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INSTITUTO PERNAMBUCANO DE ENSINO SUPERIOR FARMÁCIA BIOQUIMICA ESTRUTURAL – RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - DETECÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS EM SOLUÇÃO POR MEIO DE REAÇÕES DE COLORAÇÃO / DESNATURAÇÃO PROTEICA ALUNAS: NAURA JANE LOPES PACHECO RECIFE – PE 2019 INTRODUÇÃO Este relatório irá apresentar resultados e observações concernentes à aula prática sobre detecção de aminoácidos e proteínas em solução por meio de reações de coloração / desnaturação proteica. As proteínas são substancias orgânicas constituídas por aminoácidos (Aa) unidos entre si, formando uma cadeia polipeptídica. Nesta aula, caracterizamos a presença de proteínas em soluções, demonstramos as reações de coloração e verificamos experimentalmente a precipitação de proteínas com e sem desnaturação. MATERIAIS E MÉTODOS Béquers; Soluções de diferentes substâncias químicas e alimentares (glicina, ovoalbumina, leite, suco, ninidrina e biureto/ solução de HCl e Etanol); Tubos de ensaio; Pinça de madeira; Bico de Bunsen; Pipetas. EXPERIMENTO 1 – DETECÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS EM SOLUÇÕES POR MEIO DE REAÇÕES DE COLORAÇÃO Procedimentos: Colocamos 1 ml das soluções de glicina(1%), ovoalbumina, leite e suco separadamente nos respetivos tubos de ensaio, posteriormente adicionamos 1 ml da solução de biureto em cada tubo e verificamos a mudança da coloração, que ficará arroxeada indicando a presença de proteínas. Em outros tubos de ensaio, colocamos novamente as quatro soluções citadas anteriormente e adicionamos 1ml de ninidrina, observamos as reações em temperatura ambiente e posteriormente com o auxílio da pinça de madeira, levamos o leite, a glicina e ovoalbumina ao bico de Bunsen aceso, retirando apenas quando aconteceu a mudança de cor. EXPERIMENTO 2 – DESNATURAÇÃO PROTEÍCA Procedimentos: Colocamos em tubos de ensaio separadamente as seguintes soluções: 2ml de ovoalbumina, 2ml de ovoalbumina com 2ml de HCl(Ácido Clorídrico) e 2ml de ovoalbumina com 2ml de etanol. Posteriormente, levamos o tubo de ensaio que continha 2ml de ovoalbumina ao bico de Buncen aceso por aproximadamente 2 minutos, verificando as reações em cada um deles. RESULTADOS E DISCUSSÕES EXPERIMENTO 1 – DETECÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS EM SOLUÇÕES POR MEIO DE REAÇÕES DE COLORAÇÃO Com este experimento, analisamos de forma qualitativa a identificação de proteínas e aminoácidos nas soluções. Através do reagente de biureto identificamos se existiam proteínas e com a solução de ninidrina(0,1%), identificamos se existiam aminoácidos livres. Estrutura do aminoácido: Reagente Biureto Podemos observar que algumas soluções não tiveram reação, como vemos nas fotos abaixo. Isso acontece porque o suco é uma solução que não tem proteína e a glicina porque é um aminoácido livre, não tem ligações. Já nas soluções de leite e ovoalbumina observamos a presença de proteína e elas reagiram ficando arroxeados. A reação do biureto é caracterizada por identificar a presença de proteínas e peptídeos com três ou mais resíduos de aminoácidos. Reagente Ninidrina Observamos que ao misturarmos as soluções com ninidrina, em temperatura ambiente, apenas a glicina reagiu. A reação de ninidrina é uma reação corada própria de aminoácidos, a ninidrina por ser um agente oxidante muito poderoso, reage com o aminoácido da cadeia, que dá origem a um composto de cor púrpura que varia de cor. Resultado de coloração com Biureto e Ninidrina, os tubos de ensaio que estão nas laterais são reações das soluções ovobulmina e leite com biureto e os centrais com ninidrina. EXPERIMENTO 2 – DESNATURAÇÃO PROTEÍCA Em três tubos de ensaio, colocamos separadamente 2ml de ovoalbumina, 2ml de ovoalbumina com 2ml de HCl e 2ml de ovoalbumina com 2ml de etanol. Observamos que as reações foram diferentes em cada um dos tubos de ensaio, sendo que apenas o tubo de ensaio contendo 2ml de ovoalbumina foi aquecido. Solução Reação 2ml de Ovoalbumina Formação de Coágulo 2ml de Ovoalbumina + 2ml de HCl Formação de anel branco 2ml de Ovoalbumina + 2ml de Etanol Formação de um precipitado DESNATURAÇÃO DE SOLUÇÕES COM O REAGENTE NINIDRINA Posteriormente aquecemos os tubos de ensaio com leite, glicina e ovoalbumina, percebendo a reação de coloração em todas elas, isso aconteceu porque se quebrou as ligações das proteínas, liberando e deixando os aminoácidos livres. A ovoalbumina foi a solução que mais demorou em reagir, pois sua proteína é mais resistente. Leite Glicina Ovoalbumina CONCLUSÃO Concluímos que as reações de coloração e precipitação de proteínas permitem a caracterização dessas pela analise de suas propriedades químicas e físicas, como ligações peptídicas, solubilidade e estrutura molecular. As reações de coloração não alteram a estrutura da proteína. E a desnaturação proteica verifica a alteração de solubilidade de proteínas em presença de solventes orgânicos.