Extração DNA

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Universidade Federal de Pernambuco – UFPE
Centro de Biociências – CB
Departamento de Genética 
Disciplina: Introdução à Genética
Professores: Jaqueline Azevêdo e Tercílio Calsa
Protocolo Aula Prática: Isolamento de DNA
Isolamento de DNA – Fonte : Banana
Material: 
1. Banana;
2. Batedor;
3. Detergente;
4. Sal;
5. Álcool;
6. Filtro de café;
7. Becker;
8. bastão de vidro;
Procedimento:
1. Amassar bem ½ banana até formar uma mistura homogênea;
2. Preparar a solução de Lise de Membranas:
	- 150 ml água aquecida ~ 60oC;
	- 15 ml (~1 colher de sopa) de detergente neutro;
	- 3g ( ~1 colher café) de sal;
Homogeneizar a mistura até que o sal se dissolva completamente.
3. Adicionar a solução de lise à banana amassada;
4. Homogeneizar;
5. Filtrar a mistura;
6. Ao líquido filtrado adicionar etanol gelado a uma proporção de 1:1. Ex.: Se o filtrado for 10 ml adicionar 10ml de álcool;
7. Observar a separação de fases;
8. DNA condensado é o sobrenadante;
Universidade Federal de Pernambuco – UFPE
Centro de Biociências – CB
Departamento de Genética 
Disciplina: Introdução à Genética
Professores: Jaqueline Azevêdo e Tercílio Calsa
Isolamento de DNA – Fonte : Mucosa Bucal
Material: 
1. Copo descartável;
2. Cotonete;
3. Solução de sacarose a 3% (100ml de água + 1 colher de chá de açúcar);
4. Tubo cônico;
5. Etanol absoluto gelado;
7. Banho à 60 ºC;
8. Caixa de isopor com gelo;
9. Detergente neutro diluído a 25%;
Procedimento:
1. Higienizar a boca fazendo bochechos com água ou se possível escovando os dentes;
2. Delicadamente raspar a mucosa bucal com o cotonete;
3. Colocar aproximadamente 15mL da solução de sacarose na boca;
4. Bochecar vigorosamente por 45 segundos;
5. Recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartável. Mergulhar o cotonete usado na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho. 
6.Transferir apenas 5 mL do volume obtido no passo 5 para um tubo cônico e adicionar uma pitada de sal de cozinha; 
7. Homogenizar invertendo o tubo;
8. Adicionar 500 μL (0.5ml) do detergente neutro diluído;
9. Homogeneizar cuidadosamente;
10. Aquecer a 60 ºC por 10 min;
11. Resfriar por 5 min no gelo;
12. Adicionar álcool gelado pelas bordas do tubo lentamente, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura/altura;
13. O DNA, insolúvel no álcool, ficará visível nesta etapa.