TEC_TIPAGEM SANGUINEA

Prévia do material em texto

TÉCNICA PARA TIPAGEM SANGUÍNEA 
1- Sangue total (EDTA) + Soro 
2- 
Lavar as hemácias com solução fisiológica em tubo cônico graduado (1 ml sangue total + 5 ml salina) por 3 
minutos/2000 RPM 
3- 
Desprezar o sobrenadante com auxílio de pipeta de Pasteur. 
Ressuspender totalmente as hemácias e repetir o procedimento 3x 
Obs.: Sangue de RN (colhido do cordão umbilical) deve ser lavado 10x 
4- Preparar suspensão a 3% das hemácias lavadas (5 ml salina + 150μl papa de hemácias) 
 
Classificação Direta 
5- Identificar 5 tubos de Kahn como: A, B, AB, D e Controle Rh. 
6- 
Adicionar 1 gota do anti-soro correspondente à identificação + 1 gota (50μL) da suspensão de hemácias em 
cada tubo. 
7- Centrifugar por 1 minuto/2000RPM 
8- Agitar delicadamente para observar a reação (botão não dissolve), iniciando com A, B e AB (sistema ABO). 
9- Nos tubos onde os botões de hemácias não se desfazem indica a reação. Ex.: Botão tubo A → Tipo “A” 
10- 
Para fator Rh, observamos os tubos com anti-soro D e controle (este será sempre negativo). 
Ex.: Botão no tubo contendo anti-soro D → “Rh positivo” 
Obs.: Na classificação direta pesquisamos “antígenos” 
 
Classificação Reversa 
11- Utiliza-se suspensão de hemácias conhecidas (comercializadas) “A” e “B” 
12- Identificar 2 tubos de Kahn como RA e RB 
13- Homogeneizar a suspensão e adicionar 1 gota em cada tubo correspondente + 100μL de soro em cada tubo. 
14- Centrifugar por 1 minuto/2000 RPM → Observar a formação do botão 
15- Botão no tubo RA → Tipo “B” / Botão no tubo RB → Tipo “A” 
Obs.: Na classificação reversa pesquisamos “anticorpos” 
 
Pesquisa do “D” fraco 
16- 
Se na pesquisa do antígeno “D” (fator Rh) não houver formação de botão, é indicativo de “Rh negativo”. 
Para tal faz-se a pesquisa do “D” fraco 
17- 
Nos mesmos tubos contendo anti-soro D e anti-soro Controle, adiciona-se 1 gota de Albumina bovina e 
incuba-se em BMª 37°C por 15 minutos. 
Obs.: É indicado que se realize em duplicata (repetindo ambos os tubos). 
18- 
Lavar 3x com solução fisiológica vertendo todo o sobrenadante. 
Na última lavagem secar a boca do tubo em papel absorvente. 
19- Em cada tubo adicionar 1 gota de anti-soro Anti-Humano Blend (Anti-C3d monoclonal + Anti-IgG) 
20- Homogeneizar e centrifugar (1 min/2000RPM) 
21- 
Ressuspender delicadamente ambos os tubos observando (contra a luz) a formação de botão ou grumos no 
tubo “D” que indicará a presença do antígeno “D” fraco. 
22- Se houver reação a amostra deve ser considerada fator Rh “fracamente positivo” 
23- Colocar na observação do laudo → Exame realizado até a fase Du.