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Dosagem de Açúcar Redutor pelo método ADNS Discente: Cynthia Camargos Docente: Lídia Andreu Guillo Disciplina: Bioquímica Experimental ● Monossacarídeos: 3-8 Carbonos; pelo menos um deles é assimétrico; ● Monossacarídeos naturais: o carbono assimétrico mais afastado da carbonila contém o grupo OH no lado direito. Carboidratos Carboidratos D-Glicose L-Glicose Quando um grupo OH do monossacarídeo ataca a carbonila do mesmo, essa molécula converte-se na forma cíclica. Ocorre entre o carbono do grupamento funcional (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) e um dos carbonos hidroxilados da molécula. Carboidratos Se a reação ocorrer no C4 -> furanose Se ocorrer no C5 -> piranose. Carboidratos Carboidratos Carboidratos Açúcar com anel de 6 membros: piranose Açúcar com anel de 5 membros: furanose Carboidrato Redutor O carboidrato é considerado redutor quando é capaz de reduzir o íon cúprico (Cu ). Na ligação glicosídica, a extremidade com o Carbono anomérico livre é chamada extremidade redutora. 2+ Como saber se é redutor? O Carbono Anomérico está SEMPRE ligado a 2 átomos de Oxigênio. Aldeídos: C1 Cetonas: C2 Como saber se é redutor? Glicose e Galactose -> aldeídos -> C1 é anomérico Frutose -> cetona -> C2 é anomérico Carboidrato Redutor Lactose: ligação β (1-4) C anomérico livre: açúcar redutor. Carboidrato Redutor Maltose: ligação α (1-4) C anomérico livre: é açúcar redutor. Carboidrato Redutor Sacarose: ligação α (1-2) β C anoméricos participam da ligação glicosídica: não é redutor. ADNS Ácido 3,5-dinitrosalicílico Ácido 3-nitro-5-salicílico Dosagem de açúcares redutores por espectrofotometria na faixa do visível. Objetivos Água destilada Materiais Tubos de ensaio Água destilada Soluções de Glicose (5mM e desconhecida) Materiais Micropipeta Cubetas EspectrofotômetroVórtex Glicose 5 mM (mL) Água Destilada (mL) ADNS (mL) Metodologia 1,0 - 1,0 0,8 0,2 1,0 0,6 0,8 1,0 0,4 0,9 1,0 0,2 1,0 1,0 Metodologia Glicose 5 mM (mL) Água Destilada (mL) ADNS (mL) - 1,0 1,0 0,1 0,9 1,0 SP B Metodologia ● Após a preparação dos tubos, todos foram agitados em vórtex e aquecidos a 100 ºC por 5 minutos; ● Após esse tempo, foram resfriados em banho de gelo; Metodologia ● O volume foi completado com água destilada para 15 mL ; ● Foi aliquotado 1 mL por cubeta para leitura de cada amostra em espectrofotômetro a 540 nm. Resultados Tubo B SP 1 2 3 4 5 540nm 0 0,062 0,091 0,156 0,329 0,448 0,542 Resultados Resultados Equação: 0,597x - 0,045 Abs = 0,597 . x - 0,045 0,062 = 0,597x - 0,045 x = (0,062 + 0,045) / 0,597 x = 0,107 / 0,597 x = 0,1792 mM SP: absorbância de 0,062 Conclusão Tendo a absorbância da solução problema e das diferentes concentrações da solução padrão, pôde-se construir a Curva Padrão da Glicose e, com a equação da reta, foi possível encontrar a concentração da Solução Problema. Obrigada!
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