RELATÓRIO TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM AGRESSÃO E DEFESA

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BRUNA COLLI , CAROLINA CALVANO, CLAUDIENE GONÇALVES, GERHARD LUGARD, PALOMA WOJAHN, THAINA MAZZUCCO.
 
ATIVIDADE PRÁTICA SUPERVISIONADA DE AGRESSÃO E DEFESA 
SÃO PAULO
2019
BRUNA COLLI, CAROLINA CALVANO, CLAUDIENE GONÇALVES, GERHARD LUGARD, PALOMA WOJAHN, THAINA MAZZUCCO
ATIVIDADE PRÁTICA SUPERVISIONADA DE AGRESSÃO E DEFESA 
Relatório da atividade prática supervisionada (APS) da disciplina de Agressão e Defesa do curso de Medicina Veterinária do Centro Universitário das Faculdades Metropolitanas Unidas (FMU).
Professora: Marcia Cristina Menão 
São Paulo 
2019
Resumo 
O presente relatório tem como objetivo descrever a técnica de Gram, o qual tem como conceito distinguir as bactérias e suas características. O relatório divide-se em dois capítulos, sendo que o primeiro é dedicado a explicação sobre conceitos da técnica de gram, e ferramentas utilizadas para o desenvolvimento da mesma. Com relação ao segundo capítulo, dedica-se a descrever a prática realizada em laboratório e apresentar os resultados obtidos.
Palavras chave: técnica de gram, laboratório, agressão e defesa. 
 
Lista de ilustrações e figuras 
Figura 1: Parede celular de bactérias gram positivo...................................................16
Figura 2: Coloração gram positivo...............................................................................17
Figura 3: Membrana externa de bactérias gram negativo...........................................17
Figura 4: Coloração de gram negativo........................................................................18
Figura 5: Bactéria Cocos.............................................................................................18
Figura 6: Bactéria Bacilos...........................................................................................19
Figura 7: Estafilococos Gram Negativo.......................................................................21
Figura 8: Bacilos Gram Positivo..................................................................................21
Sumário	
Resumo	3
Lista de ilustrações e figuras	4
Sumário	10
introdução	13
1.1	tema	14
1.2	objetivos	14
1.2.1	Objetivo Geral	14
1.2.2	Objetivos Específicos	14
1.3	metodologia	15
2	fundamentação teórica	16
2.1	tecnica de Gram	16
2.2	gram positivo	16
2.3	gram negativo	17
2.4	bactéria cocos	18
2.5	bactéria bacilos	18
3	Descrição da prática	20
3.1	desenvolvimento datécnica de gram	20
Conclusão	22
Bibliografia	23
introdução
A técnica de Gram, também conhecida como coloração de Gram, é um dos métodos de coloração de bactérias mais utilizado, descoberto pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram (1853-1938), em 1884, no qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirirem após tratamento com agentes químicos específicos.
Este relatório refere-se ao desenvolvimento da técnica de Gram em laboratório da matéria de Agressão e Defesa do curso de Medicina Veterinária. 
 
tema 
Técnica de Gram. 
objetivos 
Objetivo Geral 
Desenvolver a técnica de Gram em laboratório a fim de identificar as bactérias e os tipos de Gram nelas contidas. 
 Objetivos Específicos 
- Desenvolver a técnica de Gram em laboratório.
- Identificar o Gram e bactérias presentes nas amostras. 
- Apresentar as etapas bem como resultados obtidos em relatório. 
metodologia 
O método de Gram é utilizado para identificar e distinguir as bactérias de acordo com suas características próprias. 
Para a realização das técnicas foi utilizada a estrutura institucional da FMU, relativa ao laboratório e para obtenção dos resultados foi utilizado colônias de bactérias, materiais como lamínulas, alça de platina, óleo para imersão, bico de Bursen, Lugol, álcool etílico, corante cristal violeta, fúcsia, tubo contendo solução com água esterilizada e microscópio para identificação. 
fundamentação teórica
tecnica de Gram 
O método é utilizado para diferenciar as bactérias de acordo com sua estrutura e parede celular, a técnica consiste em tratar um esfregaço bacteriano, com os reagentes cristal violeta, lugol, álcool e fucsina. As bactérias adquirirem a coloração em decorrência do tipo de Gram de acordo com suas características citadas a seguir. 
gram positivo
As bactérias de Gram positivo possuem muitas camadas de peptídeoglicano, contém ácido teicóico e ácido lipoteicóico. Estas bactérias adquirem a cor azul violeta/roxa.
Figura 1: parede celular de bactérias gram positivo. 
Fonte: UFPEL, 2010
Figura 2: coloração de gram positivo.
Fonte: o autor, 2019
gram negativo 
Bactérias de Gram negativo possuem poucas camadas de peptideoglicano, não contém ácido teicóico e possuem lipopolissacarídeos (LPS) e membrana externa mais suscetíveis ao rompimento mecânico. Elas adquirirem a coloração rosa ou vermelho.
Figura 3: membrana externa de bactérias gram negativo 
Fonte: UFPEL, 2015
Figura 4: coloração de gram negativo. 
Fonte: o autor, 2019
bactéria cocos 
Essas bactérias possuem formato esféricas e podem causar patogenicidade. Elas se agrupam em diferentes formas, podendo ser denominadas diplococos, estreptococos, estafilococos, sarcinas, entre outros. 
Figura 5: bactéria cocos 
Fonte: UNAM, 2017
bactéria bacilos 
Essas bactérias possuem formato cilíndricas e podem causar diversos tipos de patógenos. Elas se agrupam em diferentes formas, sendo denominadas bacilo isolado, diplobacilos, estreptobacilos entre outros. 
Figura 6: bactéria bacilos 
Fonte: UNAM, 2017
Descrição da prática
desenvolvimento da técnica de gram
Para a realização da técnica de Gram, foi disponibilizado aos alunos, colônias de bactérias coletadas em aulas anteriores e outras amostras foram disponibilizadas pelo HOVET, Hospital Veterinário FMU. Em laboratório os alunos selecionaram estas colônias e separaram as lâminas, passou-se esta lâmina no Bico de Bunsen (fogo), e ao realizar a passagem das bactérias para a lâmina foi usado a alça de platina, durante este procedimento aconselha-se sempre manter as mesmas perto do fogo, pois do lado do fogo tem uma área de esterilidade. Após a passagem das bactérias para a lâmina, foi colocado uma gota de água na mesma para espalhar as bactérias, o próximo passo foi passar esta lâmina ao fogo para secar, ao secar bem, foi identificada a lâmina para saber o lado que o gram/bactéria se encontra. 
Após a esta etapa concluída, o material foi levado para a cumbuca, onde posicionada em um suporte para dar início ao processo. Primeiramente foi aplicado cristal violeta sobre a lâmina e aguardado 1 minuto, após foi retirado todo cristal violeta e houve a aplicação de lugol por mais 1 minuto, retirado em seguida, foi a vez de gotejar álcool sobre a lâmina, em sentido vai e vem. O álcool serve para retirar a tinta, tendo diferente ação em cada gram. No gram positivo, ele desidrata porem não consegue alcançar a camada peptideoglicana, não removendo a coloração, já no gram negativa, ele consegue atravessar a camada peptideoglicana retirando a coloração da mesma. Por fim aplicou-se a fucsina por 30 segundos, o próximo passo foi lavar a lâmina em água corrente. Em seguida a lâmina foi secada levemente com papel toalha, e utilizou-se uma gota de óleo de imersão para possibilitar a visão da lâmina em microscópio, o qual foi aumentado em 100 vezes. 
Foi realizada a técnica de gram em duas amostras de colônias bacterianas distintas, das quais obteve os seguintes resultados, uma das amostras de bactéria foi 
Fonte: o autor, 2019
Figura 8: Estafilococos de gram positivo.
Fonte: o autor, 2019
Conclusão
Com a técnica realizada foi possível se obter o preparo, fixação e coloração do esfregaço, podendo ser visualizando a diferença entre as bactérias Gram-Positivas na coloração azul violeta e as Gram-Negativas na coloração rosa/vermelha.Na experiência também foi possível a visualização do arranjo das bactérias, estrepto e estafilo das formas cocos e bacilos.
A realização da técnica de Gram possibilitou a identificação e distinção das bactérias, levando mais conhecimento aos alunos na área de microbiologia. 
Bibliografia
EDUTEC.UNESP, Morfologia das bactérias. Disponível em https://edutec.unesp.br/publicador/index.php/conteudo/visualizar?pid=291&Conteudo_page=10. Acesso em 09 de abril de 2019.
MINISTÉRIO DA SAÚDE, , 2011, Técnica de coloração de gram. Disponível em http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/115_03gram.pdf. Acesso em 09 de abril de 2019
PROVIDA, Técnica de gram. Disponível em http://www.provida.ind.br/site/index.php/bacterias/bacterias/122-tecnica-de-gram.html. Acesso em 09 de abril de 2019
UNIVESC, 2012. Cocos. Disponível em https://www.ebah.com.br/content/ABAAAfWPgAL/cocos-gram-positivos. Acesso em 09 de abril de 2019