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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 
Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal 
Curso de Agronomia---- Disciplina de Bioquímica I 
AULA PRÁTICA – Curva de Titulação dos aminoácidos 
 
Introdução 
Quando um aminoácido é titulado, sua curva de titulação indica a reação de cada grupo funcional 
com o íon hidrogênio. 
Tomamos como exemplo o aminoácido alanina. Se partirmos de pH bem ácido (em torno de 1) as 
moléculas desse aminoácido se apresentarão sob a forma catiônica mostrada na figura abaixo. Nessa 
forma iônica todos os grupos que podem receber hidrogênio estão ligados esse átomo. 
Se formos adicionando gradativamente quantidade pequenas de NaOH sobre a solução de alanina, 
medindo a cada adição o pH e se construirmos um gráfico relacionando o pH da solução em função do 
número de equivalente de OH adicionados, obteremos uma curva como três regiões definidas: AB, BC e 
CD, conforme demonstrado na figura 1. Essas regiões representam as transformações iônicas que a 
molécula de alanina pode sofrer pela alteração do pH a que são submetidas a partir da adição de 
equivalentes em OH adicionados a um meio extremamente ácido. 
 
Figura 1 – Curva de Titulação 
da alanina – mostrando as 
formas iônicas do aminoácido e 
os valores de pKa dos grupos 
ionizáveis e pI do aminoácido. 
pK1 = 2,35 
pK2 = 9,69 
pI = 6,02 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
A região AB apresenta uma região de tamponamento e um ponto de inflexão onde encontraremos 
50% da alanina totalmente protonada e 50% de alanina sem o próton do grupo carboxila, o pH nesse ponto 
representa o pK1 do aminoácido. 
Na região BC pode ser observado o ponto de inflexão em pH = 6,02 que representa o ponto 
isoelétrico (pI) do aminoácido. Nesse ponto 100% das moléculas de alanina encontram-se sem o próton da 
carboxila, portanto pI é o pH onde a carga elétrica da molécula é nula. 
Continuando a adição do NaOH, encontraremos uma nova região CD com uma área de e um novo 
ponto de inflexão (pK2), onde 50% da alanina encontram-se sem o próton do grupo carboxila e sem o próton 
do grupo amina, portanto na forma aniônica, com carga elétrica negativa. A titulação é finalizada quando 
toda a alanina (100%) encontra-se totalmente sem próton nos dois grupamentos ionizáveis da molécula 
(amina e carboxila). 
A titulação de um aminoácido permite encontrar os pKa’s e o seu ponto isoelétrico, o que é 
característico de cada molécula. A determinação da forma iônica dos aminoácidos é importante em 
processos técnicos de separação e purificação dessas moléculas. Além disso, a forma iônica de um 
aminoácido é fundamental para a estrutura e atividade biológica das proteínas (polímeros de aminoácidos), 
principalmente aqueles aminoácidos que possuem grupo da cadeia lateral ionizável, além do grupamento 
amino e carboxila descritos acima. 
 
 Objetivo 
 Construir a curva de titulação e determinar o pK1, o pK2 e o ponto isoelétrico (pI) do aminoácido Glicina. 
 
 
 
A 
B 
C 
D 
Material 
 1 pHmetro (um por bancada – dois grupos compartilharão) 
 1 agitador magnético (um por bancada – dois grupos compartilharão) 
 Papel absorvente macio para limpar o eletrodo de pH. 
 1 barra magnética para agitação 
 1 pisseta com água deionizada. 
 1 frasco para descarte da água de lavagem do eletrodo. 
 1 becker de 50 mL para receber a solução de glicina e ser titulada. 
 1 pipeta de 20 mL e pipetador. 
 1 pipetador automático de 1,000 µL. 
 1 caixa com ponteiras para pipetas automáticas de 1.000 µL. 
 1 frasco contendo solução de glicina 0,02 M. 
 1 frasco contendo 1 mL de ácido clorídrico 1 M. 
 1 frasco contendo 50 mL de NaOH 0,1 M. 
 Indicador de pH 
 
Procedimento 
1. Colocar a barra magnética em um becker de 50 mL. 
2. Utilizando a pipeta de 20 mL, transferir 20 mL da solução de glicina para o becker de 50 mL (contendo a 
barra). 
3. Colocar o becker sobre o agitador magnético e regular a velocidade da barra magnética (não muito 
forte). 
4. Adicionar 1 mL de HCl para que a glicina assuma sua forma totalmente protonada (acida) e cinco gotas 
do indicador (vermelho de metila ou azul de bromotimol) 
5. Limpar a sonda de pH com água deionizada. 
6. Colocar a sonda de pH no becker. CUIDAR PARA NÃO BATER A SONDA NA BARRA EM 
MOVIMENTO. 
7. Anotar o valor do pH 
8. Adicionar 1 mL de NaOH 0,1 M, esperar misturar e medir o pH. 
9. Anotar em uma tabela o valor pH em função do volume de NAOH adicionando. 
10. Repetir o item anterior até que o pH chegue ao valor de 12. 
11. Antes de descartar a solução voltar o pH dela para a neutralidade (6,5 a 7,5) pela adição de acido 
clorídrico. 
 
Bibliografia 
 Mastroeni, M e Gern Regina.M.M – Bioquímica Práticas adaptadas São Paulo, Ed Atheneu, 2008. 
 Cambell MK. Bioquímica. 3ª ed. Porto Alegre: Artmed, 2000. 
 
Relatório deve ser elaborado considerando os itens abaixo 
1 - Introdução (descrever o que é uma curva de titulação de aminoácidos ou um ácido fraco, a importância 
de se conhecer as formas iônicas de uma molécula de aminoácido e a classificação do aminoácido Glicina 
descrevendo quantos e quais grupamentos ionizáveis essa molécula possui). Descrever o uso dos 
indicadores de pH. 
2 – Objetivo (já descrito nesse protocolo) 
3 – Metodologia (descrever resumidamente o material usado e o procedimento da aula pratica) 
4 – Resultado e Discussão – descrever os resultados obtidos através da construção de uma tabela 
relacionando o pH observado após o volume de NaOH adicionado. 
 A partir dessa tabela (obtida na aula) construa o gráfico da titulação da glicina (volume de NaOH 
usado no eixo x e pH observado no eixo y). 
 Correlacione a cor da solução dada pelo indicador durante a titulação 
 Usando o gráfico construído determine os valores de pK1 e pK2. Coloque na figura as formas iônicas 
em cada região do gráfico construído. 
 Faça uma tabela dos valores observados e compare os valores da literatura (olhe no livro de 
bioquímica em tabelas que descrevem as características dos aminoácidos). Os valores observados 
e os da literatura ficaram próximos? 
 Calcule o pI usando a regra matemática e os dados de pK obtidos na aula, compare com o pI 
informado na literatura. 
 Conclua se seu grupo conseguiu construir a curva de titulação da glicina de modo adequado para 
que fosse possível calcular os valores de pK1, o pK2 e o ponto isoelétrico (pI) do aminoácido Glicina. 
Para que deve ser usado o indicador e porque. 
5 – Referências bibliográficas (citar as fontes de consulta para esse relatório usando regras da ABNT, se 
não souberem favor ir à biblioteca e consultar um profissional).