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Metabolismo Microbiano Metabolismo consiste na acumulação e na degradação de nutrientes dentro de uma célula. Essas reações químicas fornecem energia e geram substâncias que sustentam a vida Dois componentes essenciais: enzimas e ATP Podem ser: -Metabolismo Primário: Produzido durante a fase de crescimento exponencial e cuja síntese é parte integral do processo de crescimento Exemplo: Etanol, Ác. Cítrico, Ác. Lático, Aminoácidos, Vitaminas -Metabolismo Secundário: Produzido no final da fase exponencial de crescimento e predominam durante a fase estacionária. Não desempenham função essencial para o anabolismo microbiano Exemplo: Antibióticos, Micotoxinas, Alcalóides Apresenta duas vias: - Catabolismo: quebram as macromoléculas em seus componentes mais simples, liberando energia do processo Exemplo: degradação do açúcar - Anabolismo: constroem macromoléculas por meio da combinação de moléculas mais simples, utilizando energia do processo Exemplo: Formação das proteínas As reações catabólicas fornecem os blocos construtivos para as reações anabólicas e a energia necessária para conduzi-las. Esse acoplamento de reações que precisam e liberam energia é possível através da ATP Quando moléculas complexas são quebradas (catabolismo), parte da energia é transferida e captada no ATP, e o restante é liberado como calor. Quando moléculas simples são combinadas para formar moléculas complexas (anabolismo), o ATP fornece a energia para a síntese, e outra vez parte da energia é liberada como calor Fontes de energia: - Químicas, para a maioria dos microorganismos - Luz Reações de oxidação-redução - Oxidação: remoção de elétrons de um átomo ou molécula, uma reação que frequentemente produz energia - Redução: ganho de elétrons - Elétrons se movem de um doador, o agente redutor, para um receptor de elétrons, o agente oxidante - Células utilizam reações de oxidação-redução no catabolismo para extrair energia das moléculas nutrientes Exemplo: oxidação da glicose - Coenzimas: atuam removendo elétrons do substrato e os doando a outras moléculas em reações subsequentes. Principais coenzimas: NAD, NADP, FMN, FAD Reações biológicas de oxirredução A coenzima reduzida, NADH, contém mais energia que NAD+. Essa energia pode ser usada para gerar ATP em reações posteriores ATP - São compostos que armazenam energia - Grande parte da energia liberada durante as reações de oxidação- -redução é armazenada dentro da célula pela formação de ATP - No grupo Fosfato, é adicionado ao ADP com uma entrada de energia para formar ATP - Na Fosforilação, o ATP é normalmente gerado quando um Fosfato de alta energia é diretamente transferido de um substrato ao ADP Biossíntese em uma célula: Composta por: RNA, DNA, Proteínas, Lipídeos, Lipopolissacarídeos, Peptideoglicano, Glicogênio, Pequenas Moléculas, Íons Transporte: - Membrana Exterior: pequenos poros de passagem, pequenas dimensões, gradiente de concentração - Parede da Célula: permite a passagem - Membrana da Célula: transportadores Quimio-heterotróficos: utilizam reações de oxi-redução de compostos orgânicos como fonte de carbono e energia. Podem ser: - Respiração celular aeróbica e anaeróbica - Fermentação Catabolismo de Carboidratos - Fonte primária de energia usada pelos microorganismos - Quebra de carboidratos para produzir energia - Importante para o metabolismo celular Respiração e Fermentação - Respiração: processo de geração de ATP em moléculas são oxidadas e o aceptor final de e- é quase sempre uma molécula inorgânica 1. Aeróbica: O aceptor final de e- é o O2 Exemplos: Pseudomas e Bacillus ( N2, NO2, N2O), Desulfovibrio (H2S), Bactérias Metanogênicas (CH4) 2. Anaeróbica: O aceptor final de e- é uma molécula inorgânica (que não o O2) - Fermentação: Não requer O2, mas pode ocorrer na presença dele Produz pouca quantidade de ATP, pois a energia permanece nas ligações químicas de moléculas orgânicas O ácido pirúvico e os e- transportados pelo NADH (formado na glicólise), são incorporados nos produtos finais da fermentação Exemplos: Streptococos, Lactobacilos (Ácido Lático), Levedura (Etanol e CO2), Propionibacterium (Ácido propiônico, Ácido Acético, CO2 e H2), Clostridium (Butanol, Acetona, CO2), Escherichia, Salmonella (Etanol, Ácido Lático, Ácido Acético, CO2, H2), Enterobacter (Etanol, Ácido Lático, Ácido Acético, Acetoína, CO2, H2) Fermentação Láctica Redução do Piruvato a Lactato Exemplo: Lactobacillus, Streptococcus Fermentação Alcóolica Redução do Piruvato a CO2 e Etanol Efetuada por alguns fungos (Saccharomyces) e algumas bactérias (Zymononas) Fermentação Mista Redução do Piruvato a Etanol e Múltiplos Ácidos A fermentação ácida mista é efetuada por Enterobacteriaceae (ex. Escherichia, Salmonella, Proteus) Fermentação Propiônica Piruvato é convertido em Ácido Propiônico Exemplo: Produção do queijo tipo suíço (ácido propiônico proporciona o sabor e o CO2 dá origem aos orifícios) Glicólise - Primeiro passo no catabolismo de carboidratos - Ocorre a oxidação da glicose ao ácido pirúvico, com formação de ATP e NADH - Ganho líquido de duas moléculas de ATP para cada molécula de glicose que é oxidada Ciclo de Krebs - Reações bioquímicas, nas quais a grande quantidade de energia química potencial armazenada no acetil-CoA é liberada - uma série de oxidações e reduções transfere esta energia potencial, na forma de elétrons, para coenzimas carreadoras de elétrons, principalmente NAD e FADH2. Os derivados do ácido pirúvico são oxidados; as coenzimas são reduzidas - Produtos: GTP, NADH e FADH2 reduzidos, ricos em energia, que conduzem a energia para cadeia de elétrons Cadeia de Transporte de Elétrons - Procariotos (membrana citoplasmática) - Transportadores de elétrons alta capacidade de oxidação-redução (FMN, Citocromo e coenzima Q) - Os elétrons trazidos por NADH e FADH2 são entregues nessa cadeia - O último citocromo recebe o elétron (e-) e transfere para o O2 (ou outro aceptor) - Ao longo do salto dos elétrons, ocorre a quimiosmose com a geração de ATP (enzimas ATP sintetase) Catabolismo dos lipídeos - Os triglicerídeos são hidrolisados em glicerol e ácidos graxos - Os microrganismos produzem enzimas extracelulares, chamadas de lipases, que quebram as gorduras nos seus componentes ácidos graxos e glicerol - Os ácidos graxos são quebrados em unidades de dois carbonos e entram no ciclo de Krebs, onde são metabolizados para produzir energia adicional Catabolismo das proteínas - Os peptídeos são hidrolisados a aminoácidos - Os aminoácidos são desaminados, e as moléculas resultantes entram em vias que levam ao ciclo de Krebs. Biossíntese - Formação de monômeros a partir de precursores das vias metabólicas - As reações de síntese requerem uma entrada líquida de energia - Exemplos - Formas ativas de glicose: ADPG, UDPG Biossíntese dos Amnoácios e Proteínas Biossíntese dos Ácidos Nucleicos Biossíntese dos Lipídeos Testes bioquímicos e identificação de microorganismos - São utilizados para identificar bactérias e leveduras, pois diferentes espécies produzem enzimas diferentes. Testes de Fermentação de Carboidrato Contém proteínas, um único carboidrato, um indicador de pH e um tubo de Durham invertido, utilizado na captura de gásSe elas catabolizarem o carboidrato e produzirem ácido, o indicador de pH muda de cor Ex: meio com glicose : - se fermenta glicose produz ácido e o meio muda de cor - se produz gás forma bolha no tubo Produção de ácido é indicada pela alteração de cor do corante indicador de pH adicionado ao meio (vermelho → amarelo) Produção de gás (H2 ou CO2 ) é indicada pelas bolhas no interior de tubos invertidos introduzidos em cada frasco Testes bioquímicos para identificação de Enterobactérias Sistemas rápidos de identificação dependentes de cultivo são frequentemente utilizados na identificação de bactérias entéricas, uma vez que são causas comuns de infecções urinárias e intestinais