MÉTODO DE FOLCH

Prévia do material em texto

DETERMINAÇÃO DE LIPÍDIOS PELO MÉTODO DE FOLCH
DOCENTE: THÁRCIA KIARA 
DISCENTES: HOSANA MEDEIROS
 MARIANA MORGANA
 SAMMARA MACIEL 
 THAYNÃ CRYSLEY
 VALQUIRIA SILVA
 YGOR NÓBREGA
METODO DE FOLCH
O método consiste em submeter à amostra a extração com uma mistura de clorofórmio e metanol (2:1) seguida de evaporação do solvente em estufa.
Características:
•A extração é a frio - para amostras que serão avaliadas quanto ao nível de peroxidação e perfil de ácidos graxos
•Pode ser usado para qualquer tipo de amostra (seca ou úmida)
MATERIAL
Béquers 100 ou 50 mLs; Frascos de vidro; Funil de vidro; Provetas de 100 ml; Pipeta graduadas de 10 mLs e volumétrica de 0,5 mLs (para o sulfato); Espátula, papel de filtro, pinça, papel, balança, agitador, dessecador estufa.
REAGENTES
CLOROFÓRMIO METANOL 2:1
SULFATO DE SÓDIO 1,5%
PROCEDIMENTOS – PASSO A PASSO
Colocar os béqueres em estufa 24 horas antes, deixar esfriar em dessecador e pesar (tara). Pesar 2g da amostra em béquer de 50 ou 100 mL; Adicionar 30 mL da mistura clorofórmio: metanol (2:1) e adicionar parte desta mistura com a amostra no béquer. 
Transferir, lavando o béquer com a mistura, o conteúdo para um recipiente de vidro fundo; Agitar a mistura amostra + solvente por 2 a 3 minutos. Filtrar o conteúdo do recipiente em papel de filtro em proveta de 100 mL. 
PROCEDIMENTOS – PASSO A PASSO
Lavar as paredes do recipiente com mais 10 mL da mistura clorofórmio metanol e filtrar juntando ao filtrado da mistura. Tampar o sistema. Anotar o volume final do extrato filtrado da proveta.
Adicionar 20% do volume final do extrato filtrado de sulfato de sódio a 1,5%.
 EX: 20% volume final 34 mLs = 6,8 mLs
 Durante o processo de lavagem, vai ser perdida alguma percentagem de material lipídico.
PROCEDIMENTOS – PASSO A PASSO
Agitar e deixar separar as fases, mantendo a proveta fechada. A fase superior deve ficar com aproximadamente 40% e a inferior com 60%. 
Metanol + Sulfato de sódio
Lipídeos + Clorofórmio (Evaporado)
PROCEDIMENTOS – PASSO A PASSO
Anotar o volume da fase inferior e descartar a fase superior succionando com pipeta graduada. Tomar uma alíquota de 5 mL do extrato (fase inferior) com pipeta volumétrica e transferir para o béquer previamente tarado. 
 
Colocar o béquer em estufa a 105°C para evaporar a mistura de solventes com cuidado para não queimar. Aguardar resfriamento em dessecador, pesar o béquer mais o resíduo de gordura.
CÁLCULO:
Fórmula: 
 P1 x Vb x 100
 Va x P2
P1= Peso do Béquer final – inicial
P2= Peso da amostra
Va= 5mL
Vb= Volume da porcentagem do filtrado
REFERÊNCIAS
FOLCH, J .; LESS, M.; STANLEY, S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. Journal of Biological C hemistry