aula 5 microbiologia

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CRESCIMENTO 
MICROBIANO
PR O FA . DR A RA Q U E L SO M B R A
DIVISÃO BACTERIANA
Determinada pelo número de indivíduos ou células e não, pelo 
tamanho da célula.
! Tipo de reprodução bacteriana: fissão binária.
! Contagem aritmética:
 - 20 
 - 21
 - 22
 - 23
 - 24
 - 25
"2 (potência ou divisão binária)
- Expoente (nº de duplicações ou 
gerações)
DIVISÃO BACTERIANA
Tempo necessário para uma célula se dividir. Pode sofrer 
variações entre cada organismo e condições necessárias para 
o crescimento, como ambiente, temperatura, nutrientes...
!Ex: bactéria E.coli – tempo de duplicação de 20 minutos – em 20 
gerações teremos 1.048.575 (um milhão, quarenta e oito mil, 
quinhentos e setenta e cinco) células de E.coli. 
!Escalas Logarítmicas: usa-se para calcular graficamente o 
crescimento bacteriano em populações grandes. Ex: log10 9,0 = 
1.000.000.000 (hum bilhão de células) – escala logarítmica na 
base 10 (log10)
TEMPO DE GERAÇÃO
FASES DO CRESCIMENTO
! FASE LAG
 - período em que ocorre pouca divisão celular, 
podendo durar uma hora ou mesmo vários dias. 
Durante esse tempo as células se encontram em 
estado de latência.
! FASE LOG
 - início do processo de divisão entrando no 
período de crescimento ou aumento logarítmico. 
Período denominado de fase log ou exponencial.
!FASE LAG
!FASE LOG
!FASE ESTACIONÁRIA
!FASE DE MORTE CELULAR
FASES DO CRESCIMENTO
! FASE ESTACIONÁRIA
 - velocidade de crescimento diminui, o número de 
morte celular é igual ao número de células novas e a 
população se torna estável . Causas: fa l ta de 
nutrientes, mudança no pH, temperatura, etc. 
o FASE DE MORTE CELULAR
 - o número de células mortas excede o de células 
novas. Esta fase é denominada de morte celular ou 
declínio. 
CURVA DE CRESCIMENTO 
BACTERIANO
Determinação dos Microrganismos
-Método Direto: Contagem de Colônias, Método 
do número mais provável (NMP), Método de 
contagem direta ao microscópio.
-Método Indireto : Turbid imetr ia, At iv idade 
Metabólica e Peso seco
Método Direto
- Contagem em placas = unidades formadoras de colônias 
(UFC);
Método Direto
Vantagens
Desvantagens
• METODOLOGIAS PARA A CONTAGEM DE BACTÉRIAS 
EM PLACA
 Método Pour Plate: inóculo adicionado diretamente na 
placa de Petri, adicionado ágar líquido a 50ºC. Agitação 
circular. Solidificação do ágar, incubação na temperatura de 
crescimento da bactéria.
 Desvantagem: microrganismos sensíveis ao calor podem 
ser danificados. 
 Método de Espalhamento em Placa: inóculo adicionado 
na placa contendo o ágar solidif icado (meio sólido). 
Espalhamento uniforme no meio com bastão de vidro espiral. 
Bactérias crescem na superfície do meio. 
 Vantagens: Elimina as desvantagens do método anterior. 
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR DIRETAMENTE O 
CRESCIMENTO MICROBIANO
MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP)
•Estima a densidade de microrganismos viáveis presentes 
em uma amostra 
•Não permite a contagem "fixa" de células viáveis ou de 
unidades formadoras de colônias (UFC), como acontece 
com a técnica de contagem em placas.
Recomendada quando: a) É esperado, na amostra em análise, 
um baixo número do microrganismo alvo (<100/g ou mL) b) devido 
ao processo tecnológico sofrido pela amostra, as células 
presentes estejam lesadas, não tendo condições de formar 
colônias em meios sólidos seletivos.
# Amostra deverá ser diluída até que a última diluição de 3, 5 ou 10 tubos 
apresentem todos os resultados negativos. 
# Quanto maior o número esperado do microrganismo pesquisado, 
maiores deverão ser as diluições usadas.
# Na leitura final serão consideradas as 3 diluições mais significativas.
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR DIRETAMENTE O 
CRESCIMENTO MICROBIANO
• MÉTODO DE CONTAGEM DIRETA AO MICROSCÓPIO
 - a suspensão bacteriana é colocada numa lâmina de 
microscópio.
 - para calcular o número de bactérias por mililitro de 
solução o número encontrado deve ser multiplicado por 100 
devido a contagem ser em 0,01ml da amostra.
 - como fazer: no centro da lâmina do microscópio coloca-
se uma grade quadriculada. O volume de 0,01 ml é recoberto 
com a suspensão bacteriana. As bactérias podem ser visíveis e 
ficam nos quadrantes podendo ser realizado o cálculo. 
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR 
DIRETAMENTE O CRESCIMENTO 
MICROBIANO
• VA N TA G E N S E D E S VA N TA G E N S D O M É TO D O D E 
CONTAGEM DIRETA AO MICROSCÓPIO
 - Vantagem: método utilizado para resultados imediatos, 
pois não necessitam de período de incubação da cultura.
 - Desvantagens dificuldade de contagem das bactérias 
móveis, pois as mortas acabam sendo contatadas também. 
 - é necessário um grande número de células para permitir 
uma contagem satisfatória, aproximadamente 10 milhões de 
bactérias por ml.
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR 
INDIRETAMENTE O CRESCIMENTO 
MICROBIANO
• M É TO D O S I N D I R E TO S PA R A D E T E R M I N A Ç Ã O D E 
BACTÉRIAS
 - Turbidimetria: meio líquido túrbido com alta densidade 
de células.
 - Atividade Metabólica: produção de ácido ou CO2.
 - Peso Seco: utilizado para quantificar o peso seco de 
fungos ou bactérias, onde o microrganismo é removido do meio 
de cultura através da filtração e depois é seco em dessecador 
para posteriormente ser pesado.
Método Indireto
1) Como denominamos o processo de reprodução bacteriana? 
Explique, podendo demonstrar também através de desenhos.
2) O que se entende por tempo de geração bacteriana? Como 
podemos contabilizar o número de duplicações ou gerações?
3) Cite e explique, detalhadamente, as fases de crescimento 
microbiano. 
4) Desenhe a curva de crescimento bacteriano e indique as 
diferentes fases de crescimento microbiano no gráfico.
5) Quais os métodos ut i l izados para a determinação dos 
microrganismos?
6) Cite e explique os métodos diretos que podem ser utilizados 
para a determinação dos microrganismos. Comente sobre as 
vantagens e desvantagens dos mesmos.
7) Cite e explique os métodos indiretos que podem ser utilizados 
para a determinação dos microrganismos. Comente sobre as 
vantagens e desvantagens dos mesmos.
¡ Agente antimicrobianos
$ Substâncias que matam os microrganimos 
ou previnem o seu crescimento
$ Bactericidas
$ Bacteriostáticos
$ Agentes químicos ou agentes físicos
FATORES QUE INTERFEREM NA EFETIVIDADE DOS 
TRATAMENTOS MICROBIANOS
}Número de microrganismos
 Maior número de microrganismos = tempo para 
eliminação da população existente.
} Características microbianas
Endosporos são mais resistente que os vegetativos.
Ex: Bacillus e Clostridium
INFLUÊNCIAS AMBIENTAIS / 
DIFICULDADES/ANTIMICROBIANOS
} Meio com matéria orgânica 
} pH (condições ácidas favorece a destruição).
TEMPO DE EXPOSIÇÃO
} Longa exposição ao calor é superior à baixas temperaturas.
} Irradiação depende do tempo de exposição.
} Antimicrobianos químicos requerem tempos de exposição 
prolongados.
¡ Calor
$ Altas temperaturas
$ Método de maior eficiência e mais utilizado na 
destruição dos microrganismos
$ Condições úmidas (água ou vapor) ou secas
$ Mais eficiente que calor seco
$ Causa desnaturação e coagulação das 
proteínas
$ Ocorre em baixas temperaturas e menor tempo 
de exposição
$ Aplicações: vapor, água fervente ou 
aquecimento.
$ Vapor d’água: geralmente aplicado sob 
pressão
$ Método mais prático e seguro de aplicação
$ Aumento de pressão permite aumento de 
temperatura = fornece maiores temperaturas 
em relaçãoao vapor sem pressão.
$ Vantagem: aquecimento rápido e maior 
penetração
▪ Aparelho: autoclave
▪ 121º.C / tempo (material a ser esterilizar)
Ponto de ebulição ou temperatura de ebulição
•Formação de bolhas de gás no interior do líquido
•Destruição de microrganismos vegetativos.
•Materiais contaminados = não é seguro = presença de 
endospóros
•Não é considerada um método de esterilização
• Aquecimento = temperatura inferior a seu ponto de ebulição, seguido de 
resfriamento
• Destrói células vegetativas, mas não esteriliza
• Lenta (62º.C/30 min.) e rápida (72º.C/15 seg.)
• Alimentos são selados hermeticamente
• Elimina as células vegetativas de microrganismos patogênicos ou não
• Processo de esterilização de alimentos (leite, queijo, iogurte, cerveja ou vinho)
FLAMBAGEM
¡Aquece-se na chama do bico de gás até ao rubro. 
¡Elimina formas vegetativas dos microrganismos. 
¡Não é método de esterilização. 
¡Uso: fios de platina e pinças, 
INCINERAÇÃO
¡Eficiente na destruição de matéria orgânica e lixo hospitalar. 
¡Desvantagem: destrutivo para os materiais
RAIOS INFRAVERMELHOS
¡Uso de lâmpadas que emitem radiação infravermelha, 
¡Aquece a superfície exposta/temperatura cerca de 180O C.
ESTUFA DE AR QUENTE
¡Uso de estufas elétricas. 
– Prática de rotina em laboratórios
– Usada para alças e agulhas de 
semeadura
– Incidência direta sobre a chama do 
bico de bunsen
– Evitar contaminações entre as 
inoculações
– Cuidados: o material aquecido pode 
emitir gotículas e aerossóis
 - Abaixo de zero graus inibem o metabolismo 
de microrganismos
- Bloqueio do crescimento microbiano
- Manutenção indefinida de microrganismos
¡ Penetração em pacotes/produtos e esteriliza seu interior
¡ Esterilização de alimentos e equipamentos médicos.
¡ Algodão: embuchamento dos tubos e frascos;
¡ Discos filtrantes;
¡ Membranas filtrantes (millipore 0,01 - 10µm) – discos estéreis de celulose;
¡ Filtro hepa (CSB) – cabines que protegem contra aerossóis contaminados; 
acetato de celulose aderido a uma folha de alumínio; retém 99% das 
partículas
Agentes Químicos
— Agentes químicos - método bastante conveniente e 
efetivo de esterilização e desinfecção;
� APLICAÇÃO: desinfecção de pisos e superfícies;
— Poucos obtém a esterilidade, a maioria tem ação 
desinfetante;
— Nenhum desinfetante isolado é apropriado para todas 
as circunstâncias;
— A ação depende de fatores: temperatura, pH, 
presença de sais, presença de proteínas e o tempo 
de contato.
ORDEM DE RESISTÊNCIA À 
EXPOSIÇÃO AOS AGENTES QUÍMICOS.
Dependendo do nível de atividade necessária é 
que são escolhidos os agentes químicos.
Tipo de 
Microrganismo
Nível de atividade 
requerida
Bactéria esporulante Alto
Micobactéria e 
Vírus pequenos ou não 
lipídicos
Alto ou intermediário
Fungos Intermediário a baixo
Bactéria vegetativa
Vírus médios ou lipídicos
Baixo
— -Alta toxicidade para os microrganismos 
— -Solúvel em água 
— -Estabilidade elevada 
— -Inócuo para o homem e animais 
— -Ausência de afinidade por matéria orgânica estranha 
— -Toxicidade para os microrganismos em temperatura ambiente 
— -Capacidade de penetração 
— -Não ser corrosivo nem manchar 
— -Desodorante 
— -Detergente 
PROPRIEDADES DE UM AGENTE QUÍMICO
IDEAL
DETERGENTES
• Compostos que diminuem a tensão superficial e são 
utilizados para limpar superfícies;
• Ex. sabões.
 
ÁLCOOL 
•Aplicação: desinfetante de nível intermediário.
•Ação: ruptura da membrana celular e desnaturação das 
proteínas. 
•Apresentação mais frequente: álcool etílico e álcool isopropílico 
entre 60 e 90%. 
• Mais indicado para superfícies externas dos materiais e 
superfícies de vidro. 
•Características da ação: evapora rapidamente. Necessidade de 
submersão de objetos para uma ação mais ampla. 
 
FORMALDEÍDO (4 a 8%)
• Aplicação: desinfetante de alto nível, mas carcinogênico.
• Espectro de ação: bactericida, fungicida, viruscida. 
• Usado na desinfecção de equipamentos.
•Pode ser encontrado na forma sólida (pastilhas formalina) 
ou como solução aquosa 37-40% (diluído em álcool ou 
água). 
• Deve ser usada por 30 minutos, na concentração de 8% 
em solução alcoólica e 10% em solução aquosa.
GLUTARALDEÍDO 
•Aplicação e indicação: desinfetante de alto nível usado na 
esterilização de equipamentos dependendo do tempo de 
exposição. 
•Ação germicida: alteração do RNA, DNA e síntese 
protéica. 
•Tempo: É utilizado em solução a 2% com pH alcalino 
(7,5-8,5) por 30 minutos.
FENOL E COMPOSTOS FENÓLICOS
Fenol – raramente usado devido à possibilidade de 
irritação e odor desagradável. 
O cresol, O-fenilfenol, é o compostos fenólicos mais 
utilizado como desinfetante de superfícies.
O bifenol, triclosano, é usado em sabonetes 
antibacterianos.
FENÓLICOS (5%)
•Aplicação: desinfetante de nível baixo a 
intermediário;
•Ação: destruição do protoplasma com ruptura da 
parede celular com precipitação protéica;
•Espectro de ação: bactericida, viruscida, fungicida;
•Usado na desinfecção de áreas de laboratório e 
produção. 
•Concentração para uso: 0,4-5% 
•Tempo de exposição deve ser menor ou igual a 
10 minutos. 
HALOGÊNIOS
 O iodo e o cloro são agentes antimicrobiano 
eficazes. 
O iodo está disponível como tintura de iodo, usado 
principalmente na desinfecção da pele e no 
tratamento das feridas. 
O cloro, como gás ou em combinação com outras 
substâncias químicas, é amplamente usado. 
HIPOCLORITO DE SÓDIO 
•Aplicação: quanto maior a concentração e/ou o tempo maior o 
espectro de ação, podendo ser utilizado como desinfetante de baixo 
a alto nível. 
•Espectro de ação: Atua a concentrações tão baixas como 25 ppm 
para microrganismos mais sensíveis. Mais usualmente utilizada em 
concentração de 1000 ppm.
•Características: é o desinfetante mais amplamente utilizado. 
Apresenta ação rápida e baixo custo. 
•Compatibilidade com materiais: é bastante corrosivo, principalmente 
de metais e tecidos de algodão e sintéticos. 
 
PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO (6 a 10%) 
• Aplicação: desinfetante de alto nível, principalmente para 
materiais termo sensíveis. 
•Ação: agente oxidante. Desnaturação protéica, ruptura da 
permeabilidade da membrana celular. 
•Tempo: a inativação de microrganismos é dependente de 
tempo, temperatura e concentração. 
• Quando a concentração estiver abaixo de 6% deve ser 
desprezada.
•Compatibilidade com materiais: corrói zinco cobre e latão. 
COMPOSTOS QUATERNÁRIOS DE AMÔNIA 
•Aplicação: desinfetante de baixo nível. Muito utilizado 
como desinfetante de superfícies, limpeza geral;
•Ação: desnaturação das proteínas celulares essenciais e 
ruptura da membrana celular;
• Inativados por tensoativos, resíduos aniônicos e 
proteínas. Algumas formulações são inativadas por água 
dura; 
•Baixo nível de toxicidade direta, mas poluente ambiental. 
METAIS PESADOS
• Soluções de prata e mercúrio;
• Mata células vegetativas em baixas concentrações, pela 
inativação de proteínas;
• Não elimina esporos.
1) Cite e comente sobre as diferentes técnicas de 
controle do crescimento microbiano.
2) O que são agentes antimicrobianos?
3) Diferencie os termos “bacteriostático” e “bactericida”.
4) Cite e comente sobre os fatores que interferem na 
efetividade dos tratamentos microbianos.
5) Cite e comente sobre os agentes físicos de controle 
de crescimento microbiano.
6) Cite e comente sobre os agentes químicos de 
controle de crescimento microbiano.
7) Quais as propriedades de um agente químico ideal?