Relatório de aula prática CCA_IFSC

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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SANTA CATARINA
CAMPUS LAGES
DEPARTAMENTO DE AMBIENTE E SAÚDE
CURSO TÉCNICO DE BIOTECNOLOGIA
UNIDADE CURRICULAR: CULTURA DE CÉLULAS ANIMAIS -
MÓDULO 4
 CULTIVO DE TECIDOS ANIMAIS
 Aluno:ALESSANDRA 
 AMANDA 
 EMERSON 
 LUANE 
 SUELLEN 
 Prof. RITA 
 LAGES, 2018
INTRODUÇÃO
 A cultura de tecidos é um termo genérico que inclui a cultura de órgãos, que é o crescimento de pequenos fragmentos de tecidos ou de um completo órgão embrionário, e cultura celular, onde as células de um tecido são dispersas por meios mecânicos ou enzimáticos e se propagam como suspensão celular ou são apreendidas em uma superfície de vidro ou plástico.
 A cultura de tecidos requer condições estéreis, e um meio de cultura contendo água, sais, muitos nutrientes e soro sanguíneo para a sustentação celular e para seu crescimento fora do corpo. Um meio de cultura sem soro tem sido desenvolvido para satisfazer necessidades e funções crescentes das células.
 As células e tecidos de culturas de animais são amplamente utilizadas para pesquisa biológica. Por exemplo, os métodos da cultura de tecidos são válidos para o teste de drogas com aplicação na medicina e para o preparo de vacinas, anticorpos, fatores de crescimento, coeficientes de coagulação, e numerosas proteínas.Os métodos de cultura de tecido estão sendo desenvolvidos para o transplante das células produtoras de insulina, isoladas de um tecido pancreático fetal em pacientes com diabetes que não respondem ao tratamento médico convencional.
2 OBJETIVOS
 Observar e realizar a contagem de todas as células que aparecem dentro dos 4 quadrantes laterais e fazer a média, depois multiplicar pela diluição (5x) e o resultado multiplicar por 10.000 (equivalente 10 na 4) que é o valor de correção o entre a distância da lamínula da câmara de neubauer.
3 METODOLOGIA EXPERIMENTAL
 3.1 Reagente e Materiais
- Ponteiras azuis e amarelas esterilizadas
- Placas de Petri esterilizadas
- Solução salina esterilizadas
- Tesouras e pinças esterilizadas
- Placas 12 poços
- Garrafas de cultivo
3.2 Procedimento Experimental
1. Corte o tecido em pequenos pedaços.
2. Coloque os tecidos em placas de petri esterilizadas com um pouco de solução salina tamponada
3. Romper o tecido com bisturi e por fricção leve com gaze esterilizada depois através de aspiração com pipeta pasteur colocar em tubo falcon de 50 ml com 20 ml de soluçao salina e centrifugar em 1000 rpm por 5 minutos.
4. Retirar o sobrenadante, ressuspender o pellet e repetir o item 3 mais 3 vezes.
5. Após a finalização do item 4, colocar 1 ml do meio de cultura DMEM no tubo falcon e ressuspender o pellet.
6. Transferir meio com células para garrafa de inoculação para a placa ,fechar e colocar o recipiente e colocar na estufa a 25 graus celsius.
3.3 contagem de células utilizando a cámara de neubauer
1- Realizar a passagem de 2 ml da garrafa contendo o meio de cultivo para um tubo falcon com auxílio de uma pipeta.
2 - Adicionar 1 gota de azul de metileno 1% a solução.
3 - Homogeneizar.
4- com auxílio de uma pipeta colocar vagarosamente 2 gotas da solução corada na câmara de neubauer
5- No laboratório de microscopia acrescentar uma lamínula sobre a mesma e observar no microscópio óptico.
 
 
4 CONCLUSÃO
Cada etapa do procedimento foi realizada com enorme atenção e cuidado. No entanto, não foi possível a visualização de células vivas, devido ao envelhecimento natural celular, ou seja, o tecido estudado já apresentava sinais de deterioração, o que dificultou a contagem de células vivas.