos) são habitualmente distribuídos em 
balões ou tubos.
•
• A passagem de bactérias de um meio de cultura para outro é chamada 
repicagem.
• Técnicas de semeadura (Inoculação
Caracterização dos Microrganismos
• Técnicas de semeadura (Inoculação
• Meios sólidos:
- Em picada
- Em estria
- Esgotamento.
- Em toalha
- “Shake.”
• Meios líquidos:
• - Dispersão.
CONTAGEM EM SUPERFÍCIE
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CONTAGEM EM POUR PLATE
Contagem em superfície
• Plaqueamento de um volume de cultivo diluído (não 
exceder 0,1ml);
• Alça de Drigalski (alça de vidro);
• Incubação e contagem das colônias;
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• Superfície de meio de cultura seca;
Contagem em pour plate
• Adiciona volume conhecido da cultura (0,1- 1ml) em placa
de Petri estéril;
• Adição meio com ágar fundido;
• Mistura- movimentos suaves da placa sobre a superfície
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• Mistura- movimentos suaves da placa sobre a superfície
da mesa;
• Organismo deve suportar a temperatura de 45oC do ágar
fundido;
Observação do crescimento bacteriano
• Em meios sólidos:
• O crescimento traduz-se pelo aparecimento de colônias, isto é, aglomerados de 
células resultantes da multiplicação bacteriana a partir de um único ancestral.
• Nessas colônias devem ser averiguadas as seguintes características, principalmente 
quando observadas em placas de Petri:
- tamanho – ponta de alfinete, pequeno, médio e grande.
- cor/pigmentação – diversificadas.
- forma -circular, irregular, rizóide e em toalha.
- textura – lisa, rugosa e mucóide.
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- textura – lisa, rugosa e mucóide.
- brilho – opacas e brilhantes.
- elevação - sem relevo (achatadas), com ligeiro relevo, relevo marcado, 
convexo e mamilonadas.
- margens – inteiras, lobadas, onduladas, serradas e filamentosas.
Observação do crescimento bacteriano
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Em meios líquidos
O crescimento nos caldos pode ser apreciado por:
- turvação - fina, uniforme, floculenta.
- sedimento.
- película ou anel (crescimento à superfície)
• O crescimento das populações mede-se estimando as 
mudanças:
1) No número de células;
2) Na quantidade de algum composto das mesmas (ex: 
proteína);
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proteína);
3) Peso total seco das células; 
Existem vários métodos de contar o número de células 
ou de determinar a massa celular, adequados para 
diferentes organismos e diferentes situações.
Contagem de células viáveis
• Célula viável: “aquela que é capaz de dividir-se e dar origem a uma 
descendência”.
• Célula viável- Multiplicar repetidas vezes e originar uma colônia
visível a olho nu.
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visível a olho nu.
• Determinação de células viáveis- contagem do número de células
da amostra que é capaz de formar colônias sobre um meio sólido
adequado.
• Contagem em placa- método indireto
o Contagem em superfície
o Contagem em pour plate
Outros métodos de contagem
Contagem direta- “câmaras de contagem”
O número de bactérias é determinado em um volume fixo de cultura,
usando câmaras com áreas delimitadas.
Ex: Câmara de Newbauer
Caracterização dos Microrganismos
Outros métodos de contagem
Contagem direta- “câmaras de contagem”
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•Método rápido para conhecer número de células;
oDesvantagens: oDesvantagens: 
o Não distingue células vivas das mortas;
o Células pequenas difíceis de visualizar no microscópio;
oMétodo não adequado para baixas suspensões celulares (< 106);