extração e purificação de Carboidratos

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Biotecnologia	
  
Purificação	
  de	
  moléculas	
  
IBF-­‐020	
  
	
  
Extração	
  e	
  purificação	
  de	
  
carboidratos	
  
Isolamento de mono, di e polissacarídeos            
•  Diversas	
  fontes:	
  microorganismos	
  e	
  vegetais	
  
•  Estudo	
  da	
  função	
  ou	
  quanAficação	
  da	
  produção	
  de	
  determinados	
  
políssacarídeos	
  
•  Análise	
  de	
  alimentos	
  (objeAvando:	
  rotulagem	
  nutricional,	
  padronização	
  e	
  
qualidade	
  alimentar	
  	
  
Métodos de separação e detecção dos açucares            
Ø  Cromatografia	
  em	
  camada	
  delgada	
  –	
  CCD	
  
•  Usado	
  em	
  análise	
  de	
  roAna,	
  rápida	
  e	
  simultânea	
  de	
  diversas	
  amostras	
  
•  	
  IdenAficação	
  e	
  quanAficação	
  de	
  carboidratos	
  de	
  melaço	
  
	
  
Métodos de detecção dos açucares            
Ø  Cromatografia	
  gasosa	
  –GC	
  
•  Requer	
  amostras	
  voláteis	
  e	
  em	
  geral	
  é	
  necessário	
  derivaAzar	
  
	
  	
  	
  
	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  
Ø  Cromatografia	
  líquida	
  de	
  alta	
  eficiênica	
  –	
  HPLC	
  
Troca	
  iônica	
  	
  CHO	
  (-­‐OH)=	
  pKa	
  12-­‐14	
  =	
  solução	
  básica	
  
	
  Fase	
  reversa	
  	
  
•  	
  Rápido,	
  específico,	
  sensível	
  e	
  preciso!	
  
	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  
HPLC	
  e	
  GC	
  	
   NRM	
  	
  	
  	
  	
  e	
  	
  	
  	
  MS	
  	
  
Ressonância	
  magnéAca	
  
nuclear	
  
Espectrometria	
  
de	
  massas	
  
Carboidratos derivatizados           
Sililação	
  =	
  Trime@lsilil	
  como	
  grupo	
  subs@tuinte	
  
Métodos de detecção dos açucares            
Ø  Métodos	
  químicos	
  clássicos	
  	
  (análise	
  de	
  açucar	
  total	
  ou	
  redutor)	
  
	
  
•  Titulométricos:	
  EDTA	
  e	
  Lane-­‐Enyon/	
  Luff-­‐School)	
  
•  Gravimétricos:	
  Musson-­‐Walker	
  
•  Espectofotométricos:	
  ADNS,	
  Antrona,	
  Fenol-­‐sulfúrico,	
  Somogyi-­‐Nelson	
  
•  EnzimáAcos:	
  Mensuração	
  da	
  aAvidade	
  de	
  uma	
  dada	
  enzima	
  substrato-­‐específica