Métodos de diagnósticos

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Métodos de diagnósticos
NESTA ÚLTIMA AULA, ESTUDAREMOS OS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICOS UTILIZADOS NA MEDICINA E
QUE SÃO BASEADOS NOS CONCEITOS DO SISTEMA IMUNOLÓGICO JÁ ESTUDADOS.
Reações de precipitação
Envolvem a ligação entre anticorpo (IgG) e antígeno solúvel. Após essa ligação, ocorre, lentamente, a
formação de agregados ou precipitados, os quais formam uma rede.
A reação antígeno-anticorpo pode ocorrer em soluções ou no gel.
No gel, as duas substâncias difundem-se e, ao se encontrarem, formam uma linha turva de precipitação.
Esse teste é chamado de imunodifusão.
Como esse método, é possível determinar as concentrações relativas de anticorpo ou antígeno. Para isso,
adicionam-se concentrações conhecidas dos dois componentes.
Uma variação desse método é a imunoeletroforese, que é a associação da imunodifusão e eletroforese.
Reações de aglutinação
É semelhante à reação de precipitação, porém, nessa reação, o antígeno solúvel está ligado a uma partícula
ou célula.
Após a ligação com a Ig, formam-se agregados maiores. As Igs ou anticorpos são chamados de aglutininas e
o antígeno particulado é chamado de aglutinogênio.
Esse método é utilizado para determinar a tipagem sanguínea e é também chamado de hemaglutinação.
Radioimunoensaio
Como esse método, utilizam-se marcadores radioativos presos a um antígeno. Basicamente, ocorre uma
competição entre o antígeno marcado e não marcado pelo anticorpo que está preso a uma superfície sólida.
Para determinar a quantidade de antígeno não marcado presente em alguma amostra clínica, é preciso
medir a concentração de antígeno marcado remanescente na ligação com o anticorpo e, para determinar tal
concentração, deve-se comparar o valor obtido à curva padrão que foi feita com antígenos marcados em
concentrações conhecidas.
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Ensaio imunoadsorvente ligado à enzima (ELISA)
A metodologia é semelhante ao radioimunoensaio, mas, em vez de utilizar marcadores radioativos,
utilizam-se enzimas que ficam acopladas nos anticorpos ou nos antígenos.
Após a ligação antígeno-anticorpo, adiciona-se um substrato cromogênico cuja intensidade de cor é
detectada por métodos quantitativos, como o espectrofotômetro.
Existem variações deste método, sendo que o mais utilizado é o ELISA indireto.
ELISA indireto: a superfície sólida contém o antígeno e adiciona-se o soro contendo o anticorpo primário.
Após algum tempo, a superfície é lavada para retirar o excesso do anticorpo primário; em seguida,
adiciona-se o anticorpo secundário conjugado a uma enzima. Esse anticorpo liga-se na região Fc do
anticorpo primário. Realiza-se outra lavagem para retirar o excesso e, então, adiciona-se o substrato para
formar o composto colorido.
Uma alternativa que substitui a enzima é o substrato luxogênico, que emite luz quimioluminescente. Esse
substrato torna o método mais sensível que no método cromogênico.
Western-blot
Esse método assemelha-se ao ELISA indireto, sendo que existem vários antígenos que são separados por
eletroforese e transferidos para uma fase solida, que é uma membrana de nitrocelulose.
Um antígeno ou um conjunto de antígenos de interesse são reconhecidos por um anticorpo marcado por
enzima ou por um substrato luxogênico. O resultado esperado é a formação de uma banda visível.
Agora que você já estudou esta aula, resolva os exercícios e verifique seu conhecimento. Caso
fique alguma dúvida, leve a questão ao Fórum e divida com seus colegas e professor.
EXERCÍCIOS (https://ead.uninove.br/ead/disciplinas/impressos/_g/imun40/a20ex01_imun40.pdf)
REFERÊNCIA
GOLDSBY, Richard A.; KINDT, Thomas J.; OSBORNE, Barbara A. Kuby imunologia.4. ed. Rio de Janeiro:
Revinter, 2002.
GORCZYNSKI, Reginald; STANLEY, Jacqueline. Imunologia clínica.Rio de Janeiro: Reichmann & Affonso,
2001.
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