Exame - método Elisa docx

Prévia do material em texto

O QUE É ELISA?
O ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) é um teste
sorológico imunoenzimático cuja metodologia se baseia em
reações antígeno-anticorpo detectáveis através de reações
enzimáticas.
Existem vários modelos de ELISA, e eles envolvem testes usando
anticorpos como reagentes. Imunoensaios enzimáticos como estes
utilizam enzimas ligadas a um dos reagentes. A presença de antígenos
e/ou anticorpos no espécime clínico é revelada pela produção de cor com
a adição do substrato da enzima e de uma substância cromógena,
indicando uma reação positiva. As enzimas mais comumente utilizadas
como marcadores nos ELISA são peroxidase e fosfatase alcalina.
SE LIGA! Os testes sorológicos utilizam o soro como amostra
para detectar a presença de anticorpos contra parasitas, fungos,
bactérias ou vírus, indicando que o indivíduo esteve em algum
momento em contato com estes agentes. Mas também podem
detectar a presença dos antígenos, indicando diretamente a sua
presença no organismo. 
COMO É REALIZADO?
Para a realização do teste imunoenzimático a técnica, em sua forma mais
simples, segue o seguinte passo a passo:
1. Um reagente é conectado a uma fase sólida, geralmente uma placa de
plástico com um formato de vários pequenos poços.
2. Adição de reagentes, ou seja, do soro como amostra clínica. É nessa
etapa que ocorre o reconhecimento de antígeno-anticorpo, caso haja
especificidade. O anticorpo ADICIONADO É LIGADO A UMA
ENZIMA.
3. Após período de incubação, a separação dos reagentes ligados e livres,
que são adicionados subsequentemente à fase sólida, é feita por uma
simples etapa de lavagem.
4. Uma reação enzimática é utilizada para produzir cor e quantificar a
reação, através da adição do substrato específico para a enzima utilizada.
5. A leitura dos resultados se faz pela medida da ação enzimática sobre
substrato cromogênico, levando a mudança de cor da solução quando há
reação antígeno-anticorpo, configurando um resultado positivo.
SE LIGA! Qualquer forma ou superfície disponível em uma
molécula que possa ser reconhecida por um anticorpo constitui
um determinante antigênico ou epítopo. Antígenos polivalentes
contêm múltiplos epítopos idênticos aos quais moléculas de
anticorpos idênticos podem se ligar. As funções dos anticorpos
são dependentes de sua habilidade em se ligar especificamente a
antígenos. Devido a esta ligação específica de
antígeno-anticorpo, tem-se a precisão do teste ELISA.
TIPOS DE ELISA:
● ELISA direto
O ELISA direto pode ser considerado como a forma mais simples
do ELISA. É utilizado na dosagem de anticorpo, logo, identifica se o
indivíduo foi exposto a determinada doença. Nessa reação, o
antígeno é fixado a um suporte sólido contendo vários pequenos poços
onde a amostra contendo anticorpo é adicionada para reagir. Este
anticorpo, ligado a uma enzima, é chamado de anticorpo primário. Nessa
etapa, ocorre o reconhecimento de antígeno-anticorpo e, após
procedimentos intermediários (incubação e lavagem), há retirada dos
componentes não fixados. Em seguida, a reação positiva é visualizada
com a adição do substrato específico da enzima utilizada, em que ocorre
mudança de cor na solução através de catálise enzimática. A intensidade
da cor é estimada colorimetricamente e é proporcional a concentração do
anticorpo pesquisado.