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UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS MEDICINA VETERINÁRIA GMV 114 – MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA STAPHYLOCOCCUS https://vimeo.com/112518683 Gênero de bactéria Gram positiva 37 espécies diferentes Pele e mucosa dos animais Introdução 2 -FILO: Firmicutes -CLASSE: Bacili -Ordem: Bacillales -Família: Micrococcaceae - Gênero: Staphylococcus TAXONOMIA Fonte: https://i0.wp.com/www.easymicrobiology.com/wp-content/uploads/2018/01/staph-epidermidis-tsa.jpg 3 HISTÓRIA Fonte:https://www.googleimagens.com.br/search?q=alexander+ogston&source Fonte:https://www.wikipidea.com.br/search?q=alexander+ogston&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwivxpqgv 4 IMPORTÂNCIA Fonte: https://www.istockphoto.com/br/vetor/estafilococos-staphylococcus-aureus-causa-doen%C3%A7as-infogr%C3%A1ficos-ilustra%C3%A7%C3%A3o-vetorial-gm861387240-142659277 5 MORFOLOGIA E FISIOLOGIA Fonte: radij.xyz Fonte: Terral.agr.br Fonte: docsity.com Adesão ao epitélio dos tecidos ▫ Adesinas •Disseminação pelo organismo ▫ Lipases e proteases ▫ Estafiloquinase ▫ Hialuronidase ou fator de propagação PROPRIEDADES ANTIGÊNICAS Fonte: pt.slideshare.net/biomedunifil Fuga do sistema imune ▫ Estruturais Proteína A Cápsula Peptídeoglicano Enzimas Coagulase Catalase Betalactamases Penicilinase PROPRIEDADES ANTIGÊNICAS Fonte: slideplayer.com.br PROPRIEDADES ANTIGÊNICAS Fonte: albericomarcosbioifes.wordpress.com PROPRIEDADES ANTIGÊNICAS Fonte: pt.slideshare.net Proteína Fibronectina ligante : FnbA e FnbB São importantes na fase inicial da adesão Fator de agrupamento (Clfs do ingles Clumping factor) ClfA -> presente em todas as fases de crescimento ClfB -> presente apenas na fase exponencial FATORES DE VIRULÊNCIA FATORES DE VIRULÊNCIA Toxinas hemolíticas Alfa toxina: lesa diversas células Beta toxina: degrada esfingomielina Gama toxina Delta toxina Enterotoxina estafilocócica (SEs) 23 sorotipos conhecidos Resistentes a tripsina, pepsina e a altas temperaturas FATORES DE VIRULÊNCIA FATORES DE VIRULÊNCIA Fonte: app.uff.br Superantígeno SEs sao fortes ativadores de linfócitos T FATORES DE VIRULÊNCIA Fonte:slideplayer.com.br/slide/375928 Toxina da Síndrome do Choque Tóxico Toxina Gastrointestinal Superantígeno Atividade biológica semelhante as SEs Sinais tóxicos Febre, hipotensao, exantema Pode afetar sistema muscular, hepático, renal, hematopoeitico e nervoso FATORES DE VIRULÊNCIA Toxinas esfoliativas A e B FATORES DE VIRULÊNCIA Biofilme Confere protecao frente ao sistema imune do hospedeiro e atividade de agentes microbianos Formado por polissacarídeos hidratados FATORES DE VIRULÊNCIA Fonte: Scielo.br Coleta de material biológico e produtos alimentícios MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Fonte: oswaldo cruz Fonte: analiticanet.com.br Fonte: kasvi.com.br Fonte: diarioonline.com.br Cultura: Meio sólido Agar Sangue MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Fonte: www.pinterest.com Fonte:biomedicinaemicro.blogspot.com Seletivo – 7,5 a 10% NaCL Estria composta Estufa a 35ºC por 24h S. aureus fermenta o manitol Agar manitol - sal Estria composta em Agar Sangue S. aureus produz hemólise Coloração Gram: MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Fonte: biomedicinaemacao.com.br Fonte: microbiologyinpictures.com Staphyloccocus sp. GRAM POSITIVO Testes de Identificação MÉTODOS DIAGNÓSTICOS REAÇÃO ENZIMÁTICA CATALASE COAGULASE AGAR BAIRD - PARKER RESISTÊNCIA ANTIBIOTICIDA RESISTÊNCIA A NOVOBIOCINA Teste da Catalase MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Fonte: umconviteabiomedicina.blogspot.com Staphyloccocus sp. CATALASE POSITIVA Teste da Coagulase MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Staphyloccocus aureus Staphyloccocus epidermidis Staphyloccocus saprophyticus COAGULASE POSITIVA COAGULASE NEGATIVA Fonte: microbiologiabrasil.blogspot.com Fonte: microbiolyinpictures.com 24 Agar Baird - Parker : MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Estria composta Incubado a 35ºC por 48h Staphyloccocus sp. formam halos de lipólise e proteólise e reduzem o telurito à telúrio resultando numa coloração negra Fonte: microbiologyinpictures.com Resistência a Antibioticida: MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Resistência a Novobiocina Procedimento: • Semear como antibiograma em ágar MüellerHinton; • Colocar um disco de novobiocina 5 µg/ml; • Incubar a 35ºC por 24 h. Fonte: pt.slideshare.net TESTE S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus Coloração Gram roxa roxa roxa Catalase + + + Coagulase + - - Crescimento no Manitol + + + Fermentação do Manitol + _ + Suscetibilidade a Novobiocina S S R MÉTODOS DIAGNÓSTICOS PCR Artigo Publicado em 2015, no periódico do Journal of Clinical Laboratory Analysis: MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Differentiation Between Staphylococcus Aureus and Coagulase‐Negative Staphylococcus Species by Real‐Time PCR Including Detection of Methicillin Resistants in Comparison to Conventional Microbiology Testing Objetivo: - PCR para diferenciar rapidamente Staphyloccocus e identificar o gene mecA num cenário clínico Material e Métodos: - No método convencional: amostras semeadas em Agar Sangue; Identificação por: coloração gram, catalase e coagulase. - Para o PCR: extração do DNA bacteriano, utilização de primers e sondas específicos -Segunda análise de PCR: sonda específica para gene mecA MÉTODOS DIAGNÓSTICOS Resultados: - PCR em tempo real identificou S. aureus em mais amostras que o método convencional -26 amostras positivas para S.aureus por PCR, que foram negativas pelo método convencional Conclusão: Além da alta sensibilidade da PCR, o tempo entre a coleta e o resultado final é superior em comparação ao método ainda utilizado na maioria dos laboratórios. Para cultura, os resultados ficam prontos de 24 a 72h; já pela PCR esse tempo pode ser diminuído para 5h, ou menos. MÉTODOS DIAGNÓSTICOS PINTALHÃO, Mariana; SILVA, A. Ana: Staphylococcus . Porto, 10 de outubro de 2006. Disponível em: https://users.med.up.pt/~cc04-10/Microdesgravadas/4_Staphylococcus.pdf DINIZ, Gallupo Claudio: Bactérias Gram positivas de grande relevância odontológica. Disponivel em :https://slideplayer.com.br/slide/50505/ Acosta, C. Adzel; COSTA, M. Mateus ; JUNIOR, P. W. José; MOTA, A. Rinaldo: Fatores de virulencia de Staphilococcus aureus. Pernanbuco,2017. SANTOS , V. Marcos; TOMAZI, Tiago :O que conhecemos sobre o Staphylococcus aureus: patologia e epidemiologia?. Pirassununga-SP , 16 de outubro de 2013. Disponivel em: https://www.milkpoint.com.br/colunas/marco-veiga-dos-santos/o-que-conhecemos-sobre-o-staphylococcus-aureus-patologia-e-epidemiologia-205356n.aspx BIBLIOGRAFIA Mundim, G. J., et al. Avaliação da presença de Staphylococcus aureusnos leitos do Centro de Terapia Intensiva do Hospital Escola da Faculdade de Medicina do Triângulo Mineiro, em relação à posição no colchão antes e após a limpeza. Rev. Soc. Bras. Med. Trop. vol.36 no.6 Uberaba Nov./Dec. 2003. AVILA, J. Mario. Beta-lactamases: Sua importância na resistência bacteriana . Campos- SP. Disonivel em: http://www.icb.usp.br/bmm/mariojac/index.php?option=com_content&view=article&id=47&Itemid=57&lang=br ZAVERI, Kual; PATNALA , Kiranmayi. Prediction of promiscuous epitope studies of spa antigen in staphylococcus aureus: an insight on peptide-based vaccine . India, 20 de maio de 2016. Disponive em: https://www.researchgate.net/publication/304784961_Prediction_of_promiscuous_epitope_studies_of_SPA_Antigen_in_Staphylococcus_Aureus_An_insight_on_peptide-based_vaccine BIBLIOGRAFIA Klaschik, S., Lehmann, L. E., Steinhagen, F., Book, M., Molitor, E., Hoeft, A. and Stueber, F. (2015), Differentiation Between Staphylococcus Aureus and Coagulase-Negative Staphylococcus Species by Real-Time PCR Including Detection of Methicillin Resistantsin Comparison to Conventional Microbiology Testing. J. Clin. Lab. Anal., 29: 122–128. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1002/jcla.21739 Staphylococcus aureus: resistência a antibióticos. http://www.minutobiomedicina.com.br/postagens/2015/02/21/staphylococcus-aureus-resistencia-a-antibioticos/ Staphyloccocus sp http://www.oocities.org/veterinariobr/materias/bacteriologia/staphylococcus2.htm BIBLIOGRAFIA Câmara, Bruno. Identificação de espécies de “Staphyloccocus“ comparando PCR e métodos convencionais. https://www.biomedicinapadrao.com.br/2015/04/diferenciacao-de-especies-de.html BIBLIOGRAFIA DÚVIDAS??