método de determinação de proteínas lowry

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Método de determinação de proteínas de Lowry
Introdução
Foi uma das primeiras determinações colorimétricas de proteína, realizada a partir de 1922. O método de Lowry apresenta limite de detecção de 0,7 mg.L-1 e leituras de absorbância em comprimento de onda 750 nm.
Princípios do método
O método que atualmente conhecemos como de Lowry , para a determinação de proteínas totais, foi originalmente proposto por Wu, H.; J. Biol. Chem., em 1922, sendo esta a metodologia mais utilizada para a determinação de proteínas. 
O princípio deste método baseia se em uma mistura contendo molibdato, tungstato e ácido fosfórico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma redução quando reage com proteínas, na presença de cobre(II), e produz um composto com absorçao máxima em 750 nm.
Aplicações
A principal vantagem do método de Lowry é a sua alta sensibilidade e, por isto, tem sido utilizado para a determinação da concentração de proteínas totais em diversos meios.
Sargent, M. G.; Anal. Biochem. 1987, 163, 476, propôs uma modificação no método de Lowry que possibilitou o aumento da sensibilidade em cinquenta vezes. Tal modificação está baseada no fato de que o verde de malaquita reage com o azul de molibdato produzido no método de Lowry e o produto desta reação absorve fortemente em 690 nm aumentando a sensibilidade do método de Lowry.
Devido ao seu extenso uso, o método de Lowry e cols.10 tem sido utilizado em diversos tipos de equipamentos automatizados.
Apesar do método de Lowry e cols.10 apresentar uma grande sensibilidade para proteínas, o mesmo possui algumas desvantagens.
Desvantagens do método de lowry
O método de lowry possui algumas desvantagens, as quais são: sujeito a muitos interferentes, apresentar longo tempo de análise, possuir absortividade específica altamente variável para diferentes proteínas, e seguir a Lei de Beer-Lambert apenas numa pequena faixa de concentração de proteínas.
Várias modificações no método de Lowry têm sido propostas para resolver os problemas deste método.
Podemos citar: Aquecimento da amostra;
 adição de tri-1,4-dimercaptobutanodiol, 3 minutos após a adição do reagente Folin-Ciocalteau;
um rígido controle do pH.
 
Desvantagens:
É lento.
Destrói a amostra.
Operações múltiplas (muita manipulação).
Necessita de curva padrão com proteína conhecida.
Necessita período de incubação entre a adição dos reagentes.
A intensidade da cor pode variar com a composição da proteína hidrolisada.
Vantagens:
É de 10 a 20 vezes mais sensível que a determinação por UV, e 100 vezes mais sensível que o método por biureto.
É bastante específico, pois são poucas as substâncias potencialmente interferentes, sendo a sacarose, em alta concentração, uma das poucas.