A espectrofotometria

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A espectrofotometria é baseada na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. A chamada radiação luminosa corresponde a uma gama de comprimentos de onda que vai desde o ultravioleta ao infravermelho no espectro da radiação eletromagnética. A espectrofotometria permite-nos identificar substâncias com base no seu espectro como também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da substância. 
A absorvência da luz a cada comprimento de onda é diretamente proporcional à concentração da solução. Esta linearidade deixa de ocorrer a concentrações muito elevadas da substância, podendo nestes casos diluir previamente a amostra a medir. Com alguma frequência é necessário quantificar substâncias em misturas complexas, ou que não absorvem significativamente a luz a nenhum comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados métodos colorimétricos, o composto a quantificar é posto em contato com um reagente específico, de modo a desenvolver uma cor cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração da substância na mistura original. 
Faz-se importante ressaltar que as proteínas são compostos poliméricos complexos com alto peso molecular. Por serem formadas por aminoácidos e considerando-se que os aminoácidos aromáticos absorvem luz na região ultravioleta, as proteínas, em geral, podem ser detectadas através da absorção de luz a 270nm. No entanto, a detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações específicas com determinados reativos, os quais originam substâncias coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação. Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto que foi utilizado no experimento, o qual é baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino com proteínas e peptídeos. As ligações peptídicas das proteínas reagem com os íons, em meio alcalino, formando um complexo de coloração violeta que é proporcional ao teor das Proteínas no meio. 
Sabemos que para quantificar espectrofotometricamente uma substância é necessário saber o valor de. Para isso é necessário preparar uma série de soluções do composto a quantificar, de concentração conhecida, fazê-las contatar com o reagente e medir as absorvências ao comprimento de onda adequado. Assim, podemos fazer corresponder uma absorvência medida, a uma concentração de substância na solução a analisar, obtendo deste modo, uma curva de calibração, o que será apresentado no presente relatório.