Relatório Bioquímica

Prévia do material em texto

2
UNIVERSIDADE DO ESTADO DA BAHIA
Departamento de Ciências da Vida (DCV)
Disciplina: CCS018 - BIOQUÍMICA
Docente: Polyanna Carôzo 
Discentes: Gean Pereira da Cruz
Matheus Teixeira Pitanga Caria
Millena Conceição Palmeira
 
Relatório referente às aulas práticas da 1ª Unidade
Salvador-Ba
2019
Gean Pereira da Cruz
Matheus Teixeira Pitanga Caria
Millena Conceição Palmeira
Relatório referente às aulas práticas da 1ª Unidade
Relatório apresentado para obtenção de nota parcial, na disciplina de Bioquímica (CCS018) do curso Bacharelado em Farmácia da Universidade do Estado da Bahia.
Docente: Dra. Polyanna Carôzo.
Salvador-Ba
2019
Sumário
1. Introdução.......................................................................................3
2. Prática 1: Determinação do pH de soluções e tampões biológicos.5
3. Prática 2: Dosagem de proteínas e albumina...................................9
4. Prática 3: Cinética Enzimática.......................................................13
5. Prática 4: Dosagem de transaminases.............................................18
1. INTRODUÇÃO
O presente relatório aborda conceitos importantes para o entendimento dos processos bioquímicos que ocorrem no organismo, a importância do pH, conceito de solução tampão, importância da dosagem de proteínas e a cinética enzimática. 
Para que haja um bom funcionamento do organismo, é necessário um ambiente favorável para que as proteínas desempenhem seu papel em cada célula ou compartimento. O corpo humano possui fluidos em diferentes regiões e órgãos, estes fluidos contêm substâncias e íons emergidos que em equilíbrio favorecem um bom funcionamento fisiológico. Ah um importante íon presente nos líquidos do corpo humano, o íon H⁺. De acordo o conceito de Bronsted-Lowry, substâncias capazes de doar um próton H⁺ a outras substâncias são consideradas ácidas, já as substâncias capazes de aceitar um próton H⁺ de outras são consideradas básicas. Deste modo, elevadas ou muito baixas quantidades desse íon podem ocasionar problemas conhecidos como ‘’Distúrbios ácido-base’’, por isso, utiliza-se uma escala logarítmica para medir o grau de acidez, neutralidade ou alcalinidade de uma determinada solução Matematicamente, o "p" equivale logaritmo de base 10.
pH = -log [H3O⁺] ou pH= -log [H⁺]
Os tampões são sistemas químicos que têm a capacidade de suportar as variações de pH quando pequenas concentrações de ácido ou base são adicionadas. Por isso, quando ocorre alguma variação ou distúrbios relacionados ao pH, os organismos usam como linha de defesa e controle os tampões biológicos. O pH do sangue é cerca de 7,4, enquanto o suco gástrico no estômago, tem pH cerca de 1,5. Esses valores de pH são cruciais para o bom funcionamento de enzimas, estrutura de proteína e balanço da pressão osmótica.
Proteínas são macromoléculas polímeras dos aminoácidos (formadas por no mínimo 3 aminoácidos) que controlam praticamente todos os processos que ocorrem em uma célula, alguns fatores como pH, temperatura, exposição à radiações UV e outras formas de radiações fortes podem alterar as estruturas espaciais das proteínas de modo irreversível. As proteínas exibem uma quase infinita diversidade de funções, tais como a transportadora e construtora, também participam da formação de hormônios, enzimas e anticorpos, ao ingerir proteínas elas são quebradas pela ingestão e novamente quebradas ao ser absorvidas pelas células que as transformam em aminoácidos. Os aminoácidos são compostos orgânicos que contém sempre um carbono central (C) chamado de α (carbono alfa), ligado a um hidrogênio (H), um grupo amino (NH2), um grupo carboxila (COOH) e um radical “R”, que muda de aminoácido para aminoácido. É esse radical que determinará as características de um aminoácido e os diferem. 
 Estrutura molecular de um aminoácido
Apenas vinte aminoácidos aparecem no código genético, e eles são divididos em dois grupos: os não essenciais - são os que o corpo humano consegue sintetizar no organismo, e os essenciais - são aqueles que não podem ser produzidos pelo organismo, sendo necessária a ingestão de determinados nutrientes geralmente encontrados em alimentos de origem animal, como triptofano, valina, fenilalanina, treonina, lisina, isoleucina, leucina, histidina e metionina.
O desenvolvimento de metodologias para determinar proteínas têm, cada vez mais, se tornado de fundamental relevância em várias áreas do conhecimento, como por exemplo, em análises clínicas, favorecendo o diagnóstico de certas doenças correlacionadas com a alteração da quantidade de proteínas nos fluidos biológicos, e em problemas relacionados à nutrição humana como obesidade, anorexia nervosa, desnutrição, relacionando o comportamento alimentar com a quantidade de proteína ingerida dos alimentos, se tornando de extrema importância para a área de análises clínicas, ou na produção de medicamentos que possam influenciar na concentração de proteínas no organismo. A dosagem de proteína total sérica compreende as frações albumina e globulina.
O método do biureto se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre e solução, reage em meio básico com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 540 nm que é proporcional a concentração da proteína, no caso do Verde de Bromocresol, que reage em meio ácido, resultando em duas bandas de absorção entre 495-570 nm. A intensidade da cor é proporcional à concentração de albumina na amostra. A albumina e a globulina são substâncias protéicas encontradas no plasma sanguíneo, correspondem a cerca de 7% do seu volume, a globulina é a fração que corresponde aos anticorpos, agindo na defesa do organismo contra infecções e as lipoproteínas que transportam lipídios, como o colesterol HDL, este que evita a formação de depósitos de ateroma na parede das artérias, sendo, por isso, conhecido popularmente como o “bom colesterol”, a albumina é a proteína que auxilia a regulação do controle osmorregulador do sangue e manutenção da pressão sanguínea, além de proporcionar a difusão de agentes hormonais e ácidos graxos, sendo a mais abundante na composição do plasma. O plasma também é composto por outras substâncias como o fibrinogênio, que são elementos que atuam no mecanismo de coagulação, e substâncias transportadoras como as hemácias, os leucócitos e as plaquetas.
A cinética enzimática estuda as reações químicas catalisadas pelas enzimas, em especial a velocidade de reação e como ela se altera de acordo com o estado do meio. Os fatores que podem alterar a ação de uma enzima são: pH, temperatura e a concentração de substrato, A reação catalisada enzimaticamente se processa em duas etapas, A enzima se liga reversivelmente ao substrato formando um complexo enzima-substrato (ES), depois o produto é liberado e a enzima volta à forma livre podendo, então, se ligar a outra molécula.
2. Prática 01:Determinação do pH de Soluções e Tampões biológicos
2.1 OBJETIVOS
O objetivo desta aula prática consistiu em determinar o pH com o uso de um indicador universal e, por conseguinte, discutir a respeito da importância biológica do pH e da solução tampão.
2.2 Materiais e Métodos 
· Soluções tampão pH 4, 5, e 7;
· NaOH 0,1 M;
· HCL 0,1 M;
· Água destilada;
· Indicador universal;
· Canudos;
· Tudos de ensaio;
· Estante para tubos de ensaio;
· Pipetas.
2.3- Tabela com os 5 tubos de ensaio e, cada um deles com 0,5ml da solução correspondente. Adicionado 8 gotas de indicador universal.
	Tubo
	Água
	Soluções
	1
	2,5
	5 gotas de HCl
	2
	2,0
	0,5ml de tampão pH 4
	3
	2,0
	0,5ml de tampão pH 5 
	4
	2,0
	0,5ml de tampão pH 7 
	5
	2,5
	5 Gotas de NaOH
2.4 - Tabela de bateria com 4 tubos, usada para determinar o pH usando a escala padrão 
	Tubo
	 Água 
	Tampão pH 7,0
	Valor de pH observado
	12,5 ml
	 -
	2,5
	2
	2,0 ml
	0,5 ml
	7,0
	3
	2,5 ml
	 -
	2,5
	4
	2,0 ml
	0,5 ml
	7,0
2.5 Resultados
 
	Tubo
	Água
	Tampão pH 7,0
	Variação de pH após acréscimo de NaOH
	Variação de pH após soprar 
	Variação de pH após acréscimo de HCl
	1
	2,5
	- 
	12
	3
	-
	2
	2,0
	0,5ml
	7
	7
	-
	3
	2,5
	-
	-
	-
	2,5
	4
	2,0
	0,5ml
	-
	-
	6
· Foi adicionado uma gota de NaOH tubos 1 e 2. No tubo 1 o meio está ácido, ph 2,5, após adicionar NaOH o meio ficou básico, porque a base adicionada ao recipiente é considerada forte. No tubo 2 não houve variação de pH pois estava dentro da faixa do limite de tamponamento. 
3. Discussão 
a) O pH biológico é igual em todos os órgãos e líquidos do corpo humano? Justifique.
 Nem todos os órgãos vão possuir o mesmo pH biológico, uma vez que cada um deles depende de um pH específico de atuação, para que possam desempenhar suas funções de forma normal. 
b) O valor do pH da água, medido com os indicadores, está de acordo com o esperado? Se não está discuta o porquê.
O pH está de acordo ao esperado, ou seja, neutro (ph = 7), pois a água destilada é livre íons e tem baixa quantidade de sais minerais, que são extraídos no processo de destilação. 
c) O que acontece quando você sopra o tubo de ensaio? Discuta as diferenças observadas entre o tubo que contém apenas água e o tubo que contém a solução tampão comparando ao que ocorre dentro do organismo humano.
Ocorreu através da adição de CO2 ao meio através do sopro, o mesmo reagiu com a água formando ácido carbônico (H2CO3) tornando o meio ácido. No tubo 2 que continha água não houve variação após realizar o mesmo procedimento, pois este estava dentro da faixa de tamponamento.
d) Além do sistema tampão (químico) que outros sistemas fisiológicos ajudam na regulação do pH sanguíneo? Explique.
Regulação respiratória, o excesso de acidez ou de dióxido de carbono no sangue ativa diretamente o centro respiratório. Ocorre um aumento da ventilação com o objetivo de eliminar o dióxido de carbono, a pessoa fica ofegante e respira com dificuldade. Regulação Renal, a concentração do plasma sanguíneo é detectada por receptores osmóticos localizados no hipotálamo, havendo aumento na concentração do plasma (pouca água), esses osmorreguladores estimulam a produção de ADH, esse hormônio passa para o sangue, indo atuar sobre os túbulos distais e sobre os túbulos coletores do néfron, tornando as células desses tubos mais permeáveis à água, dessa forma, ocorre maior reabsorção de água e a urina fica mais concentrada, quando a concentração do plasma é baixa (muita água), há inibição da produção do ADH e, consequentemente, menor absorção de água nos túbulos distais e coletores, possibilitando a excreção do excesso de água, o que torna a urina mais diluída.
e) Em que situações clínicas (na sua área) podemos exemplificar a ocorrência de Distúrbios ácido-base? Justifique.
Para manter o pH em limites compatíveis com os processos vitais o organismo lança mão de uma série de mecanismos bioquímicos, com destaque para o papel desempenhado pelo chamado sistema-tampão. O sistema tampão do organismo apresenta quatro grandes componentes: bicarbonato/ácido carbônico, proteínas, fosfatos monoácidos/fosfatos biácidos e hemoglobina. As substâncias-tampões são responsáveis minimizar as alterações do pH decorrentes da adição ou subtração de íons H+. Com a queda do pH da solução, estas substâncias aceitam os íons H+ para entrega-los novamente quando aumenta o pH; desta maneira agem contra as modificações abruptas da reação. Entre os tampões do espaço extracelular o bicarbonato e as proteínas plasmáticas desempenham papel relevante, enquanto a hemoglobina e os fosfatos estão em primeiro plano no compartimento intracelular. Graças a estes sistemas de tamponamento, pequenas alterações do equilíbrio ácido-base manifestam se por um deslocamento do equilíbrio da reação dos tampões com atenuação de modificações significativas da concentração dos íons H+ livres ou do pH. O tampão bicarbonato é o mais importante. Existem situações clínicas importantes que apresentam padrões de alterações do equilíbrio ácido-base que merecem atenção pela frequência e gravidade, como por exemplo a diabetes melito. Ocorre acidose metabólica em indivíduos que tem a falta de insulina em seu organismo, a insulina é responsável por fazer com que a glicose que está na corrente sanguínea entre nas células do nosso corpo e gere energia, quando há falta de insulina ocorre o aumento do nível de açúcar no sangue e as células sofrem com a falta de energia, o que faz o organismo quebre moléculas de gordura afim de gerar energia para o bom funcionamento das células, nessa quebra também ocorre a formação dos corpos cetônicos, as cetonas são substancias ácidas e podem desequilibrar o pH sanguíneo o que pode levar a um coma ou até a morte.
3.1 CONCLUSÃO
A solução tampão tem efeito importantíssimo para a regulação da homeostasia do organismo. Fatores externos como alimentos ácidos (refrigerantes), medicamentos, ou internos como desordens metabólicas, pequenas e até mesmo alguma doença, tanto de características renais ou respiratória, ou diabetes, até mesmo um jejum, fazem alterações no pH sanguíneo e dos demais líquidos orgânicos. Dessa forma, o corpo dispõe de solução tampão, um ácido fraco e uma base conjugada, com a finalidade de evitar mudanças bruscas no pH, como uma acidose ou alcalose, de ordem metabólica ou respiratória, causando danos ao indivíduo.
PRÁTICA 02: Dosagem de proteínas totais e albumina
4. PRÁTICA 02: Dosagem de proteínas totais e albumina
4.1 Objetivos:
· Avaliar se a concentração de proteínas totais está de acordo com o valor referência para um indivíduo saudável;
· Discutir as possíveis causas clínicas que podem interferir no resultado do exame de dosagem de proteínas totais.
Materiais e métodos: 
• Béquer
• Tubos de ensaio
• Frasco lavador
• Pipetador automático
• Pipeta
• Espectrofotómetro
• Biureto
• Cubetas
• Erlenmeyer
• Soro (amostra)
• Solução padrão
4.2 Dosagem de proteínas totais:
· FUNDAMENTOS DA REAÇÃO
As ligações peptídicas das proteínas (-HN-CO-) reagem com íons cúpricos em meio alcalino (Reagente do Biureto) formando um complexo de coloração violeta, cuja absorbância medida em 545 nm é diretamente proporcional à concentração de proteínas na amostra.
· TÉCNICA
Identificar três tubos de ensaio com. “Branco”, “Teste” e “Padrão”.
	Tubos
	Teste
	Padrão
	Branco
	Reagente do Biureto
	2,5ml
	2,5ml
	2,5ml
	Soro (amostra)
	50µl
	-
	-
	Solução Padrão
	-
	50µl
	-
	NaOH
	2gts
	2gts
	2gts
	Leitura
	
	
	
4.3 Dosagem de albumina
· Fundamentos da reação:
Na dosagem da albumina, está com o Verde de Bromocresol (específico da albumina), em meio ácido, formando um complexo corado de verde. A intensidade da cor é proporcional à concentração de albumina na amostra.
· Técnica
Identificar três tubos de ensaio com: “Branco”, “Teste” e Padrão.
	Tubos
	Branco
	Teste
	Padrão
	Amostra(soro)
	-
	10µl
	-
	Solução padrão
	-
	-
	10µl
	Reagente de cor
	2,5ml
	2,5ml
	2,5ml
 
Foi homogeneizado por 05 minutos, e a leitura foi feita em 630nm, zerando o espectrofotômetro com o tubo branco. 
· Cálculo
Proteínas (g/dl) = Absorbância do teste X CP· Valores de referência
· Proteínas Totais: 6,0 a 8,5 g/dl
· Albumina: 3,5 a 5,0 g/dl
Absorbância do Padrão
 
Albumina (g/dl) = Absorbância do teste X CPAbsorbância do Padrão
4.4 Resultados0,216x4 = 3,130
0,276x4
Proteínas (g/dl) = Absorbância do Teste x CP 
			Absorbância do Padrão
Albumina (g/dl) = Absorbância do Teste x CP 0,556x4 = 2,39
0,236x4
			Absorbância do Padrão 
4.5 Discussão
a) Qual a importância clínica da dosagem de proteínas totais e das frações: fibrinogênioo, abumina e globulina? Dê exemplos e explique.
a) A medida das proteínas totais no sangue reflete o estado nutricional da pessoa, e pode ser usada no diagnóstico de doenças renais, hepáticas e de outros distúrbios. Se os níveis de proteínas totais estiverem alterados, devem-se fazeroutros testes para identificar qual a proteína específica que está alterada, para que possa ser feito o diagnóstico correto. Os métodos geralmente mais utilizados são o do biureto, de Lowry e de absorção de proteínas no ultravioleta.
b) Leia o artigo entregue em sala de aula e discuta qual a explicação para a dosagem de proteínas como método diagnóstico para a doença descrita.
De acordo com o artigo, a explicação para a dosagem de proteínas como método diagnóstico para a doença descrita é que o método foi através da dosagem de proteína monoclonal e o único exame capaz de medir a quantidade desses elementos no sangue se ela estiver acima de 3,9 g/dL. 
c) Que medicações ou situações clínicas podem interferir na avaliação bioquímica de um paciente que realize dosagem de proteínas totais e albumina? Explique. Medicamentos que utilizam compostos hormonais na sua composição. Por exemplo, pílula anticoncepcional, esteroides e insulina.
d) Que outras técnicas de laboratório podem ser utilizadas para a dosagem desses de proteínas totais e suas frações?
 O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas totais em diversos meios, sendo eles: soro ou plasma sangüíneo, líquido cérebro espinhal (líquor), urina, alimentos, saliva, fibrinogênio e tecido animal. O método de biureto tem sido, também, utilizado em análise por injeção em fluxo, assim como em alguns métodos cinéticos. Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas, este método não é muito sensível, como foi destacado por diversos autores, colocando-o em grande desvantagem, em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis. Mesmo assim, o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sanguíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores, bem como para a determinação de proteínas totais em saliva e leite, quando comparado com outros métodos.
4.6 Conclusão
A dosagem da proteína total e da albumina é de grande importância para verificar como está a função de alguns órgãos (fígado e rins), por exemplo, pois o seu funcionamento parcial é sinal de doenças graves que, se não tratadas, podem levar a óbito.
5. Prática 3: Cinética Enzimática
5.1 Objetivos
· Observar a atividade da enzima catalase em diferentes condições (pH, temperatura, variação da concentração na presença do inibidor e substrato).
5.2 Materiais e Métodos:
· Água de alface (3 folhas de alface em 300ml de água destilada)
· H2O2 4%
· Solução de albumina
· HCL 1N
· NaOH 1N
· Soluções tampão pH 4,5 e 7
· Vitamina C
· Banho-maria
· Tubos de ensaio
· Estante para tubos de ensaio
· Pipetas
5.3 Efeito da temperatura:
	Tubo
	Água
Oxigenada
(ml)
	Água destilada (ml)
	Solução de albumina(gotas)
	Água de alface(ml)
	Temperatura(ºC)
	Resultado
(mm de espuma)
	1
	1,0
	2,0
	6
	3,0
	0
	16mm
	2
	1,0
	2,0
	6
	3,0
	25
	49mm
	3
	1,0
	2,0
	6
	3,0
	37
	33mm
	4
	1,0
	2,0
	6
	3,0
	70
	0mm
	5
	1,0
	2,0
	6
	3,0
	100
	0mm
	
	
	
	
	
	
	
5.4 Efeito do pH
	Tubos
	Água
Destilada
(ml)
	Tampão
	HCL
(gotas)
	NaOH
(gotas)
	Água de alface
	Sol.
Albumina
(gotas)
	H2O2
(ml)
	Resultado
(mm de espuma)
	1
	2,0
	-
	2
	-
	3,0
	6
	1,0
	2mm
	2
	-
	pH=4
	-
	-
	3,0
	6
	1,0
	5mm
	3
	-
	pH=5
	-
	-
	3,0
	6
	1,0
	55mm
	4
	-
	pH=7
	-
	-
	3,0
	6
	1,0
	58mm
	5
	2,0
	-
	-
	-
	3,0
	6
	1,0
	4mm
5.5 Efeito da concentração do substrato
	Tubo
	H2O2(ml)
	H2O destilada(mL)
	Albumina
(gotas)
	Água de alface
(ml)
	Resultado (mm de espuma)
	1
	-
	2,0
	6
	5,0
	4mm
	2
	0,4
	1,6
	6
	5,0
	30mm
	3
	0,8
	1,2
	6
	5,0
	25mm
	4
	1,2
	0,8
	6
	5,0
	40mm
	5
	1,6
	0,4
	6
	5,0
	35mm
	6
	2,0
	-
	6
	5,0
	80mm
5.6 Ação da vitamina C (antioxidante) 
	Tubo
	H2O2(ml)
	H2O destilada(mL)
	Sol. De vitamina C (ml)
	Albumina
(gotas)
	Água de alface(ml)
	Resultado (mm de espuma)
	1
	-
	2,0
	0,5
	6
	5,0
	0mm
	2
	0,4
	1,6
	0,5
	6
	5,0
	5mm
	3
	0,8
	1,2
	0,5
	6
	5,0
	11mm
	4
	1,2
	0,8
	0,5
	6
	5,0
	12mm
	5
	1,6
	0,4
	0,5
	6
	5,0
	15mm
	6
	2,0
	-
	0,5
	6
	5,0
	7mm
5.7 Discussão 
a) Identifique a classe à qual pertence a enzima do experimento e sua importância biológica. Justifique.
A catalase pertence a classe oxidorredutose. 
b) Qual seria o efeito da adição de um inibidor competitivo ao sistema? Justifique.
A velocidade da reação seria reduzida. Substâncias inibidoras que tem como função reduzir a velocidade de determinada reação. No caso de reações catalisadas por enzimas, os inibidores geralmente atuam de alguma forma na enzima, reduzindo sua atividade. Os inibidores podem ser de dois tipos principais, reversíveis ou irreversíveis. Dentre os inibidores reversíveis, existem quatro tipos: inibidores competitivos, não competitivos, acompetitivos e mistos. Os inibidores competitivos possuem estrutura semelhante a do substrato e reduzem a velocidade da reação ao ligarem-se nos sítios ativos das enzimas, impedindo assim com que ela se ligue ao substrato.
c) Pesquise um fármaco importante para sua área de atuação e que tenha como mecanismo de ação a inibição enzimática. Justifique.
 Cloridrato de sibutramina monoidratado, é um medicamento de uso oral para o tratamento da obesidade (excesso de peso), que leva à perda de peso, através de um duplo mecanismo: redução da ingestão de alimentos pelo aumento da saciedade e diminuição da fome; e prevenção do declínio do gasto energético que segue a perda de peso. A sibutramina exerce seus efeitos terapêuticos através da inibição da recaptação da noradrenalina, serotonina e dopamina. A sibutramina e seus principais metabólitos farmacologicamente ativos (M1 e M2) não agem através da liberação de monoaminas. A sibutramina exerce suas ações farmacológicas predominantemente através de seus metabólitos amino secundário (M1) e primário (M2), que são inibidores da recaptação de noradrenalina, serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT) e dopamina. O composto de origem, a sibutramina, é um potente inibidor da recaptação de serotonina. Em tecido cerebral humano, M1 e M2 inibem também a recaptação de dopamina in vitro, mas com uma potência três vezes mais baixa do que a inibição da recaptação de serotonina ou noradrenalina.
6. Prática 4: Dosagem de transaminases
6.1 Objetivos:
Determinar quantitativamente a Aspartato aminotransferase (AST/TGO) e a Alanina aminotransferase (ALT/TGP) em amostras de soro humano.
1. Técnica/Cálculos:
Tabelas com tubos de ensaio e reagentes:
	
	Branco (B)
	Calibrador/Padrão(P)
	Amostra(T)
	Calibrador
	
	25µl
	505
	Amostra teste
	
	620
	25µl
	Reagente
	1ml
	1ml
	1ml
Tabela 1: Medidas de TGO
 
 Tabela 2: Medidas de TPG1
	
	Branco (B)
	Calibrador/Padrão(P)
	Amostra(T)
	Calibrador
	
	25µl
	0,037
	Amostra teste
	
	0,087
	25µl
	Reagente
	1ml
	1ml
	1ml
 
 Tabela 3: Medidas de TPG2
	
	Branco (B)
	Calibrador/Padrão(P)
	Amostra(T)
	Calibrador
	
	25µl
	0,023
	Amostra teste
	
	0,069
	25µl
	Reagente
	1ml
	1ml
	1ml
· Cálculos: 
· Valores de referência:
 Soro:
 AST/TGO: 4 a 19 UI/L (4 a 36 U/ml)
 ALT/TGP: 2 a 17 UI/L (4 a 32 U/ml)
· Referências:
6.2 Discussão
a) Comente sobre algumas condições clínicas que podem justificar o valor encontrado em aula prática para a dosagens as transaminases? Justifique bioquimicamente.
Em aula prática, com as dosagem de transaminase, foi possível detectar frete aos valores de referência que, tanto o TGO e o TGP estão dentro dos valores de normalidade.
 Os aumentos das transaminases são por desordens hepatocelulares. A AST (GOT) e a ALT (TGP) são enzimas intracelulares presentes em grandes quantidades no citoplasma dos hepatócitos. Em dano hepatocelular leve a forma predominante no soro é citoplasmática, enquanto em lesões graves há liberação da enzima mitocondrial, elevando arelação AST/ALT. Portanto, são encontrados níveis mais altos de TGO e TGO em desordens que causam a morte de numerosas células (necrose hepática extensa).
· Exemplos de doenças causadas pela desordem do TGO e TGP:
· Mononucleose infecciosa: 
 Pode ocorrer elevações de até 20 vezes os valores de referência, com o envolvimento hepático.
· Colestase extra-hepática aguda:
 Entre as várias causas estão: retenção de cálculos biliares, carcinoma de cabeça de pâncreas e tumor dos ductos biliares.
· Infarto do miocárdio:
 Ao redor de 6 a 8 horas após o infarto do miocárdio, a atividade sérica da AST (GOT) começa a elevar, atingindo o pico máximo (20 a 200 U/mL) entre 18 e 24 horas e, progressivamente, retornando aos valores de referência ao redor do 5º dia. A AST (GOT) não altera na angina pectoris, pericardite e enfermidade vascular miocárdica.
b) Que medicações podem interferir na avaliação bioquímica de um paciente que realize dosagem de transaminases? Explique.
 medicamentos podem elevar as transaminases, entre eles temos os seguintes princípios ativos:
· para alívio da dor: paracetamol, aspirina, codeína, morfina, acetaminofeno, ibuprofeno(...)
· antitanque apopléctico: Feniltoina, fenobarbital, Carbamazepina(...)
· Drogas cardiovasculares como: amiodarona
c) De que maneira as transaminases podem ser utilizadas como marcadores para o infarto do miocárdio (considere as diferenças isoenzimas)? Que outros marcadores bioquímicos são utilizados para este fim? Explique. 
A insuficiência circulatória provoca alterações celulares que podem variar desde discretas perdas de algumas propriedades da membrana até a morte celular. Em decorrência destas modificações, algumas substâncias intracelulares ganham o espaço intersticial e a circulação sanguínea, resultando em aumento transitório dos níveis circulantes. Estas substâncias incluem a aspartato aminotranferase, a mioglobina, a creatina quinase, a desidrogenase láctica, as troponinas, entre outras, e têm sido identificadas como marcadores de lesão cardíaca. Dessas, as enzimas mais utilizadas na investigação do infarto agudo do miocárdio são: a creatina quinase (CK) e a lactato desidrogenase (LD), também como suas isoenzimas.
· Exames que podem ser usados como indicar para infarto agudo do miocárdio:
· Aspartato aminotransferase – AST
As alterações das transaminases podem ser analisadas ao redor de 6 a 8 horas após o infarto do miocárdio, a atividade sérica da AST (GOT) começa a elevar, atingindo o pico máximo (20 a 200 U/mL) entre 18 e 24 horas e, progressivamente, retornando aos valores de referência ao redor do 5º dia.
· Mioglobina
A mioglobina é uma proteína constituinte das células dos músculos esquelético e cardíaco. Concentrações elevadas são observadas 1 a 2 horas após o início da dor, atingindo o pico em 12 horas e, em geral, normalizando 24 horas após um episódio único. Esta curva contribui para que a determinação seriada seja útil no diagnóstico de infarto em pacientes com dor precordial recorrente.
· Troponinas - cTnT e cTnI
Troponinas são proteínas estruturais envolvidas no processo de contração das fibras musculares esqueléticas e cardíacas.A elevação dos níveis de cTnI no soro ocorre entre 4 e 6 horas após a dor precordial, atinge um pico em 12 horas e permanece elevada por 3 a 10 dias após um evento isquêmico único. Ocorre um segundo pico de menor intensidade, entre o terceiro e o quarto dia após o infarto.
6.3 Concluusão
7. Referencias 
· Nelson, David L.; COX, Michael M. Princípios de bioquímica de Lehninger. Porto Alegre: Artmed, 2011. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2014.
· Ação da enzima catalase. Disponível em: http://pontociencia.org.br/experimentos/visualizar/catalase-acao-enzimatica/998 Acesso em: 21 de setembro de 2018
· HENRY, JB. Diagnósticos clínicos e tratamento por métodos laboratoriais. 19ªed. 
Manole, 1999
· Bioquímica Clínica: Principais Enzimas e Perfil Cardíaco
Disponível: https://mundodababsi.wordpress.com/2012/11/11/bioqumica-clnica-principais-enzimas-e-perfil-cardaco/ Acesso em: 18 de novembro de 2018 
· PROTOCOLOS CLÍNICOS DOS EXAMES LABORATORIAIS Disponível em: http://www.uberaba.mg.gov.br/portal/acervo/saude/arquivos/oficina_10/protocolos_exames_laboratoriais.pdf Acesso em: 18 de novembro de 2018
· ENZIMAS CLÍNICAS: AÇÃO, FUNDAMENTO E APLICAÇÕES Disponível em: https://www.ufrgs.br/lacvet/site/wp-content/uploads/2015/07/enzimas_clinicas.pdf Acesso em: 18 de novembro de 2018
 
GRÁFICO COM A VARIAÇÃO DE TEMPERATURA
Temperatura	0	25	37	70	100	16	49	33	0	0	TEMPERATURA
ESPUMA(mm)
GRÁFICO COM A VARIAÇÃO DE pH
Temperatura	0	4	5	7	2	5	55	58	4	pH
ESPUMA(mm)
GRÁFICO COM A VARIAÇÃO DO SUBSTRATO
Temperatura	0	0.4	0.8	1.2	1.6	2	4	30	25	40	35	80	SUBSTRATO
ESPUMA(mm)
GRÁFICO COM A VARIAÇÃO DE SUBSTRATO/VIt.C
Temperatura	0	0.4	0.8	1.2	1.6	2	0	5	11	12	15	7	Vit.C(antioxidanete)
ESPUMA(mm)