Imunodifusa o em gel de a gar

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Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) 

A imunodifusão em gel de ágar (IDGA), ou simplesmente imunodifusão, é uma 
técnica de detecção de anticorpos. A técnica baseia-se na formação de complexos 
antígeno-anticorpo que se insolubilizam e precipitam no gel, podendo ser 
visualizados sob a forma de linhas de precipitação. É uma técnica simples, barata, 
de boa sensibilidade e tem sido amplamente utilizada sobretudo para testes de 
“screening”ou triagem. 
Princípios do teste 
Antígenos e anticorpos semeados em um suporte composto de ágar e eletrólitos 
difundem-se (migram) radialmente no gel em velocidades diferentes, dependendo de 
sua solubilidade e massa molecular. Quando os anticorpos que estão migrando 
encontram os antígenos específicos (que migram na direção oposta), ocorre a 
reação antígeno-anticorpo. Os complexos antígeno-anticorpos formados 
insolubilizam-se e precipitam, formando linhas de precipitação no gel que são 
visíveis a olho nu. A reação somente ocorre quando anticorpos ligam-se aos 
antígenos específicos. Anticorpos e/ou antígenos que migram sem reagir (pela 
ausência do antígeno/anticorpo correspondente) seguem solúveis e não precipitam, 
não sendo visualizados. 

O teste é geralmente realizado em placas de Petri plásticas ou de vidro, onde uma 
solução aquecida de agarose é semeada. O gel resfria-se e forma uma camada 
sólida de ágar com 0,2 a 0,4 cm de espessura.. Nessa camada de ágar, efetua-se 
pequenas perfurações (cavidades) onde seis cavidades estão dispostas radialmente 
ao redor de uma cavidade central. Na cavidade central coloca-se o antígeno e nas 
cavidades periféricas coloca-se as amostras de soro a ser testado. Incuba-se em 
câmara umida por 24 a 72 horas. O antígeno, a partir da cavidade central, difunde-
se radialmente e eventualmente atinge a zona de migração radial dos anticorpos, 
que também difundem-se radialmente a partir das cavidades periféricas. A ligação 
antígeno-anticorpo específico resulta em insolubilização e formação das linhas de 
precipitação no local onde os complexos formaram-se. Se as concentrações de 
antígeno e anticorpos forem correspondentes, a linha de precipitação estará situada 
na distância média entre as cavidades. Quando há excesso de antígeno ou 
anticorpo, a banda de precipitação formada estará próximo do anticorpo ou 
antígeno respectivamente. A partir de antígenos conhecidos e soro controle 
sabidamente positivos se faz o controle da reatividade das bandas. A leitura é 
geralmente feita após 48 a 72 h de incubação, em sala escura, utillizando-se um 
feixe de luz estreito que atravessa a placa de baixo para cima, observando-se a 
reação contra o fundo escuro. Quando as bandas de precipitação forem nítidas, a 
prova é considerada válida, do contrário, as amostras são testadas novamente. As 
amostras são consideradas positivas quando a linha de precipitação entre a amostra 
e o antígeno forma identidade com a linha de soro hiperimune, unindo-se a essa 
formando uma linha curva contínua. As amostras são consideradas negativas 
quando não há formação de linha de precipitação entre o poço da amostra e o 
antígeno com identidade com a linha do soro controle. A linha de precipitação 
formada pelo soro controle positivo, ao invés de curvar-se em sua extremidade, 
continua-se para dentro do poço da amostra testada. 
Propriedades e limitações 

 

Devido à sua simplicidade, essa técnica pode ser realizada em qualquer laboratório, 
sem necessidade de equipamento ou infraestrutura especiais. O seu custo é baixo e 
possui sensibilidade aceitável. As suas maiores restrições referem-se exatamente a 
problemas de sensibilidade, especificidade (reações inespecíficas), repetibilidade e 
tempo para a obtenção dos resultados. Mesmo assim, é amplamente utilizada para o 
diagnóstico sorológico de várias infecções víricas, incluindo vírus da Leucose 
Bovina (VLB), Anemia Infecciosa Equina (EIAV), Língua Azul (BTV), Doença de 
Gumboro, Bronquite infecciosa, Febre Aftosa, entre outras. É particularmente útil 
para inquéritos sorológicos de grandes populações de animais, sobretudo pela sua 
praticidade e custo baixo.