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Prof. Dr. Alexandre Dias
UNIDADE II
Métodos e Técnicas
em Análises Clínicas
O exame laboratorial tem por finalidades...
 Apoiar o corpo clínico no diagnóstico de enfermidades.
 Eficiência, qualidade e confiabilidade.
Introdução
Introdução
Setor Exemplos de Exames
Hematologia Clínica e 
Hemostasia
Hemograma (eritrograma, leucograma e plaquetograma), Provas 
de coagulação, tipagem ABO e sistema RH, provas de Coombs 
direto e indireto, contagem de reticulócitos, prova de falcização, 
curva de resistência osmótica.
Bioquímica Clínica e 
Gasometria
Gasometria, dosagens de: glicemia, amilase, lipase, ácido úrico, 
proteínas totais e frações, perfil renal (ureia, creatinina, clearence 
de creatinina, proteinúrias), provas AST, ALT, FAL, GGT, 
bilirrubinas total e frações, cálcio iônico, ionograma, colesterol 
total e frações, enzimas cardíacas.
Microbiologia Clínica
Culturas de bactérias e fungos, provas de antibioticoterapia 
(antibiograma), baciloscopia (pesquisa de BK), provas de 
identificação e classificação bacteriana, hemocultura.
Imunologia Clínica, 
Hormônios e Sorologia
Prova para sífilis (VDRL), hormônios sexuais masculinos e 
femininos, hormônios tireoidianos, provas de autoimunidade, 
sorologias para diferentes doenças e agentes, dentre outros.
Uroanálise e Fluidos 
Corporais
Dosagem de proteinúria em urina de 24 horas, urina tipo I, análise 
dos líquidos cavitários (liquor, líquido acético, líquido pleural, 
líquido sinovial).
Parasitologia Clínica Provas protoparasitológicas, sangue oculto nas fezes.
Outros testes Pesquisa molecular, cariotipagem, FISH, Arrays, MLPA.
Relação dos principais 
setores do LAC e exemplos 
de exames realizados nas 
áreas técnicas
Fonte: adaptado de: livro-texto.
 Coloração de GRAM
Os testes microbiológicos manuais e a automação diagnóstica
Fonte: adaptado de: livro-texto.
Aplicação de 
cristal violeta 
(corante púrpura)
Aplicação 
de iodo 
(mordente)
Lavagem
com álcool
(descoloração)
Aplicação de
safranina
(contracorante)
Gram-positiva
Gram-negativa
Álcool
Safranina
Iodo
Cristal
violeta
LEGENDA
Bastonete
(gram-negativo)
Cocos (gram-positivos)
(b)
5 µmLM(a)
 Coloração de ZN
Os testes microbiológicos manuais e a automação diagnóstica
Fonte: adaptado de: 
https://publica.ciar.ufg.br/ebooks/iptsp/bacteriologia_basica/artigo_1.html
CÉLULAS
CORAM-SE DE
AZUL
BACTÉRIAS DO GÊNERO
Mycobacterium spp. CORAM-SE 
DE VERMELHO
 Meio de cultura é o material nutritivo preparado para o desenvolvimento de microrganismos. 
Algumas bactérias podem crescer normalmente em qualquer tipo de meio, enquanto outras 
exigem meio de cultura específico. Existem também aquelas que não se desenvolvem em 
nenhum tipo de meio de cultura já desenvolvido.
Os meios de cultura na microbiologia
 Meios de cultura
Os principais meios de cultura!
Meio de cultura Finalidade
Ágar Chocolate
Isolamento de Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e 
Moraxella spp. em amostras clínicas.
Ágar MacConkey
É um meio seletivo (pela presença de sais biliares, cristal de violeta e NaCl) 
para isolamento de bacilos gram-negativos, enterobactérias e não 
fermentadores.
Ágar Mueller-Hünton
Utilizado para realização do teste de avaliação da resistência aos 
antimicrobianos pelo método de difusão em disco (Kirby-Bauer) para 
bactérias de crescimento rápido.
Ágar Sangue
Meio utilizado para a maioria dos materiais clínicos que permite o crescimento 
de grande parte dos patógenos não fastidiosos ou que requerem incubação 
especial. Permite a verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e 
Staphylococcus spp.
Ágar Cystine 
Lactose Electrolyte 
Deficient (Cled)
Usado para isolamento e identificação de microrganismos presentes em 
amostra de urina. A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus
spp.
Ágar Salmonella-
Shigella (SS)
Meio para isolamento de Salmonella sp. e Shigella sp. Permite diferenciar 
bactérias lactose positivas e negativas, além de detectar a produção de H2S.
Ágar Sabouraud (AS)
Usado para verificar o crescimento de espécies de Candida e fungos 
filamentosos.
Fonte: adaptado de livro-texto.
Exemplo de algoritmo para cultura de urina
Fonte: adaptado de: livro-texto.
Homogeneizar a amostra
sem centrifugar
Fazer Semeadura
Semiquantitativa
Imergir alça calibrada
de 0,01 ou 0,001 mL
Semear em Água Cled
Incubar em Estufa
Bacteriológica a
35 + 1 ºC entre
18-24 horas (Contagem)
Semear em Água Mac
Conckey
 Maldi-Tof: o material biológico a ser examinado é colocado em uma matriz sólida polimérica 
e irradiado por raios laser de nitrogênio que vaporizam e ionizam as moléculas, as quais são 
aspiradas, e o detector mede o tempo da chegada do material a esse dispositivo. O gráfico 
resultante com picos específicos é analisado por um software, indicando padrões específicos 
(“impressão digital”) do microrganismo específico.
 Sistema WalkAway: pode processar várias amostras (96 painéis) simultaneamente. As 
amostras são incubadas com reagentes e analisadas por colorimetria e fluorimetria. Podem, 
assim, trabalhar simultaneamente com todo tipo de painel (cromogênicos e fluorogênicos), 
fornecendo até detecção de resistência emergente precisa para os agentes patogênicos 
mais difíceis, como ESBL, Visa, VRSA e MRSA.
 Sistema AutoSCAN-4: usado para identificação bacteriana e 
suscetibilidade antimicrobiana a antibióticos, inclusive para 
espécies de crescimento lento. Em seus painéis são 
verificadas concentrações inibitórias mínimas (MICs) diretas e 
não identificadas (ID).
Automação na microbiologia
A coloração pelo método de Giemsa consiste resumidamente nas etapas descritas a seguir:
1. Fixar o material com álcool metílico.
2. Cobrir o esfregaço com o corante de Giemsa (preparar na hora uma mistura com uma ou 
duas gotas da solução estoque Giemsa para uma gota de água destilada) por 
20 a 30 minutos.
3. Secar ao ar ou sob o calor da estufa e 
examinar diretamente sob lente de 
imersão homogênea e montar previamente 
em bálsamo do Canadá.
Micologia no LAC
Fonte: livro-texto.
Sobre os meios de cultura, assinale a alternativa errada:
a) O ágar sangue é utilizado para a maioria dos materiais clínicos que permite o crescimento 
de grande parte dos patógenos não fastidiosos ou que requerem incubação especial. 
Permite a verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
b) O ágar chocolate é utilizado para o isolamento de Haemophilus spp., Neisseria spp., 
Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. em amostras clínicas.
c) O ágar CLED não pode ser utilizado para urocultura.
d) O ágar MacConkey é um meio seletivo (pela presença de 
sais biliares, cristal de violeta e NaCl) para isolamento de 
bacilos gram-negativos, enterobactérias e não 
fermentadores.
e) O ágar Sabouraud é usado para verificar o crescimento de 
espécies de Candida e fungos filamentosos.
Interatividade
Sobre os meios de cultura, assinale a alternativa errada:
a) O ágar sangue é utilizado para a maioria dos materiais clínicos que permite o crescimento 
de grande parte dos patógenos não fastidiosos ou que requerem incubação especial. 
Permite a verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
b) O ágar chocolate é utilizado para o isolamento de Haemophilus spp., Neisseria spp., 
Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. em amostras clínicas.
c) O ágar CLED não pode ser utilizado para urocultura.
d) O ágar MacConkey é um meio seletivo (pela presença de 
sais biliares, cristal de violeta e NaCl) para isolamento de 
bacilos gram-negativos, enterobactérias e não 
fermentadores.
e) O ágar Sabouraud é usado para verificar o crescimento de 
espécies de Candida e fungos filamentosos.
Resposta
Introdução
 São vários os métodos imunológicos utilizados no laboratório clínico. De forma resumida, 
eles podem ser classificados em métodos marcados e não marcados. Eles quantificam 
antígenos eanticorpos apenas pela formação dos complexos imunes. São eles: as 
imunoprecipitações, as aglutinações e os ensaios líticos. Já os métodos marcados têm um 
antígeno ou anticorpo “marcado”, ou seja, que estará conjugado com uma molécula, o que o 
torna capaz de aumentar a sensibilidade e a visualização das reações.
 As técnicas marcadas são mais modernas e conseguem 
detectar menores concentrações do analito nas amostras. Os 
conjugados utilizados podem ser enzimas, isótopos radioativos 
ou fluoróforos. Os métodos são nomeados de ensaio 
imunoenzimático (Elisa), radioimunoensaio (RIA) e 
imunofluorescência (IFA), respectivamente.
Os métodos diagnósticos na imunologia clínica
 Imunoprecipitação
MTAC em Imunologia – Efeito Pró-zona e Pós-zona
Fonte: Livro texto Concentração do analito
Excesso
Ac
Ac ≡ Ag
Excesso
Ag
Im
u
n
o
p
re
c
ip
it
a
ç
ã
o
Fonte: adaptado de: livro-texto.
 Imunodifusão
MTAC em Imunologia
Antígeno
Imunocomplexo
Anticorpo + gel
Fonte: adaptado de: livro-texto.
 ELISA
MTAC em Imunologia
Substrato
Substrato
Anticorpo
primário
Direto
Ag Ag
Indireto
Anticorpo
primário
Anticorpo
secundário
Substrato
Anticorpo
secundário
Anticorpo
primárioAg
Anticorpo
de captura Sanduíche
Fonte: adaptado de: livro-texto.
 Imunofluorescência
MTAC em Imunologia
Anticorpo conjugado
com fluoresceína
Célula infectada
Imunofluorescência direta
Antígeno
viral
Fonte: adaptado de: livro-texto.
Automação na Imunologia e no estado hormonal
Fonte: livro-texto.
Imunologia – sorologia na hepatite B
Fonte: adaptado de: 
www.scielo.br/j/ress/a/tdp58
qj9X5WC6VfbQ3pxJpS
HBsAga
(agudo)
HBsAga
(crônico)
anti-HBsb
anti-HBc totalc
HBeAgd (crônico)
anti-HBc IgMf
HBeAgd
(agudo)
DNA 
viral
(agudo)
anti-HBee
DNA viral (crônico)
Fonte: adaptado de: Sablon & Shapiro, 2005.
Notas: a) HBsAg – antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBV); b) Anti-HBs – anticorpo 
contra o antígeno de superfície do HBV; c) Anti-HBc Total – anticorpo das classes IgM e IgG contra 
o antígeno do núcleo do HBV; d) HBeAg – antígeno “e” do HBV; e) Anti-HBe – anticorpo contra o 
antígeno “e” do HBV; f) Anti-HBc IgM – anticorpo da classe IgM contra o antígeno do núcleo do HBV.
Figura 1 – Marcadores séricos da infecção causada pelo vírus da hepatite B de 
acordo com o tempo de evolução da infecção
Imunologia – sorologia na hepatite B
Marcador Interpretação 
HBsAga
Marcador de infecção atual pelo vírus da hepatite B (HBV), seja aguda ou 
crônica. Detectado na fase inicial da infecção aguda. Sua persistência por 
mais de 6 meses sinaliza para a infecção crônica.
HBV-
DNAb
Marcador de intensidade da replicação viral. Presente na fase inicial da 
infecção aguda, podendo ser detectado antes do HBsAg. Na infecção crônica, 
sua presença é detectável na maioria dos casos. Sua quantificação é útil na 
classificação da forma clínica da infecção crônica.
HBeAgc
Marcador da replicação viral. Sua detecção indica elevada replicação e 
infecciosidade do HBV. Está presente na fase aguda e em algumas 
formas crônicas.
Anti-HBed
O início da detecção coincide com o declínio da concentração de HBeAg. Sua 
presença indica redução da replicação viral. Algumas formas replicativas da 
doença crônica apresentam esse anticorpo na ausência do HBeAg.
Anti-HBc 
IgMe
Marcador de infecção recente pelo HBV. Presente durante a fase aguda da 
infecção. Eventualmente, pode ser detectado na reagudização de casos 
crônicos.
Anti-HBc 
IgGf
O início da detecção acontece durante a fase aguda da infecção e persiste 
por tempo indeterminado. Sua presença indica infecção vigente (quando o 
HBsAg está positivo) ou contato prévio com o HBV.
Anti-HBsg
Indica imunidade contra o HBV. Presente após o desaparecimento do HBsAg 
(cura funcional) ou em resposta à vacina.
Fonte: adaptado de: Liang, 2009.
Notas: a) HBsAg – antígeno de superfície do 
HBV; b) HBV-DNA – ácido nucleico viral; c) 
HBeAg – antígeno “e” do HBV; d) Anti-HBe –
anticorpo contra o antígeno “e” do HBV; e) 
Anti-HBc IgM – anticorpo da classe IgM 
contra o antígeno do núcleo do HBV; f) Anti-
HBc IgG – anticorpo IgG contra o antígeno do 
núcleo do HBV; g) Anti-HBs – anticorpo 
contra o antígeno de superfície do HBV.
Figura 2 – Interpretação dos 
marcadores da infecção pelo 
vírus da hepatite B
Fonte: adaptado de: 
https://www.scielo.br/j/ress/a/tdp58qj9X5WC6VfbQ3px
JpS/?format=pdf&lang=pt
Sobre o efeito pró-zona, assinale a alternativa correta:
a) O excesso de Ag é o responsável pela efeito pró-zona.
b) O excesso de Ac é o responsável pelo efeito pró-zona.
c) Os efeitos pró-zona e pós-zona são equivalentes e pontuam as mesmas variantes.
d) O efeito pró-zona não interfere no resultado do teste imunológico.
e) Todas as alternativas estão corretas.
Interatividade
Sobre o efeito pró-zona, assinale a alternativa correta:
a) O excesso de Ag é o responsável pela efeito pró-zona.
b) O excesso de Ac é o responsável pelo efeito pró-zona.
c) Os efeitos pró-zona e pós-zona são equivalentes e pontuam as mesmas variantes.
d) O efeito pró-zona não interfere no resultado do teste imunológico.
e) Todas as alternativas estão corretas.
Resposta
 Ensaios: 
 Mais confiáveis, específicos e sensíveis. 
 Diagnósticos mais precoces: 
 Melhoria das intervenções terapêuticas.
 Métodos diagnósticos:
 Bioensaios.
 Ensaios bioquímicos.
 Imunoensaios.
 Espectrometria de massas.
Os testes hormonais e o diagnóstico laboratorial
 Testosterona – andrógeno mais potente e abundante – secretada pelas células de 
Leydig dos testículos.
 Funções: diferenciação da genitália externa masculina na vida fetal; maturação sexual de 
meninos na puberdade; início e manutenção da espermatogênese; controle do 
comportamento sexual masculino na vida adulta.
 Estrógenos – estradiol – estrógeno mais potente e abundante – secretado pelas células da 
granulosa dos folículos ovarianos e também pelo corpo lúteo.
 Funções: indução de caracteres sexuais secundários em meninas na puberdade; 
crescimento do útero; proliferação do endométrio na primeira metade do ciclo menstrual.
 Progestágenos – progesterona – principal progestágeno 
secretado pelo corpo lúteo dos ovários e pela placenta.
 Funções: indução da secreção e decidualização do 
endométrio; implantação do ovo e manutenção da gravidez; 
inibição das contrações uterinas; desenvolvimento 
glandular das mamas.
Hormônios sexuais
 Ensaio imunofluorométrico não competitivo com dois anticorpos monoclonais anti-βLH.
Método AutoDelfia
Fonte: https://rh.perkinelmer.com/products/autodelfia-
immunoassay-system/
Fonte: https://www.perkinelmer.com.br/product/autodelfia-hafp-
free-hcg-kit-b067-101
 Pequena glândula: + - 5 cm de diâmetro – localização: pescoço. 
 Não pode ser visualizada normalmente e dificilmente palpada. 
 Exceção: aumento de volume (bócio). 
 Secreta os hormônios tireoidianos.
 Necessário: iodo.
Hormônios tireoidianos
 Hipertireoidismo:
 Tireoide se encontra hiperativa.
 Produz excesso de hormônios. 
Etiologia:
 Reações imunológicas (possível causa da doença de Graves).
 Tireoidite (inflamação da tireoide) – período de hipertireoidismo. Nódulos tireoidianos 
tóxicos (adenomas) – podem produzir hormônios tireoidianos em grandes quantidades.
Hormônios tireoidianos
 Hipotireoidismo
 Tireoide se encontra hipoativa – a produção de hormônio tireoidiano é baixa 
(muito grave: mixedema). 
 Tireoidite de Hashimoto:
 Causa mais comum de hipotireoidismo.
 A tireoide frequentemente se encontra aumentada e o hipotireoidismo comumente se 
manifesta anos mais tarde, pois as áreas funcionais da glândula são destruídas 
gradualmente. 
 Segunda causa mais comum: tratamento do hipertireoidismo.
Hormônios tireoidianos
 TSH
 T4L
 Tireoglobulina
 Ac Antitireoglobulina
 Ac AntiTPO
 TRAB
Testes tireoidianos
 TSH e T4L – rotina na avaliação da função 
tireoidiana e no seguimentodo tratamento do 
hiper e do hipotireoidismo. 
 T4L 
 Não é suscetível às alterações nas proteínas 
transportadoras de hormônio tireoidiano e possui uma 
variação intraindividual muito pequena. 
 T3 
 Baixa acurácia para o diagnóstico de hipotireoidismo, 
já que a conversão aumentada de T4 para T3 mantém 
concentração sérica de T3 nos limites normais até o 
hipotireoidismo se tornar grave. 
Complete a sentença e assinale a alternativa correta: “O hormônio TSH geralmente está 
_____________ no hipotireoidismo, como resposta à _____________ do T4L”.
a) Elevado / diminuição.
b) Baixo / elevação.
c) Baixo / diminuição.
d) Elevado / elevação.
e) Normal / diminuição.
Interatividade
Complete a sentença e assinale a alternativa correta: “O hormônio TSH geralmente está 
_____________ no hipotireoidismo, como resposta à _____________ do T4L”.
a) Elevado / diminuição.
b) Baixo / elevação.
c) Baixo / diminuição.
d) Elevado / elevação.
e) Normal / diminuição.
Resposta
A parasitologia e os testes laboratoriais
A área da parasitologia clínica é o setor do serviço de laboratório clínico que atua 
no estudo e na investigação de doenças infectoparasitárias, na identificação de 
vermes helmínticos e protozoários. De maneira muito eficiente, a parasitologia 
contribui para o desenvolvimento de políticas públicas de saneamento básico 
e no tratamento de doenças ditas evitáveis.
Métodos manuais em parasitologia
Fonte: adaptado de: livro-texto.
Exame Princípio Principais indicações 
Hoffman, Pons e 
Janer e Lutz 
Sedimentação 
espontânea 
Ovos e larvas de helmintos, cistos de 
protozoários 
Blagg (MIFC), 
Ritchie e 
Coprotest
Sedimentação 
por 
centrifugação 
Ovos e larvas de helmintos, cistos e oocistos 
de protozoários
Willis 
Flutuação 
espontânea 
Ovos leves (Ancilostomídeos) 
Faust 
Flutuação e 
centrifugação
Cistos e oocistos de protozoários, ovos leves 
(Ancilostomídeos) 
Baermann-Morais 
e Rugai 
Cultura Larvas (Strongyloides) 
Kato-Katz Filtração Ovos de helmintos 
Graham (fita 
adesiva) 
Adesão Enterobius vermicularis,Taenia sp 
Automação na parasitologia
O sistema DAPI é capaz de fazer a varredura 
automatizada da lâmina e detectar 
os parasitos mostrados na tela do computador. 
Técnicas computacionais separaram o fundo de 
imagens de componentes, dentre parasitos e 
impurezas, para verificar e decidir se é uma 
impureza ou uma entre 15 espécies parasitárias.
Fonte: Bio-Brasil
Gota espessa no diagnóstico da malária
Fonte: https://www.fleury.com.br/medico/manuais-diagnosticos/alteracoes-hematologicas-
em-processos-infecciosos/alteracoes-hematologicas-nas-infeccoes-parasitarias
O teste para malária – gota espessa – é realizado rotineiramente em qual material biológico?
a) Fezes.
b) Urina.
c) Liquor.
d) Sangue.
e) Pele.
Interatividade
O teste para malária – gota espessa – é realizado rotineiramente em qual material biológico?
a) Fezes.
b) Urina.
c) Liquor.
d) Sangue.
e) Pele.
Resposta
ATÉ A PRÓXIMA!