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Estudo Dirigido – Introdução ao Metabolismo, Glicólise e Fermantação 1. Uma via metabólica hipotética de três etapas apresenta os intermediários W, X, Y e Z as enzimas A, B e C. Deduza a ordem das etapas enzimáticas, com base nas informações: A) Um inibidor da enzima B provoca um acúmulo de Z. B) Um mutante desprovido da enzima A necessita da presença de Y no meio de cultura para o seu crescimento. C) Um inibidor da enzima C provoca o acúmulo de W,Y,Z z B w A Y C X 2 Responder as questões relativas ao mapa metabólico simplificado seguinte sobre a degradação de nutrientes: a) Qual a finalidade biológica dos processos descritos no mapa? Obtenção de energia na forma de ATP, necessários para o funcionamento do organismo. b) Quais compostos são aceptores de hidrogênio? NAD E FAD c) Quais os compostos necessários para a conversão da forma reduzidas das coenzimas na forma oxidada? O2, ADP e pi d) Descrever a função das coenzimas e do oxigênio As coenzimas tem como função carregar elétrons e catalisam o processo de obtenção de energia no metabolismo. O oxigênio tem como função a oxidação de compostos do metabolismo e atuar como aceptor final de elétrons. 3. As leveduras fermentam glicose a etanol. A adição de bissulfito de sódio (NaHSO3) a uma cultura de leveduras interfere nesse prcesso, pois este sal complexa-se com a acetaldeído, formando um composto estável que não é substrato para as enzimas da levedura. A levedura é capaz de sobreviver na presença de excesso de NaHSO3? Por que? A levedura não seria capaz de sobreviver ao excesso de NaHSO3, pois a reação com o acetaldeido forma um composto que não é substrato para as enzimas, dessa forma, as leveduras não conseguiriam reduzir o NAD+ a NADH, tornando impossível o geração de ATP 4. Glicose marcada com 14C (radioativo) em C-1 é incubada com as enzimas da glicólise e os cofatores necessários. Qual o percentual de moléculas de Piruvato formadas que possuem 14C? Explique. O percentual de moléculas de piruvato formado será 50%, pois o C-1 marcado com carbono radioativo sofre duas fosfolirações é quebrado e forma 1 DHAP e um GAP, ou seja duas moléculas de C-3. O DHAP é transportado pela enzima TIM, formando 2 GAP, mas só um com carbono radioativo. Essas duas moléculas continuam na via glicolitica até a formação de 2 piruvatos, mas só 1 com carbono marcado. 5.O que são vias catabólicas e anabólicas? O que ocorre em cada uma dessas vias em termos de síntese de ATP e óxido-redução de coenzimas? Catabolismo: processo pelo qual os nutrientes e os constituintes celulares são degradados para gerar energia e matéria prima. Anabolismo: processo no qual as biomoléculas são sintetizadas a partir de componentes mais simples. As vias anabólicas requerem energia, necessita-se de quebra de ATP e oxidação das coenzimas, já o catabolismo libera energia conservada no ATP e nas coenzimas reduzidas. 6. Como a compartimentalização que ocorre em células eucariontes controla o metabolismo? A compartimentalização controla o metabolismo de modo que o piruvato ao passar do citosol para o interior da mitocôndria é oxidadado de descarboxilado sendo convertido em Acetil coA e essa conversão causa redução de cofatores (NAD+ em NADH) o que influencia diretamente na glicólise pois diminui os aceptores de H que por sua vez,diminui a síntese de BPG, diminuindo a síntese de ATP. A compartimentalização permite um grau maior de organização celular e controle do metabolismo, ou seja: contribui para que se possa determinar em que local e em que momento cada reação deve ocorrer no interior de cada célula. 7. O que significa ΔG’0? Quais os parâmetros são fixos e quais seus valores? ΔG’º significa variação de energia livre em condições padrões em meio fisiológico. Os parâmetros são: ΔG’º= ΔG + RT lnQ Onde em condições padrões: T: 25ºC R: 0,082 L atm, (ΔG < 0), a reação ocorre espontaneamente em qualquer temperatura. ΔG = 0, o sistema reativo está em equilíbrio. ΔG > 0, a reação não é espontânea. 8. Como a reação de síntese de ATP que é termodinamicamente desfavorável pode ocorrer nas células? Como as enzimas tornam estas reações possíveis? A síntese de ATP que é termodinamicamente desfavorável pode ocorrer nas células porque é acoplado a varias reações espontâneas com intermediários, esses que são as enzimas (catalisam a reação dimuindo a energia de ativação) 9. Por que a hidrólise de ATP envolve uma grande variação de energia livre? A hidrolise de ATP envolve grande variação de energia livre pois a separação de um dos grupos fosfatos (causada peça h2o) do resto da molécula reduz a repulsão eletrostática do ATP, assim dimuindo muito a energia livre do ADP (produto) ou A hidrolise de ATP envolve grande variação de energia livre pelos seguintes processos: Separação de um dos grupos fosfato do restante da molécula e consequente redução da repulsão eletrostática. O HPO4 é estabilizado pela formação de várias formas de ressonância que não são possíveis no ATP. O produto de hidrólise ioniza-se prontamente liberando H+ para o meio. A concentração dos produtos de hidrólise do ATP é muito inferior aos valores e equilíbrio e a lei da ação das massas favorece a reação de hidrólise 10. Qual o papel de NAD+/NADP+ nas reações enzimáticas que participam? O papel de NAD+/NADP+ é oxidalão da molécula orgânica para produção de ATP Exercícios sobre aula de Bioenergética 6. A molécula de ATP possui 3 grupos fosforil ligados a uma ribose e adenina. Os 3 grupos são susceptíveis a ataque nucleofílico? Qual a transferência que ocorre no ataque de cada grupo fosforil e qual produto é gerado (ADP, AMP e Pi)? 8. Por que as flavoproteínas são mais versáteis que as que as desidrogenases que utilizam NAD+? Exercícios Glicólise, vias afluentes e fermentação 1. Em qual compartimento celular ocorre a glicólise? Ocorre no citosol. 2. Explique resumidamente a fase preparatória e de pagamento da glicólise e porque elas tem esse nome A fase preparatória prepara uma molécula de glicose para formas duas de C3. Ocorrem processos irreversíveis: fosforilação da glicose pela enzima hexoquinase e fosforilação da flutose-6-fosfato pela enzima fosfofrutocinase. Esse processo gasta ATP, por isso o nome. Já a fase de pagamento tem esse nome, porque ela sintetiza 4ATP, onde ‘’pagam’’ os ATP usados na fazendo anterior, ficando com um saldo livre de ATP. Nela ocorre a fosfoliraçao oxidativa do glicealdeido-6-fosfato em piruvato e formação acoplada de ATP e NADH 3. Qual etapa se dá efetivamente a quebra da glicose? Primeira etapa na fase de preparatória. 4. Quais os possíveis destinos catabólicos do piruvato na célula. Fermentação láctica e alcoólica(citoplasma) e respiração oxidativa (mitocôndria) 5. Qual a importância da fosforilação da glicose intracelular? Qual enzima catalisa esta reação? A fosforilação da glicose é importante para gerar energia as células, a enzima que catalisa a reação é a hexocinase. 6. Qual a importância do íon Mg + na glicólise? Dê um exemplo de enzima em que Mg + é um cofator. O magnésio é muito importante porque ele age como substrato e ativa algumas enzimas, sem ele ocorre uma redução na atividade das enzimas. Exemplos deenzima em que Mg + é um cofato: Fosfogliceratocinase e piruvato quinase 7. Por que apesar da reação catalisada pela fosfo-hexose-isomerase ocorrer facilmente em ambos os sentidos temos a formação contínua de frutose-6- fosfato no citoplasma da célula? Porque apesar da reação catalisada pela fosfo-hexose-isomerase ser reversível e ocorrer nos dois sentidos, temos a continua formação de frutose-6- fosfato pois na etapa seguinte ela é consumida em um processo irreversível de fosfoliração para formar Frutose31,63bifosfato (FBP)_ 8. Explique como a di-hidroxiacetona-fosfato é consumida na glicólise. Atraves de um processo reversível catalisado pela enzima triose3fosfato3 isomerase a di-hidroxiacetona-fosfato é consumida para formar fosfato gliceraldeído-3-fosfato (GAP). 9. Por que a etapa preparatória da glicólise consome duas moléculas de ATP? Porque nos processos de fosforilação requerem muita energia para acontecer. 10. Se tanto o gliceraldeído-6-fosfato quanto o piruvato possuem 3C de onde vem a energia para a síntese de 4 ATPs na etapa de pagamento da glicólise? E por que o saldo de ATP na glicólise é só de ATPs se são sintetizados 4? A energia dos primeiros ATP sintetizado vem da transferência de grupo fosfato do 1,3-bifosfoglicerato para o ADP gerando ATP. Pois é um processo que libera muita energia. Já os outros vem da Transferência do grupo fosfato do fosfoenolpiruvato para o ADP, A reação é altamente exergônica, fornecendo energia livre suficiente Para promover A síntese de ATP. O saldo de ATP é porque foram produzido 4 e consumidos . 11. Qual a fonte de fosfato na síntese de 1,3-bifosfoglicerato a partir de gliceraldeído-3-fosfato? Fosfato inorgânico 12. Quais os possíveis destinos do NADH formado na glicólise? Fermentação láctica e alcoólica(citoplasma) e respiração oxidativa (mitocôndria) 13. O que ocorreria na via glicolítica se não houvesse a oxidação de NADH pela célula? Explique qual a importância da oxidação de NADH para a via glicolítica. 14. Explique o acoplamento energético na conversão de gliceraldeído-3-fosfato a 3-fosfoglicerato. 15. Somente a glicose é usada na glicólise. Explique como polissacarídeos e dissacarídeos geram substratos para a via glicolítica. Enzimas hidrolícas intesTInais clivam poli e dissacarídeos ingeridos! 17. Qual o principal objetivo da fermentação? A fermentação possibilita a oxidação de NADH em NAD+ pela formação de produtos finais reduzidos como lactato e etanol . Para o processo de extrair energia (como ATP) sem consumir oxigênio nem variar as concentrações de NAD+ ou NADH. 18. Cite um exemplo de fermentação lática e um exemplo de fermentação alcoólica Láctica: iogurte alcoólica: cerveja
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