1 Titulação de aminoácidos G1

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Titulação de aminoácidos 
1) Introdução 
As moléculas biológicas mais abundantes e com papel mais diversificado 
nos seres vivos são as proteínas, desde o controle do metabolismo por ação 
enzimática até sinalização hormonal. Estas proteínas são constituídas pela 
ligação peptídica entre vários aminoácidos que interferem na solubilidade e 
carga da molécula. 
Os aminoácidos por sua vez possuem fórmula geral, um agrupamento 
amino, um grupo carboxila, um hidrogênio e diferem-se apenas pelo radical 
ligados ao carbono α. 
DESENHO 
Em meio aquoso os aminoácidos apresentam-se como íon dipolar, ou seja, 
o grupo amino protonado (-NH3+) e o grupo carboxila desprotonado (-COO-) 
coexistem na solução e por isso possuem característica anfiprótica. 
A titulação é caracterizada pela adição ou remoção lenta de prótons, 
possibilitando determinar os valores de PK dos grupos ionizáveis, o ponto 
isoelétrico da molécula bem como os pontos de tamponamento máximo de 
cada aminoácido. 
O sistema tampão ocorre pelo fato dos grupos amino e carboxila 
comportarem como base e ácido fraco respectivamente, assim inicia um 
equilíbrio entre duas reações reversíveis em que a concentração de doador e 
receptor de prótons é equivalente, portanto a adição de H+ ou OH- pouco altera 
o valor de PH na faixa tamponada. A capacidade tamponante máxima é obtida 
quando o PH possui o mesmo valor do PK tanto do grupo carboxila quanto do 
grupo amino. 
 
2) Objetivo 
Analisar a propriedade anfipática de aminoácidos e, por meio de titulação 
potenciométrica determinar valores de pk de cada grupo ionizável e ponto 
isoelétrico da molécula. 
3) Materiais e Reagentes 
 
3.1) Materiais 
 PHmetro; 
 Barra magnética; 
 Béquer de 250 ml; 
 Pipeta graduada; 
 Bureta; 
 Agitador. 
 
3.2) Reagentes 
 Glicina 0,3% (p/v); 
 Asparagina 0,6% (p/v); 
 Alanina 0,36% (p/v); 
 Lisina 0,73% (p/v); 
 HCl 5M; 
 NaOH 0,5M. 
 
4) Procedimento 
Inicialmente transferiu-se 100 ml de solução de Lisina cloridrato (0,73% p/v) 
para o béquer de 250 ml. Adicionou, com auxilio da pipeta, 3,0 ml de HCl 5M e 
uma barra magnética levando o béquer ao agitador e foi acoplado o eletrodo do 
phmetro no sistema acima. 
Em seguida prosseguiu com a titulação de Lisina utilizando uma bureta com 
NaOH 0,5M, acrescentando uma quantidade fixa de 0,5 ml por adição, de 
modo que permita o acompanhamento da variação do valor de PH em cada 
instante. Os outros aminoácidos receberam o mesmo tratamento e também 
serão analisados. 
5) Resultados e Discussões 
Com os valores obtidos no procedimento experimental foram feitos gráficos 
para facilitar a visualização dos valores de pk e ponto isoelétrico (Pi) 
possibilitando evidenciar fórmulas estruturais e carga líquida em cada estado 
de ionização. 
Gly 
 
 
 
 
 
0
2
4
6
8
10
12
14
0 10 20 30 40 50 60
pH
Volume (mL)
Titulação da glicina
Asn 
 
Ala 
 
 
 
 
 
 
 
 
0
2
4
6
8
10
12
14
0
2
,2
4
,1
6
,3 8
9
,9
1
1
,6 1
4
1
6
1
8
,3
2
0
,2 2
2
2
4
2
5
,5 2
8
2
9
,9
3
1
,7
3
3
,5
3
5
,5
3
7
,5
3
9
,5 4
1
p
H
Volume de NaOH
Titulação da Asparagina
 
Lys 
 
6) Conclusão 
Os valores obtidos experimentalmente estão próximos do esperado de 
acordo com a teoria, contudo os dados diferem com os da literatura pela 
diferença da concentração das amostras analisadas, possíveis contaminações 
de vidrarias ou mesmo grau de pureza das amostras. 
O método de titulação potenciométrica mostrou-se eficaz na determinação 
de valores de PK dos pontos tamponantes inclusive dos aminoácidos que 
possuem cadeia lateral ionizável e também possibilita indicar a carga líquida 
em cada estado de ionização. 
 
7) Bibliografia 
 Fundamentos de Bioquímica: A vida em nível molecular. 2ª Edição. 
Donald Voet; Judith G. Voet; Charlotte W. Pratt 
 Princípios de Bioquímica. 4ª Edição. Lehninger; David L. Nelson; 
Michael M. Cox 
0
2
4
6
8
10
12
14
0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0 45,0 50,0
p
H
 d
a 
so
lu
çã
o
Volume de NaOH (mL) 
Titulação da Lisina