Manual de Oftamologia veterinária

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04/05/2018
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ELISA
ELISA
• O que é ELISA?
• ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY
• Ensaio Imunoenzimático de Absorção em Fase 
Sólida
ELISA
• Detecção de anticorpos circulantes (IgG) ou 
antígenos
• Extremamente sensível e seguro 
(automatizado e fabricados kits específicos)
• Altamente sensível e específico
Principais enfermidades monitoradas por 
ELISA
-IBD/ IBDxr
- IBV 
- NDV 
- Reo
- AE 
- Mg
- Ms
-PM
-ORT
- AI
- Rev
- ALV-J
- LLAb
ELISA 
Indireto
LLAg ELISA de Captura de 
Antígeno
CAV ELISA 
Competitivo
ELISA
• Componentes:
• Antígeno
• Anticorpo
• Diluente
• Conjugado
• Substrato
• Solução stop
ELISA
• Envolve a fixação de um antígeno conhecido as 
paredes dos orifícios de uma microplaca.
• O soro suspeito é adicionado aos orifícios.
• Se o soro for positivo, o anticorpo fixa-se ao antígeno 
do orifício.
• Um preparado específico anti-anticorpo, com uma 
enzima fixada é então adicionado aos orifícios e fixa-
se ao complexo AG-AC.
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• A enzima é testada pela adição de um 
substrato que muda de cor quando reage com 
a enzima.
• Quanto maior a quantidade de enzima 
liberada, maior será a mudança de coloração, 
então, quanto maior a mudança de coloração, 
maior a quantidade de anticorpos no soro 
suspeito.
• 1º passo – acrescentar 500µl de diluente nos tubos
• 2º passo – acrescentar 1µl do soro ao diluente
• 3º passo – retirar 100µl do diluente + soro e colocar 
na placa de ELISA – espera 30 min
• 4º passo – lavar a placa por 3 vezes
• 5º passo – acrescentar 100µl do conjugado – esperar 
30 min
• 6º passo - lavar a placa por 3 vezes
• 7º passo - acrescentar 100µl do substrato – esperar 
30 min
• 8º passo - acrescentar 100µl da sol. stop – esperar 15 
min
• 9º passo – colocar na leitora
ELISA Indireto
Leitora ELISA
Densidade Óptica ODou
Razão S/P = OD amostra - CNx
CPx - CNx
Título
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ELISA
• VANTAGENS DA TÉCNICA:
• Simples e prática
• Grande número de amostras
• Reativos marcados são estáveis, sendo 
conservados por longo tempo
• Resultados rápidos (3 a 4h)
ELISA
• DESVANTAGENS:
• Custo (microplacas, kits de reagentes, leitor de 
ELISA e software)
• Diferente afinidade dos antígenos para 
aderirem às superfícies sólidas
• Não disponível para todas as doenças
ELISA - Interpretação
• Sinais clínicos de campo (desafio)
• Vacinação:
– Viva
– Oleosa
Grupos de títulos
G Título G Título G Título
0 0-396 8 7000-7999 16 24000-27999
1 397-999 9 10000-11999 17 28000-31999
2 1000-1999 10 12000-13999 18 >32000
3 2000-2999 11 14000-15999
4 3000-3999 12 16000-17999
5 4000-4999 13 18000-19999
6 5000-5999 14 20000-21999
7 6000-6999 15 22000-23999
ELISA - Interpretação
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ELISA - Diagnóstico
• Títulos
• Sinais clínicos
• Perdas produtivas
• Exames adicionais – histopatologia, PCR
ELISA – Frango de corte
• Detecção de infecção
• Monitoramento de vacinação
• Monitoramento de imunidade passiva - anticorpos
maternos
• Previsão de data de vacinação para Doença de Gumboro -
Fórmula Deventer
• Controle e erradicação de doenças (Influenza, Salmonela, 
Micoplasma, Leucose)
ELISA – Frango de corte
• Baseline esperado no abate quando se utiliza
somente vacina viva
Doença Titulo (GMT) 
IBD 2500 
NDV 500 
IBV 500 
 
 
Dados Dr. J. Witt, Instituto Deventer, Holanda
ELISA - Matrizes
• Anticorpos maternais:
- Avaliação da imunidade passiva
- Estimar de data de vacinação (Deventer)
• Monitoria de vacinação
- Avaliação da eficiência da equipe de vacinadores
- Avaliação da manutenção imunidade ativa
- Avaliação do programa de vacinação
• Detecção de desafio (análise comparativa)
ELISA - Conceitos Importantes
• Não existe um título padrão esperado universal
• Cada empresa deve ter o seu baseline
• Nem sempre é possível correlacionar título com proteção
• Sorologia mede infecção e não doença
• Existem inúmeras variáveis envolvidas na resposta imune
• Nem sempre é bom ter título alto
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ELISA
• Estabelecer um programa de monitoria padronizado e 
sistemático utilizando um número e frequencia de 
amostragem adequado
• Construir história própria para cada empresa e interpretar
resultados de acordo com as informações consolidadas e 
integradas
• Usufruir dos benefícios do laboratório para tomada de 
medidas estratégicas
• A excelência em saúde animal contribui para diminuir as 
perdas e maximizar os lucros da empresa.
Infecção Recente
Count : 15
Mean : 4625
Gmean: 2544
CV% : 95.5% 
Infecção crônica
Count : 15
Mean : 7137
Gmean: 6525
CV : 25%