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Triciana Gonçalves da Silva goncalves.triciana@gmail.com triciana.silva@uva.br BIOPROCESSOS Aplicação industrial de reações ou vias biológicas mediadas por células vivas e inteiras de animais, microrganismos, plantas ou enzimas isoladas sobre condições controladas para a biotransformação de matérias primas em produtos. BIOPROCESSOS Aplicação industrial de reações ou vias biológicas mediadas por células vivas e inteiras de animais, microrganismos, plantas ou enzimas isoladas sobre condições controladas para a biotransformação de matérias primas em produtos. Bioprocesso também pode ocorrer sem resultar em um produto direto – biorremediação: processo pelo qual organismos vivos (microrganismos, fungos, plantas, algas verdes) ou suas enzimas são utilizados para reduzir ou remover - remediar - contaminações no ambiente. Matéria prima Matéria prima Transformação mediada por agentes biológicos Matéria prima Transformação mediada por agentes biológicos Purificação e/ou isolamento do produto de interesse Aplicação dos bioprocessos Produção de biocombustíveis Aplicação dos bioprocessos Produção de biofármacos Aplicação dos bioprocessos Produção de vacinas Aplicação dos bioprocessos Produção de anticorpos monoclonais Aplicação dos bioprocessos Indústria alimentícia Aplicação dos bioprocessos Transgênicos Aplicação dos bioprocessos Agroindústria Aplicação dos bioprocessos Biorremediação Etapas fundamentais do processo produtivo A aplicação dos bioprocessos, seja em qualquer área, está organizada em 3 etapas principais: Processos upstream Transformação Processos downstream Etapas fundamentais do processo produtivo Determinação e preparo das condições ambientais ideais para o processo Escolha da matéria prima Seleção do microrganismo Preparo do inócuo Etapas Upstream Etapas fundamentais do processo produtivo Determinação e preparo das condições ambientais ideais para o processo Biorreatores e biorreação Escolha da matéria prima Seleção do microrganismo Preparo do inócuo Etapas Upstream Etapas fundamentais do processo produtivo Determinação e preparo das condições ambientais ideais para o processo Estratégia de recuperação do produto Tratamento dos resíduos Escolha da matéria prima Seleção do microrganismo Preparo do inócuo Etapas Upstream Etapas Downstream Biorreatores e biorreação Etapas fundamentais do processo produtivo Etapas upstream * Seleção do agente biológico Mais difundidos: bactérias e fungos • Características desejadas (agente biológico ideal): - não ser patogênico - capaz de converter rapidamente o substrato em produto com altos rendimentos, conduzindo a altos valores de produtividade - permitir o acúmulo do produto no meio, de forma a se ter elevada concentração do produto no meio de cultura sem sofrer inibição em virtude deste acúmulo - não produzir substâncias incompatíveis com o produto sem produzir proteases extracelulares Etapas upstream - apresentar constância quanto ao comportamento fisiológico Para a célula há sempre a tendência de otimizar o crescimento, em detrimento da síntese do produto, motivo pelo qual não basta verificar se a célula cresce, mas se ela continua a acumular o produto de maneira eficaz. Além disso, durante a proliferação da célula há sempre chances de mutações naturais - estabilidade sob condições ambientais extremas (elevada pressão osmótica do meio, elevada temperatura, elevada força iônica) - ser tolerante e resistente a substâncias tóxicas, que podem ser geradas no processo de tratamento da matéria-prima ou encontradas em resíduos e efluentes - atenção especial à escolha de acordo com a “maquinaria bioquímica” da espécie selecionada procariotos X eucariotos Etapas upstream - não exigir meio de cultura dispendioso atender às necessidades nutricionais das células auxiliar no controle do processo, como é o caso de ser ligeiramente tamponado, o que evita variações drásticas do pH, ou evitar uma excessiva formação de espuma não provocar problemas na recuperação do produto os componentes devem permitir algum tempo de armazenagem, a fim de estarem disponíveis o tempo todo não causar dificuldades no tratamento final do efluente Etapas upstream * Preparo da matéria prima ou substrato a ser processado * Preparação de meio e sua esterilização * Alimentação do biorreator * Regulação de temperatura, pH e pressão * Inoculação da cultura no meio assepticamente Etapa de biorreação A etapa de biorreação é a transformação propriamente dita da matéria prima no produto de interesse mediado por agentes biológicos. Essa etapa se processa em pequena, média ou larga escala em um ambiente confinado e passível de controle das condições ambientais conhecidos com BIORREATORES. Etapa de biorreação Etapa de biorreação Dependendo da sua dimensão e do objetivo da sua utilização, os biorreatores podem ser à escala laboratorial, escala piloto ou escala industrial: - Frascos agitados (erlenmeyers): 100 – 1000 ml - Biorreatores de bancada: 1 – 30L - Biorreatores piloto: 100 – 1000L - Biorreatores industriais: 1000 – 1000000L Etapa de biorreação * Sistema não asséptico – onde não é absolutamente necessário se operar com culturas inteiramente em condições estéreis Etapa de biorreação * Sistema asséptico – as condições de esterilidade são pré-requisitos para formação do produto com sucesso Etapa de biorreação De acordo com a presença de oxigênio os biorreatores podem ser classificado em: Aeróbio – as reações biológicas ocorrem na presença de oxigênio; Anóxico – as reações biológicas ocorrem apenas na presença de oxigênio combinado, como por exemplo NO3 Anaeróbio – as reações biológicas ocorrem na ausência total de oxigênio Sendo possível também controlar variáveis ambientais, como: -temperatura; - pH; - agitação; - arejamento - disponibilidade de substrato Etapa de biorreação A função primária de um biorreator é fornecer condições ambientais adequadas ao crescimento dos microrganismos e para isso, este deve: - Ser capaz de manter-se estéril por muitos dias, trabalhar sem problemas por longos períodos e satisfazer todas as exigências legislativas de contenção ambiental -As exigências metabólicas dos microrganismos, quanto a aeração e agitação, devem ser plenamente satisfeitas, mantendo porém a integridade física destes - Controle eficiente de temperatura, pH e de gases - Um sistema de tomada de amostras à prova de contaminação do conteúdo do biorreator deve ser parte integrante do equipamento - O reator deve ter as superfícies internas polidas e todas as suas conexões, na medida do possível, devem ser soldadas e não rosqueadas Etapa de biorreação Vantagens • Alta produtividade e eficiência do processo • Melhor controle das condições de cultura • Suprimento ótimo de nutriente • Automação do processo • Mudança e adequação do meio. Desvantagens • Risco de contaminação microbiana• Resistência de algumas espécies Etapas downstream * Etapa final do processo produtivo no qual há a recuperação dos produtos gerados. A escolha das metodologias empregadas para recuperação/ purificação e isolamento do produto de interesse depende, principalmente, de: - Finalidade do uso do produto: alimentos, medicamentos, diagnóstico,... grau de pureza - localização do produto: intracelular ou secretado - natureza da molécula alvo: o meio de cultura contém elevada proporção de água, moléculas orgânicas e inorgânicas, além de metabólitos celulares que podem interagir com o produto desejado Etapas downstream Estratégia de biosseparação comumente empregada: 1. Remoção de material insolúvel (particulado). Operações comuns: filtração, centrifugação, decantação ou sedimentação. 2. Isolamento primário. Durante esta etapa a concentração de produto aumenta consideravelmente e substâncias com diferentes polaridades são separadas do produto. Operações típicas: extração por solvente, precipitação e ultrafiltração. 3. Purificação. Destina-se à remoção de impurezas como também concentração de produto. Exemplos são: a precipitação fracionada e muitos tipos de cromatografia líquida de alto desempenho. 4. Isolamento final do produto ou polimento: Esta última etapa deve fornecer o produto desejado em uma forma adequada para formulação final ou comercialização direta. As operações aqui incluem: centrifugação e subseqüente secagem de um produto cristalizado (liofilizado ou seco por spray drying). Meio de cultivo com células ou microrganismo em suspensão Clarificação (separação células/meio) Produtos intracelulares Produtos extracelulares Rompimento celular Remoção fragmentos celulares Fase sólida Sobrenadante Separação concentração de moléculas Purificação Tratamentos finais Etapas downstream * Tratamento de efluentes - Tratamento primário: remoção dos contaminantes mais facilmente separáveis (partículas com tamanho superior a 100 µm). Operações típicas: gradeamento; desarenamento e desengorduramento. -Tratamento secundário: remoção de partículas sedimentáveis, partículas suspensas menores e material solúvel, em sua maioria orgânicos. Realizada biologicamente por uma grande variedade de microrganismos, que agem muitas vezes de forma sinérgica. Esses microrganismos são usados para converter matéria orgânica em biomassa. Pelo fato de a biomassa possuir densidade ligeiramente superior a da água, sua sedimentação é possível, permitindo a sua separação do material líquido tratado. - Tratamento terciário: remoção de todos ou alguns contaminantes remanescentes. Esta etapa é muitas vezes necessária para enquadrar o efluente final às condições de qualidade exigidas para o lançamento e disposição final no ambiente, seja qual for o corpo receptor. Representação esquemática de um bioprocesso industrial genérico
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